Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / Investiga-se, nesta tese, o corpo, a partir da trilogia freudiana: inibição, sintoma e angústia. De forma particular, interessam à pesquisa o corpo ideal, propagado pela cultura, e seus efeitos. Para tanto, desenvolvemos os elementos teóricos de Freud e Lacan, a partir dos quais se dividiu a tese em três partes. Na primeira parte, considerou-se o conceito de inibição ao lado do da imagem, privilegiando-se o corpo, seu caráter de imagem e a anorexia. O estudo se baseou na teoria freudiana do narcisismo, incluindo-se seus derivados, as noções de Eu ideal, Ideal do Eu e o Estádio do Espelho lacaniano. Na intenção de ilustrar a busca imperativa por um corpo ideal, apresentou-se um caso clínico. Demarquei a segunda parte desta tese elucidando o sintoma no corpo. Para verificar sua incidência, revisitou-se a História, desde Hipócrates até o início da psicanálise, quando a histeria aparece na clínica; ressaltando-se alguns casos clínicos da clínica freudiana. Verifiquei que o corpo tem ressonância com alguns conceitos essenciais da psicanálise, tal como a pulsão e o inconsciente, além de ilustrarem sua relação com o narcisismo, o sintoma e a angústia. Na terceira parte, privilegiei o estudo da angústia relacionada ao corpo em Freud e Lacan, e o referencial usado para essa etapa foi a clínica da fobia. Procurou-se, ainda, exemplificar as diversas figuras do corpo tal como modificado na atualidade. Como resultado desta pesquisa, verificou-se que ser dono do próprio corpo não significa ficar reduzido a ele, mas apropriar-se de sua imagem. Embora o corpo fale através de seus sintomas, ele pode também ganhar nova moldura, através dos significantes constituídos pela linguagem. Foi possível constatar, como as diferentes dimensões do corpo é ligada aos três registros propostos por Lacan: imaginário, simbólico e real, percebendo-se, por fim, o lugar que o corpo ganha na topologia borromeana, na última etapa do ensino de Lacan. / In this thesis, we have investigated the body, from the Freudian trilogy: inhibition, symptom and anxiety. In a particular way, we were interested in the research of the ideal body, propagated by the culture and its effects. Therefore, we developed Freud and Lacan theoretical elements, as from we divided the thesis in three parts. Firstly, we considered the concept of inhibition besides the image concept, privileging the body, its image character and anorexia. The study based in the freudian theory of narcissism, its derivatives, notions of ideal I, Ideal of I and the lacanian Stage of Mirror. Intent to illustrate the imperative search of the ideal body, a clinical case was presented. I plotted the second part of this thesis elucidating the symptom in the body. To verify its incidence, History was revisited, from Hipocrates to the beginning of psychoanalysis, when hysteria appears in the clinic; emphasizing some clinical cases from the freudian clinic. I verify that the body has resonance with some essential psychoanalysis concepts such as pulsion and unconscious and also illustrate its relationship with narcissism, symptom and anxiety. Lastly, I privileged the study of anxiety related to the body in Freud and Lacan and the referential used in this step was the clinic of phobia. We also tried to exemplify many figures of the body as they are modified nowadays. As a result of this research, it was found that owning one's own body does not mean it to be reduced, but to appropriate his image. Although the body speaks through its symptoms, it can also gain new frame through the signifiers constituted by language. It was possible to find, as the different dimensions of the body is linked to three records proposed by Lacan: imaginary, symbolic and real, realizing, finally, the place that the body gains in borromean topology in the final stage of Lacan.

Mesmo com o grande número de estudos relacionados à proteases do subtipo B e de como suas mutações podem interferir na estrutura, na resistência a inibidores e na eficiência catalítica da enzima, existe ainda uma lacuna de como as mudanças polimórficas de proteases de HIV de outros subtipos de HIV-1 interferem nesses fatores. Nesse contexto insere-se esse trabalho, que utilizou proteases de HIV-1 isoladas de pacientes brasileiros HIV-1 infectados com o subtipo F, e outros dois mutantes, sendo que um do subtipo F e outro do subtipo B para ensaios frente a seis inibidores comercialmente disponíveis: amprenavir, indinavir, lopinavir, nelfinavir, ritonavir e saquinavir. Nossos resultados experimentais revelam que os seis inibidores comerciais estudados são significantemente menos ativos para o subtipo F e para as mutantes quando comparados ao subtipo B. Além disso, os valores de vitalidade dessas proteases também são considerados maiores que os obtidos para a proteína selvagem do subtipo B. O acúmulo de mutações comumente detectadas e o polimorfismo natural tornam a protease selvagem do subtipo F cataliticamente suficiente para manter a viabilidade do vírus e garantir alto grau de resistência cruzada frente a todos os inibidores estudados. / Despite years of intense research around the world, HIV continues to represent considerable therapeutical challenge. In order to gain more insights into resistance of polymorphic mutations of existing HIV subtypes toward commercially available pharmaceutics, we studied inhibition of subtypes B and F HIV proteases (PRs) [native and two mutant enzymes clinically identified in Brazilian patients] by six commercial inhibitors (amprenavir, indinavir, lopinavir, nelfinavir, ritonavir and saquinavir). Our results show that all these inhibitors have significantly higher Ki values for the subtype F HIV PR (Fwt) and both mutant enzymes than that for the B subtype HIV PR (Bwt). Furthermore, the biochemical fitnesses of these proteases, or their vitalities, are also considerably higher than that of Bwt. The accumulation of commonly detected resistant mutations in HIV PRs with natural polymorphisms turns Fwt sufficiently catalytically active to guarantee the virus viability and confers it a large degree of cross resistance against all studied inhibitors.

Diidroorotato desidrogenases (DHODHs) catalisam a quarta e única reação de oxidorredução na via de síntese de novo de nucleotídeos de pirimidina, que envolve a oxidação do diidroorotato (DHO) a orotato (ORO) em um mecanismo dependente do cofator FMN e de aceptores de elétrons. A relevância de pirimidinas para a proliferação e manutenção celular determina a DHODH como um potencial alvo terapêutico. DHODHs são divididas em duas classes baseado em comparações estruturais e na sequência de resíduos: classe 1, a qual é subdividida em classe 1A e 1B, e classe 2. A proteína utilizada como modelo em nosso estudo sobre as DHODHs de tripanosomatídeos classe 1A é a enzima de Leishmania major (LmDHODH). As metas principais desse trabalho foram de contribuir para a compreensão sobre o mecanismo de ação das DHODHs de classe 1A e propor estratégias de inibição seletiva. Inicialmente, ensaios no estado estacionário e pré-estacionário foram realizados para caracterização do ciclo catalítico da LmDHODH e permitiram a análise das etapas redutivas e oxidativa de forma independente e sua comparação com o ciclo global. Foi também analisada a interação da LmDHODH com os produtos da reação por meio de ensaios de cinética, titulação espectral e titulação isotérmica calorimétrica. Após análises topológicas baseadas na estrutura cristalográfica da LmDHODH, diferentes mutantes foram construídos e caracterizados estruturalmente e cineticamente a fim de investigar a importância de alguns sítios na conformação protéica. Durante a etapa de busca de inibidores, bibliotecas químicas de compostos foram analisadas por meio de interferometria de biocamada e ensaio enzimático. Considerando os resultados obtidos, foi possível pela primeira vez identificar um mecanismo cinético cooperativamente positivo frente à ligação do DHO com coeficiente de Hill (h) próximo a 2. Além disso, nossos resultados mostram que o grau da cooperatividade na ligação do DHO é afetado pelo ORO. A comparação entre os parâmetros obtidos para o estado estacionário e pré-estacionário aliada aos estudos da interação da LmDHODH com os produtos da reação, sugerem que a liberação do ORO é a etapa limitante na velocidade global da reação, o que não é verdade para a enzima humana (DHODH classe 2). A partir das análises dos mutantes, foi possível correlacionar o comportamento cooperativo da enzima LmDHODH com a conversa cruzada entre os sítios-ativos mediada pela interface dimérica. Além disso, foi possível observar que a dinâmica conformacional do loop catalítico é extremamente relevante no mecanismo global da reação e existe uma correlação entre os rearranjos do loop catalítico e a interface dimérica. Nossos resultados fornecem uma importante contribuição para o entendimento dos detalhes do mecanismo catalítico adotado pelas DHODHs de classe 1A. Eles também revelam diferenças chave no mecanismo adotado pelas enzimas de classe 1A e classe 2, os quais podem ser explorados no desenvolvimento de inibidores potentes e seletivos contra a LmDHODH. No que se refere à busca por inibidores, alguns hits foram obtidos por meio da varredura da biblioteca de fragmentos do Drug Discovery Unit (DDU) utilizando interferometria de biocamadas. Além disso, um ensaio enzimático de larga escala (hightroughtput) foi desenvolvido para a LmDHODH e permitiu a triagem de alto desempenho nas bibliotecas de fragmentos e diversidade química. Hits foram validados por meio de ensaio de potência e bons inibidores foram encontrados em ambas as bibliotecas. As varreduras identificaram diferentes séries de compostos como pontos de partida para química medicinal e investigações estruturais. Dois hits identificados a partir da biblioteca de diversidade química apresentam excelentes valores de IC50, 260 nM e 1,07 ?M. / Dihydroorotate dehydrogenases (DHODHs) catalyze the fourth and only redox reaction in the de novo pyrimidine biosynthetic pathway, the oxidation of dihydroorotate (DHO) to orotate (ORO) through a mechanism dependent on the FMN cofactor and electron acceptors. The significance of pyrimidine for cell proliferation and maintenance determine DHODH as potential therapeutic target. DHODHs have been distinguished in two major classes based on sequence and structural comparisons: class 1, which is further divided into subclasses 1A and 1B, and class 2. The model protein in our studies on trypanosomatid class 1A DHODHs is the enzyme from Leishmania major (LmDHODH). The essential question in this study was to contribute for the understanding about the catalytic and inhibition mechanisms of class 1A DHODHs . First, steady-state and pre-steady state kinetic approaches have been used to characterize the catalytic cycle of LmDHODH and have allowed the comparison between the global cycle and each independent half-reaction. Also, the interaction of LmDHODH with the products of the reaction was analyzed by kinetic, spectral titration and isothermal titration calorimetry assays. After topographical analysis based on the LmDHODH crystallographic structure, different mutants were constructed and structurally and kinetically characterized. For inhibitor search, chemical libraries of compounds were screened by using biolayer interferometry binding and enzymatic assays. Based on our results, for the first time, steady-state kinetics analysis of class 1A allowed the observation of a positive cooperativity for DHO binding with a Hill coefficient (h) value close to 2. Moreover, our results show that the degree of cooperativity in DHO binding is affected by ORO. Comparison between steady and pre-steady-state parameters together with studies of interaction for LmDHODH with both products, suggests that ORO release is the rate-limiting step in overall catalysis with is not true to the human enzyme (class 2 DHODH). The hybrid approach used to characterize LmDHODH mutants allowed us to propose that the cooperative behavior is related with the cross-talk between the two active sites mediated by the dimer interface. Also, the conformational dynamics of the catalytic loop is very relevant in the global mechanism of the reaction and there is a correlation between catalytic loop rearrangement and dimer interface. Our results bring an important contribution for a better understanding of the detailed catalytic mechanism adopted by class 1A DHODHs. They also reveal key differences in the enzymatic mechanism adopted by class 1A and class 2 DHODHs, to be exploited in the development of potent and selective LmDHODH inhibitors. Regarding to inhibitors search, few hits were obtained by using screening of Drug Discovery Unit (DDU) fragment library with biolayer interferometry binding assay. Also, an end-point enzymatic assay was developed for LmDHODH and the optimisation carried out at the DDU provided a reliable HTP assay using both DDU\'s fragment library and small diversity set. Hits were validated using a potency assay with good inhibitors found using both libraries. The screens identified a number of series as starting points for medicinal chemistry and structural investigations. Two hits identified from small diversity set exhibit great IC50 values, 260 nM and 1.07 ?M.

Submitted by Jean Medeiros (jeanletras@uepb.edu.br) on 2017-11-22T13:03:36Z No. of bitstreams: 1 PDF - Áurea Marcela de Souza Pereira.pdf: 23095025 bytes, checksum: ca7df5818d6387801b52ad5382678d07 (MD5) / Approved for entry into archive by Secta BC (secta.csu.bc@uepb.edu.br) on 2017-12-06T18:34:22Z (GMT) No. of bitstreams: 1 PDF - Áurea Marcela de Souza Pereira.pdf: 23095025 bytes, checksum: ca7df5818d6387801b52ad5382678d07 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-12-06T18:34:22Z (GMT). No. of bitstreams: 1 PDF - Áurea Marcela de Souza Pereira.pdf: 23095025 bytes, checksum: ca7df5818d6387801b52ad5382678d07 (MD5) Previous issue date: 2016-08-29 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico - CNPq / The goat whey is considered a byproduct of the cheese production and is often discarded as effluent without any treatment, becoming a source of pollution. Alternatively, the use of whey for the production of dairy beverages has been a very attractive option, especially due to its nutritional value. Probiotic cultures are composed of microorganisms that confer health benefits for the host, can be used in fermented beverages. Several food proteins contain physiologically active peptides, known as bioactive peptides. Milk proteins are considered a major source of potentially inhibitory peptides on the activity of the angiotensin-converting enzyme (ACE). This study aimed to prepare fermented dairy beverages produced with goat cheese whey powder considering the addition of a probiotic microorganism and its viability in the product, as well as, to evaluate bromatological, microbiological and physicochemical properties during the storage, and also to investigate the inhibitory activity on the ACE. The fermentation process was performed for the beverages of the control trial (BLC), added with Streptococcus thermophilus TA 40, and the probiotic trial (BLP), added with Streptococcus thermophilus TA 40 and Lactobacillus casei BGP 93. The chemical composition of the whey powder and the final milk beverages was evaluated, as well as the pH, titratable acidity and viability of the microorganisms in the reconstituted whey after the addition of the cultures, before fermentation (T0), after fermentation (TF), and after 1, 7, 14 and 21 days of storage at 4 °C. The instrumental texture for both beverages was analyzed during the storage period. The sensory analysis was performed on D7, D14 and D21 sampling periods. The protein content was analyzed for the reconstituted whey (SR) and for beverages on D1, D7, D14 and D21 sampling periods. The degree of proteolysis by the o-ftaldialdeíde (OPA) method and sodium dodecyl sulfate-polyacrylamide gel electrophoresis (SDS-PAGE) analysis were carried out to evaluate the protein degradation in samples during the processing and storage. The inhibitory activity on the angiotensin converting enzyme (ACE) was measured in order to obtain the bioactive potential of the product. The pH during fermentation (T0 and TF) and storage decreased from 5.71 to 4.92 and from 5.72 to 4.97 for BLC and BLP, respectively. The acidity for both trials increased significantly (p<0.05) between T0 and TF and showed significant differences neither between storage periods nor between trials (p>0,05). The viability of S. thermophilus was in accordance with the levels required by the Brazilian legislation for fermented dairy beverages, showing populations higher than 10 CFU/ml in the final product, during the whole storage period. Viable L. casei cells in the probiotic trial were consistent with the recommended levels by the literature (above 10 – 10 CFU/ml) for products with probiotic benefits. The final products were in accordance with the Brazilian legislation for microbial contaminants, which present less than 3 most probable number (MPN)/ml to 100 MPN/ml for coliforms at 30/35 °C and at 45 °C. The texture parameters did not differ significantly (p>0.05) between the trials and the storage period. The presence of the probiotic microorganism did not result in significant differences between trials in the sensory evaluation. The protein content of the SR was significantly higher (p<0.05) than that verified in the dairy beverages during the storage periods for the two trials, which showed values of 2.2 g/100 g for BLC and of 2.1-2,17 g/100 g for BLP. Both beverages showed, during the whole storage, protein levels higher than the minimum of 1.0 g/100 g required by the Brazilian legislation for dairy beverages with added ingredients. Although the degree of proteolysis did not differ significantly between trials and storage time (p>0.05), there was a tendency for the increasing of this parameter during the storage period, as well as a trend of higher proteolysis in the probiotic trial, suggesting that the addition of L. casei promoted the release of peptides, since it was also found electrophoretic bands with larger size ranges for BLP in relation to those verified for BLC. For the ACE assay, both BLP and BLC were able to inhibit the enzyme under study, with increased values for BLP on D1, close to that found with captopril (reference medicine to treat hypertension). / O soro caprino é considerado um subproduto da produção queijeira e muitas vezes descartado sem nenhum tratamento como efluente, tornando-se uma fonte de poluição. Como alternativa, a utilização de soro de queijo para a produção de bebidas lácteas tem sido uma opção muito atraente, notadamente devido ao seu valor nutricional. Culturas probióticas são constituídas de microrganismos que conferem benefícios à saúde do hospedeiro, podendo ser utilizadas em bebidas fermentadas. Muitas proteínas dos alimentos contêm peptídeos fisiologicamente ativos, chamados de peptídeos bioativos As proteínas do leite são consideradas uma das principais fontes de peptídeos com potencial de inibição da atividade da enzima conversora de angiotensina (ACE). Este trabalho teve por objetivo elaborar bebidas lácteas fermentadas produzidas a partir do soro de queijo de cabra em pó considerando a adição de um microrganismo probiótico e sua viabilidade no produto e avaliar as propriedades bromatológicas, microbiológicas e físico-químicas ao longo do armazenamento, e a capacidade inibitória sobre a ACE. O processo de fermentação foi realizado para as bebidas lácteas controle (BLC), adicionada de Streptococcus thermophilus TA 40 e probiótica (BLP), adicionada de Streptococcus thermophilus TA 40 e Lactobacillus casei BGP 93. Foram avaliados os valores de composição do soro em pó e das bebidas lácteas finais, pH, acidez titulável, viabilidade dos microrganismos no soro reconstituído após a adição das culturas, antes da fermentação (T0), depois da fermentação (TF), após 1, 7, 14 e 21 dias de armazenamento a 4 °C (D1, D7, D14 e D21, respectivamente). A textura instrumental para ambas as bebidas foi analisada durante o período de armazenamento. A análise sensorial realizada nos tempos D7, D14 e D21. A quantificação de proteínas foi efetuada no soro reconstituído (SR) e nas bebidas nos tempos D1, D7, D14 e D21. As análises de grau de proteólise pelo método o-ftaldialdeído (OPA) e eletroforese em gel de poliacrilamida-dodecil sulfato de sódio (SDS-PAGE) foram realizadas para avaliar a degradação proteica nas amostras ao longo do processamento e armazenamento. A atividade inibidora sobre a ACE foi avaliada a fim de se obter a potencial atividade bioativa do produto. Os valores de pH durante a fermentação (T0 e TF) e o armazenamento diminuíram de 5,71 para 4,92 e de 5,72 para 4,97, para BLC e BLP, respectivamente. A acidez para os dois tratamentos aumentou significativamente (p<0,05) entre T0 e TF, mas não diferiu significativamente nem entre os períodos de armazenamento (D1 a D21), nem e os tratamentos (p>0,05). A viabilidade de S. thermophillus esteve em conformidade com o exigido pela legislação para bactérias láticas viáveis em bebidas lácteas fermentadas, apresentando populações superiores a 10 UFC/ml, no produto final, durante todo o período de armazenamento. A viabilidade de L. casei, no tratamento probiótico, foi condizente com o valor recomendado pela literatura (acima de 10 – 10 UFC/ml) para produtos com benefícios probióticos. Os produtos finais estiveram em conformidade com a legislação para contaminantes, apresentando resultados menores que 3 número mais provável (NMP) /ml até 100 NMP/ml, para coliformes a 30/35 °C e a 45 °C. Os parâmetros de textura não diferiram significativamente (p>0,05) quanto aos tratamentos e ao período de armazenamento. A presença do microrganismo probiótico não resultou em diferença significativa entre os tratamentos na avaliação sensorial. O teor proteico do SR foi significativamente maior (p<0,05) que o verificado nas bebidas lácteas dos dois tratamentos, em todos os períodos de amostragem, as quais apresentam valores de 2,2 g/100 g na BLP e de 2,1-2,17 g/100 g na BLP. Ambas as bebidas apresentaram durante todo o armazenamento teores proteicos maiores que o mínimo de 1,0 g/100 g exigido pela legislação para bebidas lácteas com adições. O grau de proteólise, embora não tenha diferido entre os tratamentos e o tempo de amostragem (p>0,05), apresentou uma tendência de aumento ao longo do período de armazenamento, assim como tendência de maior proteólise no tratamento probiótico, sugerindo que a adição de L. casei promoveu maior liberação de peptídeos, pois também foram encontradas bandas eletroforéticas inferiores a 6 kDa com faixas de tamanhos maiores para BLP em relação à BLC. Para o ensaio com a ACE, tanto BLP quanto BLC foram capazes de inibir a enzima em estudo, com valores superiores para BLP, sendo que para esta bebida no D1 os valores foram próximos ao encontrado para o captopril (medicamento de referência para o tratamento da hipertensão).

Dissertação(mestrado) - Universidade Federal do Rio Grande, Programa de Pós-Graduação em Engenharia e Ciência de Alimentos, Escola de Química e Alimentos, 2010. / Submitted by Caroline Silva (krol_bilhar@hotmail.com) on 2012-08-19T20:54:12Z No. of bitstreams: 1 dissertao -fernanda pagnussatt.pdf: 1418590 bytes, checksum: 8967b30d06e7a8e26859db843f84ec54 (MD5) / Approved for entry into archive by Bruna Vieira(bruninha_vieira@ibest.com.br) on 2012-12-06T18:47:43Z (GMT) No. of bitstreams: 1 dissertao -fernanda pagnussatt.pdf: 1418590 bytes, checksum: 8967b30d06e7a8e26859db843f84ec54 (MD5) / Made available in DSpace on 2012-12-06T18:47:43Z (GMT). No. of bitstreams: 1 dissertao -fernanda pagnussatt.pdf: 1418590 bytes, checksum: 8967b30d06e7a8e26859db843f84ec54 (MD5) Previous issue date: 2010 / Os cereais são fontes de inibidores enzimáticos que agem sobre a α-amilase, alterando a disponibilidade do amido e podem representar uma ferramenta útil para a resistência dos vegetais ao ataque de patógenos. O objetivo do trabalho foi estudar a presença de inibidores enzimáticos em cereais e avaliar sua relação com a susceptibilidade à contaminação fúngica. Amostras de grãos de aveia (UPFA 20 Teixeirinha, UPFA 22 Temprana e UPFA Pampa), trigo (Safira, Ônix e Pampeano) e arroz (BR 410, BR 417 e BR 424) foram moídas,peneiradas e caracterizadas físico-quimicamente. A melhor condição para a extração de inibidores enzimáticos da aveia e trigo foi obtida ao utilizar o sistema de extração etanol 70 % e 12 horas de agitação, com inibição da amilase fúngica em torno de 90 %. Nas cultivares de arroz, o extrato bruto inibiu 96 % da ação da enzima amilase em ensaios in vitro, quando se empregou como extrator etanol 95 % e 7 h de extração. A enzima Fungamyl®, com atividade específica de 20 mg de amido hidrolisado mL-1 mg proteína-1 foi caracterizada bioquimicamente para fornecer os parâmetros necessários para avaliação da presença de inibidores nos extratos. As propriedades antifúngicas desses extratos inibidores foram testadas pelo método de ágar diluído, utilizando como resposta o teor de glucosamina dos fungos. Durante os 14 dias de incubação do Fusarium graminearum as maiores inibições de crescimento fúngico foram alcançadas em presença dos extratos de aveia e de trigo. A próxima etapa será a purificação dos inibidores nas cultivares mais promissoras para aplicar o conhecimento em programas genéticos capazes de aumentar a resistência desses grãos a determinados fungos ou extraí-los para a preservação em conservação de alimentos. / Cereals are sources of enzymatic inhibitors which act upon alpha-amylase disturbing starch availability, generating a higher resistance to the attack of pathogens. This work aim was to study the presence of enzymatic inhibitors in cereals and evaluate its relation with fungi contamination susceptibility. Samples of oat (UPFA 20 Teixeirinha, UPFA 22 Temprana e UPFA Pampa), wheat (Safira, Ônix e Pampeano) and rice (BR 410, BR 417 e BR 424) were milled, homogenized and then its physicochemical properties were analyzed. The best conditions for extraction enzymatic inhibitors of wheat and oat was ethanol 70%, 12 hours of agitation which obtained an inhibition of fungal amylase of 90%. Rice crude extract varieties obtained a 96% of enzymatic amylase inhibition during in vitro tests, when extraction contained 95% of ethanol and 7 h agitation. The enzyme Fungamyl®, which specific activity of 20 mg protein mL-1 mg-1 of hydrolyzed starch, was biochemically characterized to establish the necessary parameters to research inhibitors activity. Antifungal properties from the extracts were analyzed utilizing the diluted agar method, the response was measure through the level of glucosamine produce by the fungi. During 14 days of incubation Fusarium graminearum inhibition was greater in the oat and wheat extracts presence. The next stage it’s to purify of the inhibitors on the cultivars most promising to apply this knowledge to genetic databases that are capable to enhance the resistence of grains to certain species of fungi or extract them for preservation in foods.

Submitted by (lucia.rodrigues@ufrpe.br) on 2017-03-23T16:29:21Z No. of bitstreams: 1 Yrlania de Lira Guerra.pdf: 709734 bytes, checksum: 3d0f17731c8fae1c2730d371c8128560 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-03-23T16:29:21Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Yrlania de Lira Guerra.pdf: 709734 bytes, checksum: 3d0f17731c8fae1c2730d371c8128560 (MD5) Previous issue date: 2013-02-26 / Conselho Nacional de Pesquisa e Desenvolvimento Científico e Tecnológico - CNPq / Brazil is a major producer of world agricultural production is limited by pests and diseases. Among the diseases Sclerotium rolfsii Sacc. is a fungus that causes major losses in agriculture by presenting more than 500 hosts and is present in all tropical regions. The effect of essential oils in control of wilt sclerotia, culture as having reference to the peanut crop, with subsequent recommendation in agricultural management, with a segment phytopathological. Using four different isolates of S. rolfsii was conducted mycelial growth rate, followed by the pathogenicity test in the peanut plants (cultivar BR 1), the SR5 was isolated which had the highest growth rate and more aggressive. The seven essential oils were selected for bioassay of inhibition at concentrations previously established, with the reference dosage of 1000 ppm. Being selected again at low concentrations, from 500 ppm, Palmarosa oil which was showed the highest inhibition rate of formation of sclerotia, the lowest dose tested that was 300 ppm. In the test of suppression of diffusion of oxalic acid was performed with the more aggressive isolated (SR5) with palmarosa oil at 400 ppm, which reduced the rate of mycelial growth by 55%. The bioassay establishment of the pathogen in the substrate and pathogenicity in peanut genotypes in a greenhouse with two genotypes, BR 1 and Senegal. The assay was performed with substrate Baseplant being added 40 g de P2O5 + 15 g KCl + 200 g de humus/kg substrate fertilized. BR Genotype 1 was more susceptible than Senegal, isolated SR5 was more aggressive, leading to higher rates of disease when grown only in substrate. In the validation assay of the oil against S. rolfsii in the greenhouse, was held with seven treatments and at the end of the cycle there was a weight gain of 54% of the pods, 57% in the number of pods/plant and harvest index of 40%. / O Brasil é um dos maiores produtores agrícolas mundiais do amendoim e sua produção é limitada por pragas e doenças. Dentre as doenças, destaca-se a murcha de esclerócio que causa grandes perdas na agricultura por apresentar mais de 500 hospedeiros e estar presente em todas as regiões tropicais. Avaliou-se o efeito dos óleos essenciais no controle da murcha de esclerócio tendo como cultura de referência ao amendoim. Foram testados quatro isolados de Sclerotium rolfsii avaliando-se a sua taxa de crescimento micelial em BDA (batata, dextrose e ágar) e patogenicidade no amendoim (cv. BR 1). O isolado SR5 foi o que apresentou a maior taxa de crescimento e o mais agressivo. Os sete óleos essenciais foram selecionados pela realização do bioensaio de inibição, com concentrações previamente estabelecidas, tendo como dosagem referencial 1000 ppm. Sendo novamente selecionados a baixas concentrações, a partir de 500 ppm. O óleo de Palmarosa foi o que apresentou a maior taxa de inibição de formação de esclerócios, na menor dose testada (300 ppm). O teste de supressão da difusão do ácido oxálico, foi realizado com o isolado mais agressivo (SR5), com o óleo de Palmarosa a 400 ppm, o qual reduziu a taxa de crescimento micelial em 55%. Para o teste de estabelecimento do patógeno no substrato Baseplant e de patogenicidade nos genótipos de amendoim em casa de vegetação utilizou-se dois genótipos, BR 1 e Senegal. O ensaio realizado com substrato recebeu adição de 40 g de P2O5 + 15 g KCl + 200 g de húmus/Kg como adubação básica. O genótipo BR 1, foi mais suscetível que Senegal, o isolado SR5 mostrou-se mais agressivo, provocando maior índice de doença quando cultivado apenas em substrato. O ensaio de validação do óleo contra S. rolfsii em casa de vegetação, foi realizado com sete tratamentos e ao final do ciclo da cultura observou-se um ganho de 54% no peso das vagens, 57% no número de vagens/planta e 40% no índice de colheita.

Submitted by Luciana Ferreira (lucgeral@gmail.com) on 2016-05-12T13:37:50Z No. of bitstreams: 2 Dissertação - Marize Moreira Gibrail - 2015.pdf: 2363722 bytes, checksum: 6f10b8066ff95d47a79302de16e9d1b2 (MD5) license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) / Approved for entry into archive by Luciana Ferreira (lucgeral@gmail.com) on 2016-05-12T13:39:40Z (GMT) No. of bitstreams: 2 Dissertação - Marize Moreira Gibrail - 2015.pdf: 2363722 bytes, checksum: 6f10b8066ff95d47a79302de16e9d1b2 (MD5) license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-05-12T13:39:40Z (GMT). No. of bitstreams: 2 Dissertação - Marize Moreira Gibrail - 2015.pdf: 2363722 bytes, checksum: 6f10b8066ff95d47a79302de16e9d1b2 (MD5) license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) Previous issue date: 2015-06-29 / Conselho Nacional de Pesquisa e Desenvolvimento Científico e Tecnológico - CNPq / Arboviruses are viruses that maintained in nature by passing through an arthropod vector to a susceptible vertebrate and non-human primate (NHP), an important host, mainly in wild environment. This study aimed to identify antibodies for arboviruses in NHPs inhabitants of three urban parks of Goiania city, as well as NHPs acclimatized the Wild Animal Screening Center - CETAS-IBAMA, Goiania city. The procedure took place from the capture and collection of blood samples from 50 animals of species Cebus libidinosus (n = 42), Alouatta caraya (n = 5) and Callithrix penicillata (n = 3). All serum samples were first subjected to hemagglutination inhibition assay (HI) against specific antigens of 23 types of arboviruses circulating in the Brazilian Amazon region having as revelation goose red blood cell system. It was observed a positivity in serum samples of six NHPs, three of them being of the species Cebus libidinosus (animals 02, 10 and 11), two of Alouatta caraya species (animal 12 and 20) and the others for Callithrix penicillata species (animal 23) These six animals, four of them showed seropositive for more than one type of arboviruses: Animal 02 (Cacipacore virus and Dengue-1); Animal 11 (Mayaro virus, Oropouche, Cacipacore, Bussuquara and Dengue-1, 3 e 4); Animal 12 (Oropouche virus, Bussuquara and Cacipacore); and animal 23 (Dengue- 1, 3 and 4). The other two NHPs, species Cebus libidinosus (animal 10) and Alouatta caraya (animal 20) were seropositive for only one type of arbovirus: Bussuquara and Oropouche, respectively. Considering antibody titration by HI, it was observed a titer of equal or greater than 1:40 for Cacipacore virus and Dengue-1 (animal 02), Bussuquara (animal 10) and Oropouche (animals 11, 12 and 20), in total of five serum samples. Of these, four were tested for serum neutralization test (SNT) in vivo using Swiss mice of 1-3 days old: sample of animal 02, was positive for the virus Cacipacore and samples of animals 11, 12 and 20 were positive for Oropouche virus. It was noted that two of these samples was confirmed as positive for Oropouche virus from animals 12 and 20, both of Allouatta caraya species, which were acclimatized at CETAS-IBAMA. Generally, the study showed seropositivity for seven types of arboviruses in the three species studied NHPs which are registered in the Cerrado: Cebus libidinosus, Allouatta caraya and Callithrix penicillata. / Os arbovírus são vírus que se mantêm na natureza através da transmissão por um artrópode vetor a um vertebrado suscetível sendo o primata não humano (PNH), hospedeiro importante, principalmente no ambiente silvestre. Este estudo teve como objetivo identificar anticorpos para arbovírus em PNHs habitantes de três Parques Urbanos da cidade de Goiânia, bem como de PNHs ambientados no Centro de Triagem de Animais Silvestres - CETAS-IBAMA, do município de Goiânia. O procedimento se deu a partir da captura e coleta de amostras de sangue de 50 animais das espécies Cebus libidinosus (n=42), Alouatta caraya (n=5) e Callithrix penicillata (n=3). Todas as amostras de soro foram inicialmente submetidas ao ensaio de Inibição da Hemaglutinação (IH) frente a antígenos específicos de 23 tipos de arbovírus que circulam na região Amazônica brasileira tendo como sistema de revelação hemácias de ganso. Foi observado positividade em amostras de soro de seis PNHs sendo três deles da espécie Cebus libidinosus (animais 02, 10 e 11), dois da espécie Alouatta caraya (animais 12 e 20) e o outro da espécie Callithrix penicillata (animal 23). Destes seis animais, quatro se mostraram soropositivos para mais de um tipo de arbovírus: animal 02 (vírus Cacipacore e Dengue-1); animal 11 (vírus Mayaro, Oropouche, Cacipacore, Bussuquara e Dengue-1, 3 e 4); animal 12 (vírus Oropouche, Bussuquara e Cacipacore); e animal 23 (vírus Dengue- 1, 3 e 4). Os outros dois PNHs, espécies Cebus libidinosus (animal 10) e Alouatta caraya (animal 20) foram soropositivos para apenas um tipo de arbovírus: Bussuquara e Oropouche, respectivamente. Considerando a titulação de anticorpos por IH, foi observado título igual ou maior que 1:40 para os vírus Cacipacore e Dengue-1 (animal 02), Bussuquara (animal 10) e Oropouche (animais 11, 12 e 20), totalizando cinco amostras de soro. Destas, quatro foram testadas pelo ensaio de soroneutralização (SN) in vivo utilizando camundongo suíço de 1 a 3 dias de nascido: amostra do animal 02, positiva para o vírus Cacipacore e amostras dos animais 11, 12 e 20, positivas para o vírus Oropouche. Foi observado que duas destas amostras confirmaram positividade para o vírus Oropouche (animais 12 e 20), ambos da espécie Allouatta caraya, os quais eram ambientados do CETAS-IBAMA. No conjunto o estudo mostrou soropositividade para sete tipos de arbovírus nas três espécies de PNHs estudadas as quais possuem registro no Bioma Cerrado: Cebus libidinosus, Allouatta caraya e Callithrix penicillata.

Melanoma é o câncer mais agressivo e a mutação BRAF V600E é a mais frequente entre os pacientes. O vemurafenibe foi o primeiro inibidor específico desta mutação aprovado pela Food and Drug Administration. Entretanto, após cerca de seis meses há recidiva e superar os mecanismos de resistência responsáveis por este fenômeno ainda é um desafio. A curcumina é um tumérico com características antitumorais e anti-inflamatórias, entretanto sua baixa biodisponibilidade e estabilidade limitam seu uso e por isso impulsionaram a busca por análogos capazes de serem eficientes e comercializados. O DM-1, é um análogo monocetônico que apresentou efeitos antiumorais in vitro e in vivo em estudos anteriores. O objetivo deste trabalho foi avaliar os efeitos citotóxicos do DM-1 em células de melanoma sensíveis (naive) e resistentes ao vemurafenibe, bem como na modulação de metaloproteinases. As células de melanoma foram tratadas com diferentes concentrações de DM-1, e este composto foi citotóxico para linhagens sensíveis e resistentes ao vemurafenibe, além de induzir parada de ciclo celular em G1/G0 e diminuir o número de colônias, entretanto ele não foi seletivo em ensaios de citotoxicidade realizados com melanócitos e fibroblastos. O tratamento dessas células em doses subtóxicas resultou na modulação de metaloproteinases importantes no processo de invasão celular. O DM-1 reduziu as concentrações das metaloproteinases -1, -2 e -9 (MMP-1, -2 e -9) em um ensaio de quantificação de MMPs e a atividade das MMP-2 e -9 em um ensaio de zimografia de maneira célula dependente. As modulações negativas do inibidor de MMP TIMP-2 e MMP-14 para SKMEL-28 naive foram associadas a diminuição das atividades de MMP-2 e -9, enquanto que as modulações positivas para SKMEL-19 naive foram relacionadas ao aumento de MMP-2. Este composto ainda inibiu a migração das células e a formação de tubos por células endoteliais. / Malignant melanoma is the most aggressive cancer and the BRAF V600E mutation is the most frequent among patients. Vemurafenib was the first specific inhibitor for this mutation approved by Food and Drug Administration. Therefore around six months later there is relapse and overcoming it is still a challenge. Curcumin is a turmeric and it has been deeply researched because of its anti-inflammatory and antitumoral effects. However the low stability limits its use, therefore, encouraged the investigation of analogues capable to be efficient and commercialized. DM-1 is a monoketone curcumin analog and it showed antitumoral effects in vitro and in vivo in previous studies The aim of this project was to evaluate the cytotoxical effects of DM-1 for vemurafenib responsive (naïve) and resistant melanoma cells, as well as metalloproteinases modulation. Melanoma cells were treated with different DM-1 concentrations, and this compound was cytotoxic for responsive and resistant cell lines, besides inducing G1/G0 cell cycle arrest and reducing the number of colonies, nonetheless it was not selective in assays performed with melanocytes and fibroblasts. Subtoxic treatment of those cells modulated important MMPs in the cell invasion process. DM-1 reduced metalloproteinases -1, -2 and -9 (MMP-1,-2 and -9) in a quantification assay, and MMP-2 and -9 activities by zymography in a cell-dependent way. Negative modulations of MMP inhibitor TIMP-2 and MMP-14 for SKMEL-28 naïve were associated with MMP-2 and -9 reduced activities, whereas positive modulations for SKMEL-19 naïve were correlated to MMP-2 increase. Furthermore, this compound reduced migration of those cells and endothelial cell tube formation.

A resistência que apresentam as serpentes peçonhentas às suas próprias peçonhas, assim como a resistência observada em alguns animais está bem documentada, e é atribuída a fatores solúveis presentes no seu plasma, soro ou músculo. No caso das serpentes peçonhentas estes fatores as amparam de sofrer danos decorrentes da própria peçonha. No presente trabalho foi isolado do soro da serpente Bothrops alternatus um inibidor de metaloproteases, denominado BaltMPI, mediante cromatografia em DEAE Sepharose(TM), Superdex(TM) 200, MonoQ(TM) 5/50 GL e cromatografia de fase reversa em C18, com uma recuperação proteica de 0,3%. A massa molecular determinada para o BaltMPI por SDS - PAGE foi de 60,5 kDa, e por espectrometria de massas MALDI/TOF de 42,4 kDa. Seu ponto isoelétrico, determinado por focalização isoelétrica, é 5,27. Portanto, o BaltMPI, é um SVMPIs com caráter ácido, pertencente aos SVMPIs de baixa massa molecular. Os primeiros 60 aminoácidos da região N-terminal do BaltMPI foram determinados mediante degradação de Edman, e apresentou alto grau de homologia com a sequência para a mesma região de outros SVMPIs isolados a partir do soro de serpentes peçonhentas. Outros segmentos da sequência também foram determinados após clivagem com tripsina e posterior análise por espectrometria de massas. Posteriormente realizou-se o alinhamento da sequência parcial determinada para o BaltMPI, com a sequência do BJ46a, um SVMPI proveniente da Bothrops jararaca, encontrando alta homologia entre elas. Tanto o soro da serpente, quanto o inibidor, BaltMPI, inibiram a atividade hemorrágica da Batroxase, uma SVMP da classe P-I, e a da BjussuMP-I, uma SVMP da classe P-III. Já, em relação à DHM da Batroxase, foi determinado que o BaltMPI tem uma DIHM de 5ug, e uma CE50% de 0,857ug. O BaltMPI também apresentou um efeito inibitório sobre a ação proteolítica da Batroxase, sobre os substratos: fibrinogênio, fibrina e azocaseína. Sobre a atividade fibrinogenolítica da serinoprotease BjSP, o BaltMPI não apresentou um efeito inibitório, corroborando assim com a especificidade descrita para inibir as SVMPs que possuem os SVMPIs. O BaltMPI inibiu a ação hemorrágica e proteolítica da Batroxase, ao formar um complexo mediante ligações não covalentes com esta SVMP. O inibidor BaltMPI, ao igualmente aos demais SVMPIs descritos, é estável em uma ampla faixa de pH (1 - 9), e a temperaturas elevadas, sendo que em temperaturas acima de 60°C foi observada uma diminuição na sua capacidade de inibir a atividade hemorrágica da Batroxase. A inibição da atividade hemorrágica da Batroxase, quando avaliado o potencial do BaltMPI como complemento à soroterapia, foi menor à inibição observada ao realizar os testes com incubação prévia entre o inibidor e a metaloprotease. No entanto, os resultados obtidos são promissores, reforçando o grande potencial que os SVMPIs possuem, tanto como ferramentas moleculares, como opção para o tratamento dos acidentes ofídicos, em especial o acidente botrópico, no qual as SVMPs tem papel fundamental na fisiopatologia observada, e que conduz à alta morbidade associada com este tipo de acidente. / Resistance exhibited by snakes to their own venom, as well as resistance observed in some animals has been well recorded, and has also attributed to soluble factors present in the plasma, serum or muscle. In the case of poisonous snakes, these factors protect them from damages caused by their own venom. An inhibitor, named as BaltMPI, was isolated from the snake´s serum of Bothrops alternates. This inhibitor was isolated through several chromatographic steps including DEAE Sepharose(TM), Superdex(TM) 200, MonoQ(TM) 5/50 GL and C-18 reverse phase, with a protein yield of 0.3%. Molecular mass of 60.5 kDa for BaltMPI was determined by SDS - PAGE and 42.4 kDa by MALDI/TOF mass spectrometry. Its isoelectric point, determined by isoelectric focalization, was 5.27. According to the obtained data, it was established that BaltMPI is an SVMPIs of acid character, belonging to low molecular mass SVMPIs. The first 60 aminoacids from the N-terminal region were determined by Edman degradation. This parcial sequence showed high homology to the corresponding sequence of other SVMPIs isolated from poisonous snake´s serum. Other segments from the sequence were also determined after cleavage with tripsine and MS analyses. Consequently, alignment of the partial sequence of BaltMPI with the sequence of BJ46a, a SVMPI from Bothrops jararaca, was made finding high homology. Both, snake´s serum and BaltMPI, inhibited the hemorragic activity of Batroxase, a class P-I SVMP, and of BjussuMP-I, a class P-III SVMP. When compared to the Batroxase DHM, it was determined a DIHM of 5?g and a CE50% of 0.857?g. BaltMPI also exhibited an inhibitory activity against the proteolitic effect of Batroxase on fibrinogen, fibrin and azocasein as substrates. On the fibrinogenolitic activity of serineprotease BjSP, BaltMPI did not showed inhibitory effect, demonstrating its specificity for inhibiting SVMPs that SVMPIs possess. BaltMPI inhibits the hemorragic and proteolitic action of Batroxase by forming a complex through non covalent linkages with that SVMP. BaltMPI, as well as other reported SVMPIs, is stable in a very high range of pH (1-9), and at high temperatures, although above 60°C a decrease in its inhibition capacity to the hemorrhagic activity of Batroxase. Inhibition of the hemorrhagic activity of Batroxase, when BaltMPI potencial as serum-therapy complement was evaluated, was less than the inhibition observed when tests by previously incubating inhibitor and metalloprotease were made. However, the results obtained are encouraging, highlighting the potential that these kind of proteins, SVMPIs, have as molecular tools, optional treatments for ophidic accidents, specially bothropic accident, in which SVMPs have a fundamental role in the observed physiopathology, leading to a high associated morbidity to this kind of accidents.

Submitted by Renata Lopes (renatasil82@gmail.com) on 2016-09-14T18:27:59Z No. of bitstreams: 1 cristiarosineirigoncalveslopescorrea.pdf: 605292 bytes, checksum: 38562bbea5f7579ce213dc0e85703e9a (MD5) / Approved for entry into archive by Adriana Oliveira (adriana.oliveira@ufjf.edu.br) on 2016-10-04T13:48:19Z (GMT) No. of bitstreams: 1 cristiarosineirigoncalveslopescorrea.pdf: 605292 bytes, checksum: 38562bbea5f7579ce213dc0e85703e9a (MD5) / Approved for entry into archive by Adriana Oliveira (adriana.oliveira@ufjf.edu.br) on 2016-10-04T13:48:50Z (GMT) No. of bitstreams: 1 cristiarosineirigoncalveslopescorrea.pdf: 605292 bytes, checksum: 38562bbea5f7579ce213dc0e85703e9a (MD5) / Made available in DSpace on 2016-10-04T13:48:50Z (GMT). No. of bitstreams: 1 cristiarosineirigoncalveslopescorrea.pdf: 605292 bytes, checksum: 38562bbea5f7579ce213dc0e85703e9a (MD5) Previous issue date: 2011-08-17 / CAPES - Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / A presente dissertação tem como proposta investigar no campo de interlocução entre Psicanálise e Educação a problemática das dificuldades de aprendizagem. Partimos da pergunta: “nos quadros de dificuldades de aprendizagem trata-se de um Outro que não sabe, ou um Outro que sabe demais”? O nosso caminho para responder a essa questão partirá da verificação lógica da sugestão de Lacan (1967): a segregação do real pelo Ideal. Com esse percurso, pretendemos avançar nesse ponto da segregação que a dimensão do Ideal coloca em jogo. Subsequentemente, visaremos a uma interlocução entre a abordagem psicanalítica e a teoria piagetiana das aprendizagens, discutindo a noção do egocentrismo infantil reivindicado por Piaget. Também, visaremos posteriormente uma interlocução com uma abordagem crítica das políticas públicas educacionais que denuncia uma forte dimensão idealizante no fundamento dessas políticas. Tal interlocução se dará no sentido de verificar se essa visada é a mesma da visada psicanalítica, avançando um pouquinho mais nesse tema. O passo seguinte será a investigação detida das dificuldades de aprendizagem na psicanálise a partir da abordagem da inibição neurótica da qual a inibição na aprendizagem faz parte, à luz da tragédia “Hamlet”, de Shakespeare, onde podemos encontrar a inibição de Hamlet intimamente articulada com um Outro que sabe demais. Trabalharemos com a hipótese de uma dimensão excessivamente idealizante no cerne de quadros de séria inibição na aprendizagem. Dimensão de um saber idealizado demais que obstrui o ato de aprender. É justamente essa hipótese que será investigada. / This dissertation aims at investigating learning difficulties at the intersection of Psychoanalysis and Education. We begin with the following question: “Learning difficulties pictures: the Other does not knowledge or knowledge too much”? To deal with this question we will begin with the logical verification for Lacan’s suggestion (1967) about the segregation of the real order comprised by Ideal dimension. With this approach, we aim at advancing in this segregation notion introduced by the Ideal. Subsequently, we will be concerned with the conversation between psychoanalysis and Piaget’s theory about learning, discussing child’s egocentrism claimed by this researcher. After, we will also be concerned with the conversation with a critical approach of educational public policies denounces a strong Ideal dimension in the core of these policies. Such a conversation will take place in the sense of verifying whether this reading and psychoanalytical one are the same, advancing a bit more, in this theme. The following step will be the learning difficulties detailed investigation from the neurotic inhibition approach from which the learning inhibition takes part, on the lights from Shakespeare’s Hamlet, where we can find the Hamlet’s inhibition closely related to an Other that kowledges too much. We will be concerned with the excessively idealized dimension hypothesis in the core of the learning difficulties pictures. Dimension which comprises an idealized knowledge that prevents the act of learning. It is justly this hypothesis which will be investigated.