O trabalho objetivou avaliar como o emurchecimento, as fontes absorventes de umidade e os aditivos químicos e microbianos podem afetar as perdas de MS, o perfil fermentativo, os parâmetros físicos, a estabilidade aeróbia e o valor nutritivo de silagens de capim Marandu. O valor alimentício das silagens foi avaliado em bovinos de corte consumindo rações contendo silagens de capins Marandu ou Tanzânia. O capítulo 3 avaliou os efeitos do emurchecimento, da adição de polpa cítrica peletizada (PCP) e dos inoculantes bacterianos sobre o valor nutritivo e perfil fermentativo das silagens de capim Marandu. No capítulo 4 foram avaliadas as perdas de MS, parâmetros físicos e estabilidade aeróbia dessas silagens. O capítulo 5 avaliou as variáveis descritas acima, porém o capim Marandu foi submetido aos efeitos da PCP ou casca de soja peletizada (CSP), e dos aditivos químicos ou microbiano. Nos três capítulos, as silagens foram confeccionadas em silos laboratoriais (20 L), que permitiu avaliar o valor nutritivo, perdas por gases e efluente. O capítulo 6 avaliou o valor alimentício e as perdas de MS em aerobiose das silagens de capins Marandu e Tanzânia, submetidas ou não ao aditivo a base de ácido fórmico e formato de amônio. O emurchecimento foi o tratamento mais efetivo em aumentar o teor de MS, o que resultou na ausência de efluente, menor produção de gases e perfil fermentativo satisfatório, no verão. Contudo, não diferiu das silagens controle para o coeficiente de digestibilidade in vitro da MS (DVIVMS), o que somado a maior perda no recolhimento e menor estabilidade aeróbia tornaram esta prática menos interessante. A adição de PCP resultou em maior DVIVMS, em ambas estações, além de ter reduzido teores de N-NH3 e C4. A adição de 7,5% de PCP melhorou a estabilidade e reduziu a produção de efluente e gases, resultando em maior recuperação de MS. A adição de 10% de PCP ou CSP ratificou os benefícios da polpa e comprovou a eficiência da CSP, visto que as silagens acrescidas destas fontes apresentaram maior capacidade e perfil fermentativo, maior DVIVMO e menores perdas de MS. O inoculante com duas cepas de bactérias, que atuam em momentos distintos, reduziu as perdas por gases e, assim como nos aditivos contendo ácido fórmico, foi responsável pela maior DVIVMO das silagens. Esses benefícios, entretanto, não foram verificados nos capítulos 3 e 4, provavelmente pela ausência de cepas distintas de microrganismos e pela menor quantidade de substratos a eles disponibilizados. O benzoato não propiciou incremento da DVIVMO e não reduziu as perdas por gases, tendo sido o menos efetivo. Os efeitos positivos do aditivo contendo ácido fórmico em melhorar as características das silagens foram comprovados no capítulo 6, porém, não foi possível destacar sua eficiência em melhorar o desempenho animal, bem como reduzir as perdas por deterioração durante a remoção da silagem. / The objective of this trial was to investigate the effects of wilting, moisture absorbents sources and chemical or microbial additives on dry matter losses, fermentation profile, physical parameters, aerobic stability and nutritive value of Palisadegrass silages. The feeding value was also evaluated in beef cattle fed Tanzania and Palisade silages based diets. The chapter 3 investigated the effects of wilting, addition of citrus pulp or inoculation with bacterial additive on the nutritive value and fermentation profile of Palisadegrass silages. In the chapter 4, the objective was to evaluate dry matter losses, physical parameters and aerobic stability of those silages. In the chapter 5, the same variables were evaluated, however, the Palisadegrass silages were ensiled with citrus pulp, soybeans husk or with chemical or microbial additives. In all chapters, the forage was ensiled in 20 L experimental silos and the nutritive value, fermentation profile and dry matter losses were determined. The chapter 6 evaluated the feeding value and the feed out losses of Palisade and Tanzania grass silages ensiled with or without formic acid based additives. The wilting process was the most effective in increasing the dry matter content and, reducing both the effluent production and the gaseous losses of silages harvested in the summer season. However, this process was ineffective in altering the IVTDMD and resulted in higher field losses. The use of citrus pulp at the time of ensiling increased the IVTDMD and reduced the ammonia-N and C4 content of silages harvested in both year seasons. The addition of 7.5% of citrus pulp also increased the aerobic stability and reduced both the effluent and gaseous production, resulting in silages with higher dry matter recovery rates. The use of either 10% of citrus pulp or soybean husk showed a similar trend, improving the fermentation profile, increasing the IVTOMD and reducing the dry matter losses. The use of the additive containing two bacterial strains, acting in different steps of the ensiling process, reduced the gaseous losses and improved the IVTOMD of the silages. These benefits, however, were not observed in the chapter 3 and 4 probably due to the lack of different bacterial strains and the low levels of fermentable substrates. The sodium benzoate was ineffective in altering the IVTOMD and did not reduce the gaseous losses. The benefits observed in the acid formic treated silages were also observed in the chapter 6, however, these silages were ineffective in improving the animal performance and reducing the feed out losses.

Os polimorfismos do gene da paraoxonase 1 (PON1) estão relacionados ao metabolismo lipídico conferindo efeito marginal e modesto nas concentrações séricas das lipropoteínas e sobre o risco de desenvolvimento de doença arterial coronária (DAC). O objetivo primário deste estudo é avaliar se há associação entre os polimorfismos da PON1: R192Q- rs662, R160G: rs13306698, Leu55Met: rs854560, Promoter_161: rs705381 e rs3917464 e eventos cardiovasculares em 5 anos numa sub-população com DAC estável do estudo MASS II (Medical, Angioplasty or Surgery Study II). Como objetivos secundários, investigamos a influência destes polimorfismos nas concentrações lipídicas iniciais e após 5 anos de acompanhamento, e também a sua relação com os desfechos cardiovasculares combinados no grupo randomizado para tratamento clínico exclusivo. Foram randomizados 611 pacientes para o MASS II. A população alvo deste estudo foi constituída por 518 pacientes que tiveram material genético coletado (MASS II Genético). Os polimorfismos avaliados, apesar de estarem associados ao metabolismo do HDL-c, apresentaram baixa associação com os níveis lipídicos e com o seu comportamento ao longo de 5 anos. Houve diferença nas concentrações médias de HDL-c entre os genótipos do Promoter_161, o alelo T associado a concentrações mais baixas de HDL-c (p=0,0369). Análise univariada mostrou que houve associação entre o raro alelo G do polimorfismo R160G (5 pacientes) e aumento da mortalidade, porém quando incluído no modelo ajustado por regressão logística multivariada não se mostrou preditor independente de óbito nesta população. Na análise do grupo randomizado para o tratamento médico, o polimorfismo R192Q está associado de forma independente ao novo infarto agudo do miocárdio, óbito, e eventos combinados. Genótipo GG aumentou o risco de óbito em 7,69 vezes (IC: 1.65- 35.76) e de IAM em 6,58 vezes (IC: 1.39- 30.46) quando comparado ao genótipo AA. Alelo A estava independentemente associado a ocorrência de eventos cardiovasculares combinados com um OR de 3,03 (IC: 1.29- 7.07). Em conclusão, o nosso estudo mostrou associação do alelo G na posição R160G com risco aumentado de óbito em pacientes com DAC estável. Em pacientes mantidos no tratamento clínico a posição R192Q está associada ao maior risco de óbito, IAM e eventos cardiovasculares combinados. / Paraoxonase 1 (PON1) gene polymorphisms have a known relation with lipid metabolism, conferring a marginal and modest effect on serum lipoprotein concentrations and also on development of coronary artery disease (CAD). The primary objective of this study is to investigate the association between PON1 polymorphisms: R192Q- rs662, R160G: rs13306698, Leu55Met: rs854560, Promoter_161: rs705381, and rs3917464 and 5-year follow-up cardiovascular events in a subpopulation with stable CAD from MASS II (Medical, Angioplasty or Surgery Study II). Secondary objectives will be to evaluate the influence of these polymorphisms on baseline and 5-year follow-up lipid concentrations and also its association with combined cardiovascular events in the MASS II group randomized for medical treatment. MASS II had 611 patients randomized. Target population comprises 518 patients who had genetic material sampled. Even though the polymorphisms were linked to HDL-c metabolism, there was a low association with lipid levels and changes over the 5-year follow-up. HDL-c mean concentrations were different in the Promoter_161 genotypes, T-allele was associated with lower levels (p=0.0369). Univariate analysis showed association between the rare G-allele of polymorphism R160G (5 patients) and increased mortality, but when adjusted in the multivariate logistic regression model this variable was not independent predictor of mortality in this population. In the medical treatment group, r192Q is associated with new myocardium infarction (MI), combined events and death. When compared to AA genotype, GG genotype increased the risk of death by 7.69 (CI: 1.65- 35.76) and of MI by 6.58 (CI: 1.39- 30.46). A-allele is independently associated with combined cardiovascular events with a OR of 3.03 (CI: 1.29- 7.07). In conclusion, this study showed association between G-allele on R160G position with increased mortality in patients with stable CAD. R192Q polymorphism is associated with higher risk of death, MI and combined cardiovascular events in patients treated medically.

Orientador: Dora Maria Grassi Kassisse / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-08-20T06:22:42Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Ishizu_LarissaYuri_M.pdf: 1236160 bytes, checksum: d3b83c5f6882f0bbaa5b2be15aa753a0 (MD5) Previous issue date: 2012 / Resumo: Dados do Laboratório de Estudo do Estresse revelaram que a produção de lactato por adipócitos isolados de tecido adiposo visceral de humanos eutróficos e obesos mórbidos está sob estímulo de adrenoceptores ?1. Observou-se também hiperlactatemia no jejum de obesos mórbidos, aumento na liberação de lactato e na lipólise basal e estimulada em adipócitos viscerais isolados destes indivíduos, comparados com eutróficos. Porém dados de nosso laboratório e da literatura sugerem uma relação antagônica entre lipólise e lactatogênese, da qual participa o receptor GPR81, o qual está envolvido com lactato, inibindo a lipólise. Dados da literatura também sugerem a supressão da lipogênese e maior lipólise basal e estimulada dos adipócitos de obesos, com aumento da expressão da aquaporina 7, pelo qual o glicerol gerado na lipólise, é liberado. Por outro lado, estudos da literatura relatam a ocorrência da reesterificação dos produtos liberados após a lipólise de triacilgliceróis (TAGs) no tecido adiposo, na obesidade. Possivelmente, este seria o processo que promoveria a manutenção de grandes estoques de TAGs no tecido adiposo, apesar da maior lipólise e menor lipogênese. Frente aos nossos dados funcionais e os presentes na literatura sobre tecido adiposo visceral na obesidade, o objetivo deste estudo foi detectar alterações no metabolismo glicídico e lipídico neste tecido isolado de humanos obesos, em comparação com eutróficos, sob o enfoque da expressão gênica. Para tanto, quantificamos a expressão de genes envolvidos com a lactatogênese (lactato desidrogenase A, LDHA), lipogênese (acetil-CoA carboxilase, ACACA; glicerol quinase, GK; lipoproteína lipase, LPL) e lipólise (lipase hormônio sensível, LIPE; fosfodiesterase 3b, PDE3b; aquaporina 7, AQP7), e o gene relacionado com a inibição da lipólise via lactato (receptor-órfão acoplado à proteína G 81, GPR81) através do Real- Time PCR. Os resultados obtidos mostraram que o tecido adiposo de mulheres obesas expressa significativamente 49% a mais o gene LIPE e 66% a mais o gene LPL o de que mulheres eutróficas (p<0,05), enquanto que no tecido adiposo de homens não foi encontrada diferença significativa, apenas uma tendência a aumento do gene LPL nos obesos, comparados com eutróficos. Os adipócitos isolados do tecido adiposo visceral de homens obesos são morfometricamente maiores que os provenientes de eutróficos tendo como provável fator o aumento da expressão de LPL sem ser acompanhado de alterações na expressão de LIPE. Por outro lado, os adipócitos isolados do tecido adiposo visceral de mulheres obesas não apresentaram alterações morfométricas quando comparados aos adipócitos isolados de eutróficas, estes resultados são explicados pela análise da expressão dos genes LPL e LIPE do tecido adiposo desta região que se apresentou significativamente elevada em obesas. Desta forma, para este tecido estudado, existem alterações, dependente de gênero, que devem ser consideradas para estudos futuros sobre a obesidade. Neste trabalho, com as condições e a população estudada, referente a obesos e eutróficos de ambos os gêneros, podemos indicar as seguintes conclusões: a expressão de enzimas relacionadas à lipólise e a lipogênese em adipócitos isolados da região visceral de obesos é dependente do gênero enquanto que não há alterações significativas na expressão gênica relacionada à lactatogênese / Abstract: Previous data from the Laboratory of Stress Study showed that lactate production by adipocytes isolated from visceral adipose tissue of human normal and morbidly obese is under ?1-adrenoceptor stimulation. It was also observed hyperlactatemia in fasting from morbidly obese, an increase basal and stimulated lactate and glycerol production in visceral adipocytes isolated from these individuals, compared with normal weight. But data from our laboratory and the literature suggest an antagonistic relationship between lipolysis and lactatogênese, which participates in the GPR81 receptor, which is involved with lipolysis inhibition by lactate. Literature data also suggest the suppression of lipogenesis and increased basal and stimulated lipolysis in adipocytes of obese, with increased expression of aquaporin 7, whereby the glycerol generated in lipolysis, is released. Furthermore, published studies have reported the occurrence of re-esterification of the products released after lipolysis triacylglycerols (TAGs) in adipose tissue, in obesity. Possibly, this would be the process that would promote the maintenance of large stocks of TAGs in adipose tissue, despite the increased lipolysis and reduced lipogenesis. Front of our functional data and the literature on visceral adipose tissue in obesity, the aim of this study was to detect changes in glucose and lipid metabolism in this tissue isolated from obese humans, compared with normal weight, with a focus on gene expression. To this end, we quantified the expression of genes involved in lactatogênese (lactate dehydrogenase A LDHA), lipogenesis (acetyl- CoA carboxylase, ACACA, glycerol kinase, GK, lipoprotein lipase, LPL) and lipolysis (hormone sensitive lipase, LIPE; phosphodiesterase 3b , PDE3b; aquaporin 7 AQP7), and the gene related to the inhibition of lipolysis via lactate (orphan receptor-G protein coupled 81, GPR81) using Real-Time PCR. The results showed that adipose tissue isolated from obese women expressed significantly 49% more gene LIPE and 66% more LPL gene that women with normal weight (p <0.05), whereas in men no significant difference was found, only a tendency towards increased LPL gene in obese compared with normal weight. The isolated adipocytes visceral adipose tissue of obese men morphometrically are larger than those from normal weight bearing as the most probable cause increased expression of LPL without being accompanied by alterations in the expression of LIPE. Moreover, the isolated adipocytes visceral adipose tissue of obese women showed no morphological changes compared to normal weight of isolated adipocytes. These results are explained by analysis of gene expression of LPL and LIPE adipose tissue in this region which was significantly higher in obese women. Thus, there are changes, in this tissue studied, dependent on gender, which should be considered for future studies on obesity. In this work, the conditions and the population studied, referring to obese and normal for both genders, we can state the following conclusions: the expression of enzymes related to lipolysis and lipogenesis in adipocytes isolated from visceral fat of obese people is dependent on the gender while not there are significant changes in enzyme expression related to lactatogenesis / Mestrado / Fisiologia / Mestre em Biologia Funcional e Molecular

A relação entre transferência de lipídeos, idade e aterogênese são complexas e ainda não estão claras. É possível que a troca de lipídeos esteja alterada com a avançar da idade e relacionada com a Doença Arterial Coronariana (DAC). O objetivo deste trabalho foi verificar a hipótese se em indivíduos mais jovens a habilidade da HDL de receber lipídeos é diferente de indivíduos mais velhos com e sem a evidência clínica da DAC. Dentro desses aspectos, foram determinados o diâmetro da partícula desta lipoproteína, a atividade da Paraoxonase (PON1) e sua capacidade de receber lipídeos. Para tanto, foram estudados 86 indivíduos divididos em quatro grupos: adulto jovem (25±4), meia-idade (42±8), idosos sem evidência clínica de DAC (75±6) e idosos com DAC (74±5). Uma nanoemulsão artificial rica em colesterol (LDE) marcada com 3H-TG e 14C-CL ou 3H-CE e 14C-FL foi incubada com plasma. Após a precipitação de outras lipoproteínas, o sobrenadante contendo HDL foi separado e em seguida, medida a radioatividade. O diâmetro da HDL foi medido por laser scattering (nm). Foram constatadas diferenças significativas entre as taxas de transferência de 3H-éster de colesterol (CE) entre os grupos: adulto jovem (3.7±1.0%); meia idade (4.1 ±0.7%) e idosos (5.3±1.8%);p= 0.024. Também ocorreu diferença entre as taxas de transferência do 14C-fosfolipídeo (FL): adulto jovem (18.7±4.6%), meia idade (18.3 ±4.0%) e idosos (20.6±5.3); p=0.0368. Com relação ao tamanho das partículas de HDL, foi encontrada diferença entre os grupos: os grupos adulto jovem (8.9± 0.3nm) e meia idade (8.9± 0.3nm) apresentaram menores diâmetros de HDL quando comparados ao do grupo de idosos sem evidência clínica da DAC (9.7± 1.6);p= 0,0444. As transferências de lipídeos foram expressas em % de radioatividade. A idade correlacionou-se positivamente com a taxa de transferência do 3H- éster de colesterol (r=0.3365; p=0.0036), com a concentração de colesterol total (r=0.4965; p=0.0001) e com a concentração de HDL colesterol (r=0.3559; p=0.0023). Também houve correlação positiva com o tamanho de HDL (r=0.3695; p=0.0013). Em princípio, os indivíduos idosos sem evidência clínica da DAC, aparentemente têm alguma proteção contra a mesma. Desse modo, com o intuito de saber se os resultados encontrados no presente trabalho sustentam a afirmação acima, foi realizada a comparação desse grupo com um grupo de idosos que apresentavam a DAC. O grupo com DAC apresentou menor tamanho de partícula de HDL (8,7±0,7). As taxas de transferência de 3H-CE e de 14C-FL também foram menores neste grupo (3H-CE=3,1 ±2,3 e 3H-TG= 5,1 ±1 ,6). Devido ao importante papel antiaterogênico da HDL, esses resultados podem ser relevantes para estabelecer novos mecanismos existentes entre os aspectos qualitativos dessa lipoproteína, o avanço da idade e a presença da DAC. / The relationship between transfer of lipids, age and atherogenesis are complex and yet unclear and is possible that the shift of lipids to HDL may be altered by the aging process and related with coronary artery disease (CAD). We tested the hypothesis whether in younger patients the ability of HDL to receive lipids is different from that of elderly patients with or without CAD. Inside of these aspects, the HDL size, the activity of Paraoxonase (PON1) and its capacity to receive lipids was determined. It was studied, 25 younger, 25 middle age, 36 elderly patients with a coronariography and/or a perfusion scintilography on the last 6 months (11 with CAD, 74±5 yo; and 25 patients without proved CAD, 75±6 yo). An artificial cholesterol-rich nanoemulsion labeled with 3H-TG and 14C-FC or H-CE and 14C-PL was incubated, per 1 hour, with plasma. After chemical precipitation of apoB-containing lipoproteins and the nanoemulsion, the supernatant containing HDL was counted for radioactivity. The HDL diameter was measured by laser-light-scattering. Transfer of CE and PL to HDL was smaller in young patients than in the elderly patients without CAD, but the transfer of the other lipids are equal (CE: young= 3.7±1.0%; middle age= 4.1 ±0.7%; elderly without CAD= 5.3±1.8%; p= 0.024 and PL: young= 18.7±4.6%; middle age= 18.3 ±4.0%; elderly without CAD= 20.6±5.3; p=0.0368). The HDL size was greater in elderly group without CAD (9.7± 1.6nm) than in younger (8.9± 0.3nm) and middle age patients (8.9± 0.3nm); p=0,0444. Transfer of lipids to HDL was expressed as % of total incubated radioactivity. The age positively correlated with the transfer of CE (r=0.3365; p=0.0036), with the total cholesterol concentration (r=0.4965; p=0.0001) and with the HDL concentration cholesterol (r=0.3559; p=0.0023). Also had positive correlation with the size of HDL (; p=0.0013). In principle, the aged patients without CAD, have some protection against the same one. In this aspect, with intention to know if the results found in the present work support the affirmation above, was compared this group with a group of aged that presented the CAD. Comparing elderly patients without CAD with elderly patients with CAD, the transfer of CE and FL as well as HDL size was smaller in the CAD group (CE=3.1±2.3 and TG= 5.1±1.6; 8.7±0.7nm). Due to HDL important antiatherogenic roles, this result can be relevant to establish new mechanisms and risk factors in aging and in CAD.

Os transportadores de membrana do tipo ATP Binding Cassette (ABC) e solute carriers (SLC) regulam a homeostase intracelular de fármacos, modificando a biodisponibilidade e possivelmente a eficácia terapêutica. A variabilidade na resposta a hipolipemiantes, como as vastatinas, tem sido associada a vários fatores genéticos e ambientais. Com a finalidade de avaliarmos os mecanismos de regulação da expressão dos transportadores pela atorvastatina, a expressão de RNAm de transportadores ABC (ABCB1, ABCG2 e ABCC2) e SLC (SLCO1B1, SLCO2B1 e SLC22A1) foi avaliada por RT-PCRq em células mononucleares do sangue periférico (CMSP) de 18 indivíduos normolipidêmicos (NL) e 22 pacientes hipercolesterolêmicos (HC) tratados com atorvastatina (10mg/dia/4 semanas). A possível associação entre o polimorfismo ABCB1 C3435T e a expressão de RNAm também foi avaliada. Os estudos in vitro foram realizados com as células das linhagens HepG2 e Caco-2. Foram avaliados os efeitos da atorvastatina na ativação de fatores de transcrição (NF-kappaB, NF-Y, c-jun, SP-1 e PXR) por ensaio de mobilidade eletroforética retardada em gel de poliacrilamida (EMSA) e na meia-vida do RNAm do gene ABCB1 por RT-PCRq, e a expressão e atividade funcional da proteína ABCB1 por Western blot, imunohistoquimica e citometria de fluxo. A proteina ABCB1 foi localizada por imunohistoquimica na membrana apical do canalículo biliar das celulas HepG2 e na membrana apical das Caco-2. O tratamento das células HepG2 com atorvastatina causou redução da expressão de RNAm do gene ABCB1 e aumento na expressão dos genes ABCG2 e ABCC2. Esses efeitos foram dose e tempo dependentes. O tratamento com atorvastatina das células Caco-2 não modificou a expressão dos transportadores de efluxo após 30 a 120 min. Nas células HepG2, as concentrações de 10 e 20 M de atorvastatina causaram diminuição da expressão de ABCB1 (0 &#181;M: 1,00 ± 0,06; 10 &#181;M: 0,69 ± 0,25, p< 0,05; 20 &#181;M: 0,69 ± 0,06, p< 0,05). A atividade da ABCB1, avaliada pelo efluxo de Rh123, mostrou-se estar reduzida em 41% nas células HepG2, após tratamento com atorvastatina 20 &#181;M. Embora a diminuição da expressão do ABCB1 não tenha sido decorrente de uma menor ativação transcricional, avaliada indiretamente por EMSA, estudos de mecanismos de regulação pós-transcricionais, revelaram que a atorvastatina diminui a estabilidade de RNAm do gene ABCB1. Esse resultado parece estar de acordo com o ocorrido nas CMSP, já que o tratamento com atorvastatina diminuiu a expressão de RNAm do gene ABCB1 nos indivíduos HC. Essa modulação, no entanto não está associada à presença do polimorfismo ABCB1 C3435T. Em relação aos transportadores de captação, a expressão do SLC22A1 nas células Caco-2 diminui após tratamento com atorvastatina por 30 min e não foi modificada nas células HepG2. Já o gene SLCO2B1 encontrou-se muito aumentado após 24 h de tratamento nas células HepG2. Estudos in vivo nas CMSP, mostrou que a expressão de mRNA basal dos transportadores nos HC foi 10 vezes maior que nos NL e diminuiu após tratamento com atorvastatina nos HC. Com os resultados obtidos podemos sugerir que diferenças no efeito da atorvastatina nos tipos celulares podem ser em decorrência da expressão tecido-específica de fatores de transcrição. No modelo de hepatócito, HepG2, a atorvastatina é um inibidor do transporte mediado pela ABCB1 e é capaz de diminuir a síntese e a função da ABCB1, via aumento da degradação de RNAm do gene ABCB1. Em conseqüência ocorre uma redução do efluxo pelo sistema biliar, causando aumento da concentração intracelular. Ainda, podemos concluir que em CMSP o colesterol pode ser o responsável pela modulação dos genes dos transportadores de membrana e que isso pode implicar em diferenças na eficácia da atorvastatina. / Specific membrane transporters have a significant impact on drug absorption and disposition. Most of them belong to two super-families, ABC (ATP-binding cassette) and SLC (solute-linked carrier). Statins are important therapeutic agents in the management of hypercholesterolemia, and considerable inter-individual variation exists in response to its therapy. The effects of atorvastatin expression of efflux (ABCG2 and ABCC2) and uptake (SLCO1B1, SLCO2B1 and SLC22A1) drug transporters were investigated by qPCR in Caco-2 and HepG2 cell lines and in peripheral blood mononuclear cells (PBMCs) of eighteen normolipidemic (NL) and twenty two hypercholesterolemic (HC) individuals treated with atorvastatin (10mg/day/4 weeks). The possible involvement of ABCB1 C3435T polymorphism in ABCB1 mRNA expression was also evaluated. In vitro studies with the cell lines HepG2 and Caco-2 were also performed. The effect of atorvastatin on the activation of the promoter of ABCB1 by transcription factors (NF-kappaB, NF-Y, c-jun, SP-1, and PXR) was evaluated by electrophoretic mobility shift assay (EMSA), and ABCB1 mRNA half-life were measured by PCRq. The expression and functional activity of ABCB1 were investigated by Western blot, imunohistochemistry and flow cytometry. Immunohystochemical analysis revealed that ABCB1 is located at the apical membrane of the bile canaliculi in HepG2, and in apical membrane of Caco-2 cells. Atorvastatin treatment of HepG2 cells caused a decreased in ABCB1 and an increase in ABCC2 and ABCG2 transcript levels. These effects were time and dose-dependent. Treatment of Caco-2 cells did not present any differences in efflux transporters mRNA levels. Treatment of HepG2 cells with 10 and 20 M atorvastatin caused a reduction on ABCB1 expression (0 &#181;M: 1,00 ± 0,06; 10 &#181;M: 0,69 ± 0,25, p< 0,05; 20 &#181;M: 0,69 ± 0,06, p< 0,05), and a 41% decrease in ABCB1-mediated efflux of Rhodamine123 (p < 0.01). Although reduced ABCB1 mRNA expression was not due to any repressor protein suppressing ABCB1 promoter activation, mRNA stability studies revealed that mRNA stability of ABCB1 was markedly decreased by atorvastatin treatment (2h versus 7h for control). In agrrement with these results, in PBMCs of HC individuals, atorvastatin treatment also reduced ABCB1 mRNA expression. However, the down-regulation was not associated with the presence of 3435T allele. For the uptake transporters, atorvastatin decreased SLC22A1 transcript levels after 30min-treatment and it was not regulated in HepG2. On the other hand, SLCO2B1 was up-regulated after 24h-treatment of HepG2 cells. In vivo studies with PBMCs revealed that during hypercholesterolemia all the drug transporters analyzed were increased almost 10-fold (p< 0.05), and after atorvastatin therapy the efflux and uptake transporters transcript levels were all down-regulated. These findings suggest that atorvastatin exhibits differential effects on mRNA expression of drug transporters depending on the cell type, which may be related to tissue-specific expression of transcription factors. Atorvastatin leads to decreased ABCB1 function and synthesis in HepG2 cells by increasing degradation of ABCB1 mRNA. Therefore, inhibition of ABCB1 may reduce atorvastatin elimination via bile, increasing its cellular concentrations. We also may suggest that in PBMCs cholesterol modulates mRNA expression of drug transporters, and this may contribute to the variability of response to atorvastatin.

Submitted by Maria Beatriz Vieira (mbeatriz.vieira@gmail.com) on 2018-06-11T17:00:10Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) resumo_tese_gabriela_peres_moraes_de_freitas.pdf: 25733 bytes, checksum: db07dd8031202634a6a7a48362f489ff (MD5) / Approved for entry into archive by Aline Batista (alinehb.ufpel@gmail.com) on 2018-06-11T18:28:39Z (GMT) No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) resumo_tese_gabriela_peres_moraes_de_freitas.pdf: 25733 bytes, checksum: db07dd8031202634a6a7a48362f489ff (MD5) / Made available in DSpace on 2018-06-11T18:28:39Z (GMT). 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Já no reprodutivo ocorre o aborto e esterilidade das espiguetas, exerção incompleta da panícula, anormalidades no desenvolvimento das anteras, mancha dos grãos e maturação tardia e incompleta dos mesmos. Este trabalho teve como objetivo avaliar nos estádios vegetativo e reprodutivo, os mecanismos adaptativos de resposta ao estresse por baixas temperaturas, a nível molecular, bioquímico e fisiológico. Foram analisados 22 genótipos de arroz, da coleção “mini-core” do USDA para tolerância ao frio, in vitro, através de parâmetros morfológicos. Destes 22, foram selecionados quatro genótipos (dois tolerantes e dois sensíveis), para avaliação, no estádio vegetativo, de trocas gasosas, análises bioquímicas, expressão gênica e de proteínas. As análises de trocas gasosas e expressão gênica foram repetidas durante o estádio reprodutivo. Os primeiros efeitos do estresse por baixa temperatura foram identificados na fotossíntese em todos os genótipos e em ambos os estádios. O perfil bioquímico e dos genes de proteínas de transferência de lipídeos (LTPs), OsGH3-2, OsSRO1a, OsZFP245, OsTPP1 e as proteínas LRR-RLKs, BHLH, GLYI e LTP1, no estádio vegetativo, demonstraram que, apesar dos impactos da baixa temperatura nos genótipos tolerantes, houve um ajuste rápido para que a homeostase celular fosse mantida, mostrando uma clara diferença na expressão gênica entre os genótipos. Foi visualizado também que a expressão dos genes OsLTP7, OsLTP10, fatores de transcrição e genes induzidos por baixa temperatura foram maiores nos genótipos tolerantes, em ambos os tecidos. O estresse por baixa temperatura afetou severamente os parâmetros de produção, tendo uma perda no rendimento dos grãos de 40 e 90%, nos genótipos tolerantes e sensíveis, respectivamente. Assim, este estudo identificou o genótipo Nipponbare como tolerante a baixas temperaturas em ambos os estádios. Os genes LTP, OsGH3-2, OsSRO1a, OsZFP245 e OsTPP1 e as proteínas LRR-RLKs, bHLH, GLYI e LTP1, são bons candidatos para o “screening” de tolerância a baixas temperaturas, no vegetativo, enquanto que as OsLTP7, OsLTP10, OsNAC9, OsNAC10 e OsNAP podem ser usados, com o mesmo fim, no reprodutivo. / Due to its tropical origin, rice (Oryza sativa) is very impacted by cold stress and consequently presents great losses of growth and yield. It is the second most consumed cereal in the world and the decrease in production caused by extreme temperature events can have significant impacts in the world economy. Sensitivity and symptoms of plant responses to stress due to low temperatures vary with the stage of developmental. It is observed that in the first developmental stage there is a delay and decrease of seed germination and on vegetative stage, foliar chlorosis, short stature and decrease of the profile. It is observed that in the first development stage there is a delay and decrease of the germination of the seeds and in the vegetative stage, leaf chlorosis, short stature and reduction of tillering. At reproductive stage, the abortion and sterility of the spikelets, incomplete panicle excretion, abnormalities in the development of the anthers, grain spots and late and incomplete maturation of the grain. The purposed of this study was to evaluate the adaptive mechanisms of response to stress induced by low temperatures at the molecular, biochemical and physiological levels at the vegetative and reproductive stages. Twenty-two rice genotypes from the USDA mini-core collection for cold tolerance, in vitro, were analyzed through morphological parameters. Of these 22, four genotypes (two tolerant and two sensitive) were selected for vegetative stage evaluation of photosynthetic parameters, biochemical and gene and protein expression. Analysis of photosynthetic parameters and gene expression were repeated during the reproductive stage. The first effects of low temperature stress were identified in photosynthesis in all genotypes and in both stages. Biochemical profile and genes of lipid transfer proteins (LTPs), OsGH3-2, OsSRO1a, OsZFP245, OsTPP1 and the LRR-RLKs, BHLH, GLYI and LTP1 proteins at the vegetative stage have demonstrated that, despite impacts of low temperature in the tolerant genotypes, had a fast adjustment for cellular homeostasis to be maintained, showing a clear difference in gene expression between the genotypes. It was also visualized that the expression of OsLTP7, OsLTP10, transcription factors and low temperature genes were higher in the tolerant genotypes in both tissues. Low temperature stress severely affected production parameters, with a yield loss of 40 and 90% in tolerant and sensitive genotypes, respectively. Therefore, this study identified the genotype Nipponbare as possible tolerant to low temperatures in both stages. LTP genes, OsGH3-2, OsSRO1a, OsZFP245 and OsTPP1, and the porteins LRR-RLKs, bHLH, GLYI and LTP1 are good candidates at the screening for cold tolerance at the vegetative stage, whereas OsLTP7, OsLTP10, OsNAC9, OsNAC10 and OsNAP can be used, for the same purpose, at reproductive stage.

Submitted by Aline Batista (alinehb.ufpel@gmail.com) on 2015-03-23T21:17:38Z No. of bitstreams: 2 Avaliação físico-química, microbiológica e dos processos de produção da dieta enteral administrada em uma unidade hospitalar do sul do RS.pdf: 1716867 bytes, checksum: c9b3cdde6b403f24624a13fee3c44427 (MD5) license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) / Approved for entry into archive by Aline Batista (alinehb.ufpel@gmail.com) on 2015-03-24T18:01:43Z (GMT) No. of bitstreams: 2 license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) Avaliação físico-química, microbiológica e dos processos de produção da dieta enteral administrada em uma unidade hospitalar do sul do RS.pdf: 1716867 bytes, checksum: c9b3cdde6b403f24624a13fee3c44427 (MD5) / Approved for entry into archive by Aline Batista (alinehb.ufpel@gmail.com) on 2015-03-24T18:03:28Z (GMT) No. of bitstreams: 2 license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) Avaliação físico-química, microbiológica e dos processos de produção da dieta enteral administrada em uma unidade hospitalar do sul do RS.pdf: 1716867 bytes, checksum: c9b3cdde6b403f24624a13fee3c44427 (MD5) / Made available in DSpace on 2015-03-24T18:03:28Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) Avaliação físico-química, microbiológica e dos processos de produção da dieta enteral administrada em uma unidade hospitalar do sul do RS.pdf: 1716867 bytes, checksum: c9b3cdde6b403f24624a13fee3c44427 (MD5) Previous issue date: 2013-10-01 / Sem bolsa / A Terapia Nutricional Enteral em pacientes hospitalizados exige comprometimento e capacitação de todos os envolvidos nesse processo. Além disso, as dietas enterais devem ser seguras quanto aos aspectos nutricionais e higiênico-sanitário, garantindo a recuperação dos pacientes e a qualidade do serviço prestado. Este estudo teve como objetivo avaliar a qualidade físico-química e microbiológica de uma dieta enteral industrializada, assim como avaliar as Boas Práticas em Nutrição Enteral de uma unidade hospitalar do sul do Rio Grande do Sul. Foi selecionada a marca da dieta enteral industrializada mais prescrita aos pacientes adultos da Clínica Médica da unidade hospitalar. Essa marca foi analisada quanto a sua composição centesimal para comparação com as informações do rótulo, quanto a sua esterilidade comercial e quanto ao nível de contaminação microbiana quando manipulada e distribuída na unidade hospitalar. Os pontos amostrais da dieta manipulada foram analisados para mesófilos aeróbios, coliformes a 35°C e a 45°C, Escherichia coli, Estafilococos coagulase positiva, Salmonella sp., bolores e leveduras. A água proveniente da torneira e do filtro do lactário, utilizada para hidratação de pacientes em Nutrição Enteral e para o transporte das dietas, foi analisada quanto a sua potabilidade. A estrutura e os processos em Nutrição Enteral da Unidade Hospitalar também foram analisados quanto a sua adequação às Boas Práticas de Preparação e Administração em Nutrição Enteral, que seguiu a Resolução da Diretoria Colegiada nº 63/2000, da Agência Nacional de Vigilância Sanitária. Na análise laboratorial da composição centesimal, foi encontrado um déficit de 31,9% de lipídeos, que influenciou nos resultados de carboidratos e calorias. O teste de esterilidade comercial das dietas enterais revelou alterações físicas no produto e contagem de bolores e leveduras acima do permitido pela legislação específica. As amostras da dieta manipulada mostraram-se dentro dos limites recomendados pela legislação para a maioria micro-organismos analisados, exceto para mesófilos aeróbios, bolores e leveduras. A maioria das amostras de água analisadas era potável, exceto uma amostra da água utilizada para o transporte da dieta. O resultado da análise da adequação às Boas Práticas de Preparação em Nutrição Enteral e para as Boas Práticas de Administração em Nutrição Enteral foi de 59,5% e de 43,2%, respectivamente. Concluiu-se que a real composição de nutrientes não esta de acordo com a informação nutricional do produto, o produto encontrou-se impróprio para consumo quando hermeticamente fechado e quando manipulado, e que a unidade hospitalar necessita de um maior controle de seus processos em Nutrição Enteral e de adequações às legislações vigentes. / The Enteral Nutrition Therapy in hospitalized patients requires training and commitment of everyone involved in this process. In addition, enteral feeding should be held regarding the nutritional and hygienic- sanitary aspects, ensuring the recovery of patients and quality of service. This study aimed to evaluate the physicochemical and microbiological quality of an enteral diet industrialized as well as evaluating the Enteral Nutrition Practice in a hospital in southern Rio Grande do Sul brand enteral feeding was selected industrialized most prescribed to adult patients of the Medical Clinic of the hospital. This mark was analyzed for its chemical composition for comparison with the label information, as their commercial sterility and the level of microbial contamination when handled and distributed at the hospital. The sampling points of manipulated diet were analyzed for aerobic mesophilic, coliform bacteria at 35°C and 45°C, Escherichia coli, coagulase positive staphylococci, Salmonella sp., Molds and yeasts. The water from the tap and filter lactary used for hydration of patients enteral and to transport the diets was analyzed for its potability. The structure and processes in Enteral Nutrition Unit of the Hospital were also analyzed for its suitability to Good Practice for Preparation and Administration Enteral Nutrition, which followed the Board Resolution No. 63/2000, the National Health Surveillance Agency. In laboratory analysis of the chemical composition, found a deficit of 31,9% lipids, which influence the results of carbohydrates and calories. Testing for commercial sterility of enteral diets showed physical changes in product and mold and yeast counts above those permitted by specific legislation. Samples of manipulated diet were within the limits recommended by the legislation for most micro -organisms analyzed except for mesophilic aerobic, yeasts and molds. Most of the water samples analyzed was drinking except a sample of the water used to transport the diet. The result of the analysis of compliance with Good Practice in Preparation for Enteral Nutrition and Good Management Practices in Enteral Nutrition was 59.5% and 43.2%, respectively. It was concluded that the actual nutrient composition is not according to the nutritional information on the product, the product was found unfit for consumption when tightly sealed and when manipulated, and that the hospital needs more control of its processes in Nutrition enteral and adaptations to existing laws.

Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / Hypothyroidism is characterized by a disorder resulting from deficiency of thyroid hormones and is related to lipid metabolism dysfunction and cardiovascular diseases development risk. However, these changes in hypothyroidism need to be understood. Thus, this study aimed to evaluate the association between lipid, inflammatory and oxidative stress markers in patients with hypothyroidism and antioxidant effects of quercetin in these markers, using hypothyroidism experimental model induced by methimazole in rats. The methodology and results are presented in the form of articles. In article 1, were evaluated the oxidative stress biomarkers in 20 patients with subclinical hypothyroidism (SH) (49.12 ± 10.85 years). Thiobarbituric acid reactive substances (TBARS), superoxide dismutase (SOD), catalase (CAT) and arylesterase (ARE) were analyzed in SH patients and controls. In addition, were measured plasmatic lipids: total cholesterol (TC), triglycerides (TGs), high-density lipoprotein cholesterol (HDL-C) and low-density lipoprotein cholesterol (LDL-C). TBARS levels and CAT activity were higher in subclinical hypothyroidism patients, such as TC and LDL-C plasmatic levels. Arylesterase activity was lower in the SH group. Correlations were observed between plasmatic lipids and oxidative stress biomarkers and thyroid-stimulating hormone (TSH). TSH was correlated with TBARS, CAT, and SOD. The second study (manuscript 1) aimed to investigate the association between inflammatory biomarkers and overt hypothyroidism (OH). Plasmatic levels of cytokines were determinate: interleukin 1 (IL-1), interleukin 6 (IL- 6), tumor necrosis factor alpha (TNF-α), interferon gamma (INF-ɣ) and the levels of cell free DNA (cf-DNA). Furthermore, we evaluated lipid profile and prothrombotic markers (fibrinogen and D-dimer). OH patients had pro-inflammatory profile, resulted from high levels of cytokines and cf-DNA. Lipids and prothrombotic markers also showed elevated. Significant associations between inflammatory status and lipid profile were observed in hypothyroid patients. Manuscript 2 evaluates the effect of quercetin on oxidative stress biomarkers in methimazole (MMI) - induced hypothyroid rats. Hypothyroidism was induced by administering MMI at 20 mg/100 ml in the drinking water, for 30 days. After this period, rats received orally 10 or 25 mg/kg of quercetin (QT) for 8 weeks. Sixty male wistar rats were randomly divided into six groups (group I, control; group II, QT10; group III, QT25; group IV, hypothyroid; group V, hypothyroid + QT10; group VI, hypothyroid + QT25). Hypothyroid rats showed hepatic, renal and serum TBARS levels increased, along with increased protein carbonyl (PCO) in liver and increased ROS levels in liver and kidney. Quercetin administration (QT10 and 25), was effective in decreasing TBARS levels in serum and kidney, PCO in liver and ROS generation in liver and kidney tissues. Moreover, in hypothyroid group were observed high TBARS levels in cerebral cortex and hippocampus. QT25 treatment decreased the levels in both tissues. Administration of QT25 to hypothyroid rats resulted in decreased SOD activities in liver and whole blood and increased liver CAT activity. Ascorbic acid levels and total oxidative scavenging capacity (TOSC) were increased in liver and kidney rats after QT10 and QT25 treatment. These results suggest association between oxidative stress and hypothyroidism that may potentially modulated by antioxidant supplementation such as quercetin. These findings are of great importance in understanding the biochemical dysfunctions and oxidative status in hypothyroidism, as well as, in research of antioxidants strategies to be used as adjuncts in the treatment of this disorder. / O hipotireoidismo é caracterizado por uma desordem decorrente da deficiência de hormônios tireoideanos, estando relacionado a disfunções no metabolismo lipídico e ao risco de desenvolvimento de doenças cardiovasculares. Entretanto, estas alterações no hipotioreodismo precisam ser melhor compreendidas. Assim, este trabalho teve como objetivo avaliar a associação de marcadores lipídicos, inflamatórios e de estresse oxidativo em pacientes com hipotireoidismo e o efeito antioxidante da quercetina nestes marcadores, utilizando como modelo experimental o hipotireoidismo induzido por metimazol em ratos. A metodologia e resultados são apresentados sob a forma de artigos. No artigo 1, foram avaliados biomarcadores de estresse oxidativo em 20 pacientes com hipotireoidismo subclínico (HSC) (49,12 ± 10,85 anos). Os níveis de substâncias reativas ao ácido tiobarbitúrico (TBARS), e as atividades das enzimas superóxido dismutase (SOD), catalase (CAT) e arilesterase (ARE) foram determinadas em pacientes com HSC e controles. Além disso, foram investigados os níveis de lipídeos plasmáticos: colesterol total (CT), triglicerídeos (TG) e as lipoproteínas de alta (HDL) e baixa densidade (LDL). Os níveis de lipoperoxidação determinado pela medida do TBARS e a atividade da enzima CAT estavam aumentados nos pacientes hipotireóideos, bem como os níveis plasmáticos de CT e colesterol LDL. A enzima ARE mostrou-se diminuída no grupo HSC. Foram evidenciadas correlações entre lipídeos plasmáticos e biomarcadores de estresse oxidativo e com o hormônio de estimulação da tireóide (TSH). O TSH foi correlacionado com TBARS, CAT e SOD. O segundo estudo (manuscrito 1) teve por objetivo investigar a associação entre biomarcadores inflamatórios e o hipotireoidismo clínico (HC). Foram determinados os níveis plasmáticos das citocinas: interleucina 1 (IL-1), interleucina 6 (IL-6), fator de necrose tumoral alfa (TNF- α), interferon gama (INF- ɣ) e os níveis de DNA circulante livre. Além disso, foram avaliados o perfil lipídico e marcadores prótrombóticos (fibrinogênio e D-dímero). Os pacientes com HC apresentaram perfil próinflamatório, resultante dos níveis elevados das citocinas e do DNA livre. Os lipídeos e os marcadores pró-trombóticos também se apresentaram elevados. Associações significativas entre o perfil inflamatório e o perfil lipídico foram observadas nos pacientes hipotireóideos. No manuscrito 2 avaliou-se o efeito da quercetina sobre biomarcadores de estresse oxidativo em um modelo de hipotireoidismo induzido por metimazol (MMI) em ratos. O hipotireoidismo foi induzido pela administração de MMI na concentração de 20mg/100mL na água de beber, por um período de 30 dias. Após este período, os animais receberam oralmente 10 ou 25 mg/kg de quercetina (QT) por um período de 8 semanas. Ratos machos wistar (n=60) foram divididos em seis grupos (grupo I, controle; grupo II, QT10; grupo III, QT25; grupo IV, hipotireóideo; grupo V, hipotireóideo + QT10; grupo VI, hipotireóideo + QT25). Os ratos hipotireóideos apresentaram níveis de TBARS hepático, renal e séricos aumentados, bem como os níveis de proteína carbonil (PCO) no fígado e os níveis de espécies reativas de oxigênio (ERO) no fígado e rins. A administração de quercetina (QT 10 e 25) diminuiu os níveis de TBARS em soro e rins, a PCO no fígado e a geração de ERO nos tecidos hepático e renal. Além disso, no grupo hipotireóideo foram observados altos níveis de TBARS no córtex cerebral e hipocampo. O tratamento com QT25 reduziu os níveis em ambos os tecidos. A administração de QT 25 aos ratos com hipotireoidismo diminuiu a atividade da SOD em fígado e sangue total e aumentou a atividade hepática da CAT. Os níveis de ácido ascórbico e a capacidade antioxidante total aumentaram no fígado e rins dos ratos após tratamento com QT10 e QT25. O conjunto dos resultados sugeriu associação entre estresse oxidativo e hipotireoidismo que pode ser potencialmente modulado por suplementação de antioxidantes como a quercetina. Estes achados são de grande importância no entendimento das disfunções bioquímicas e do status oxidativo no hipotireoidismo como também na busca de estratégias antioxidantes a serem utilizadas como coadjuvantes no tratamento desta disfunção.

Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / Lipid additives used in the nutrition of dairy cows may affect both milk fat composition, as modifying the individual fatty acid profile, reducing methane emissions, becoming a sustainable practice for dairy cattle. To verify the effect of an additive based on medium chain fatty acids (MCFA) containing caproic acid, caprylic, capric, lauric and myristic, four treatments were tested: CTL (control without addition of MCFA), AGCM20 (5g MCFA), AGCM40 (10g MCFA) and AGCM80 (20g MCFA) on in vitro production gas (Experiment 1) and in the diet of lactating cows (Experiment 2). The bottles were distributed in a completely randomized design with repeated measurements over time and animals in triple latin square with four animals, four periods, four treatment, respectively. In Experiment 1 evaluated the production of gas, short chain fatty acids (SCFA) and methane (CH4); in Experiment 2 the productive parameters of milk and individual profile of fatty acids of milk fat. There was a significant decrease in gas production and methane (P<0.05), changing the profile of SCFA production in vitro treatment gas in AGCM40 and 80 compared with the control. No effects on productive parameters (P>0.05), however, were observed linear increase of C17:0 and C18: 3n6 (P<0.05) in the treatments AGCM20 and 80 respectively. It has been found that the use of MCFA 10 and 20g reduce the production of methane, without altering milk production and fatty acids of milk. / Aditivos lipídicos utilizados na nutrição de vacas leiteiras podem afetar tanto a composição da gordura do leite, quanto modificar o perfil de ácidos graxos individuais, reduzindo as emissões de metano, tornando-se uma prática sustentável para pecuária leiteira. Para verificar o efeito de um aditivo a base de ácidos graxos de cadeia média (AGCM), contendo ácido capróico, caprílico, cáprico, láurico e mirístico, foram testados quatro tratamentos: CTL (controle, sem suplementação), AGCM20 (5g AGCM), AGCM40 (10g AGCM) e AGCM80 (20g AGCM) na produção in vitro gás (Experimento 1) e na dieta de vacas em lactação (Experimento 2). Os frascos foram distribuídos em um delineamento inteiramente casualizado com medidas repetidas no tempo e os animais em um triplo quadrado latino, com quatro animais, quatro períodos, quatro tratamentos, respectivamente. No experimento 1 foram avaliados a produção de gás, ácidos graxos de cadeia curta (AGCC) e metano (CH4); no Experimento 2 os parâmetros produtivos de leite e perfil individual dos ácidos graxos da gordura do leite. Houve redução significativa na produção de gás e metano (P<0,05), alterando o perfil de AGCC na produção in vitro gás nos tratamento AGCM40 e 80 em comparação com o controle. Não foram observados efeitos nos parâmetros produtivos (P>0,05), entretanto, foram observados aumentos lineares de C17:0 e C18:3n6 (P<0,05), nos tratamentos AGCM20 e 80 respectivamente. Foi constatado que o uso de 10 e 20g de AGCM reduz a produção de metano, não alterando a produção de leite.

Os mecanismos pelos quais a produção in vitro de embriões (PIVE) bovinos gera embriões com excessivo acúmulo lipídico, com elevado estresse celular e com reduzida criotolerância ainda são desconhecidos. Também permanece desconhecido quando essas alterações acontecem, se acontecem desde a maturação oocitária e o papel que as células do cumulus possuem neste mecanismo. O objetivo do presente trabalho foi estudar e comparar o metabolismo lipídico e homeostase celular, além dos perfis de miRNAs, durante a maturação oocitária e o desenvolvimento embrionário inicial in vivo e in vitro em bovinos. Para isso, o trabalho foi dividido em 4 estudos. No Estudo 1, intitulado \"A maturação in vitro gera complexos cumulus-oócitos metabolicamente desregulados e estressados em bovinos\" foram analisadas as células do cumulus e oócitos de complexos cumulus-oócitos (COCs) imaturos e maturados in vivo e in vitro. Foram realizadas análises de quantificação de lipídeos, espécies reativas de oxigênio (EROs), glutationa reduzida (GSH), razão ATP/ADP assim como expressão de mRNAs e miRNAs relacionados com as vias de metabolismo e homeostase celular. A partir dos dados obtidos neste estudo, concluímos que a maturação in vitro (MIV) provoca aumento de lipídeos no COC, diminuição de GSH e da atividade mitocondrial nos oócitos, acompanhado por uma desregulação massiva das vias relacionadas a metabolismo e homeostase nas células do cumulus da MIV. No Estudo 2, intitulado \"A proteína ligadora de ácidos graxos 3 (Fatty Acid Binding Protein 3 - FABP3) e as projeções transzonais estão envolvidas no acúmulo lipídico durante a maturação in vitro em oócitos bovinos\" foi constatado aumento do conteúdo lipídico e da expressão da FABP3 nas células do cumulus da MIV, quando comparado ao sistema in vivo. Ainda, imunolocalizamos a FABP3 dentro das projeções transzonais (TZPs) e verificamos um aumento concomitante da FABP3 e dos lipídeos oocitários nas primeiras 9 horas da MIV. Mediante a remoção das TZPs às 9 horas da MIV e consequente diminuição lipídica observada no oócito, concluímos que existe um possível transporte de ácidos graxos a partir das células do cumulus até o oócito mediante FABP3 e TZPs. No Estudo 3, intitulado \"Alterações no metabolismo lipídico e homeostase celular entre embriões bovinos produzidos in vivo e in vitro\", verificamos que, mesmo utilizando um cultivo in vitro com baixa tensão de oxigênio e sem soro, os blastocistos da PIVE possuem maiores níveis de lipídeos e EROs que aqueles produzidos in vivo. Além disso, constatamos que essas alterações nos lipídeos durante a PIVE não estão acompanhadas de alterações de expressão, porém, existe um aumento na expressão de genes relacionados com estresse. No último estudo, \"O sistema in vitro altera o perfil de miRNAs durante a maturação oocitária e desenvolvimento embrionário inicial em bovino\", constatamos as diferenças no perfil de miRNAs e nas vias reguladas por estes nas células do cumulus e oócitos maturados in vivo e in vitro e em blastocistos produzidos in vivo e in vitro. Verificamos uma maior regulação por miRNAs durante a maturação nas células do cumulus comparado ao oócito. Além do mais, tanto no COC quanto nos blastocistos, os miRNAs mostraram regular vias importantes do metabolismo, comunicação celular e vias de sinalização importantes para a maturação e desenvolvimento embrionário inicial. Conjuntamente, este trabalho permitiu elucidar as diferenças que a PIVE provoca no metabolismo e homeostase celular e na expressão de miRNAs. / The mechanism through which in vitro embryo production (IVEP) generates embryos with higher lipid accumulation, overstressed and with reduced cryotolerance is unknown. It is also unknown when these alterations take place, if occurs since the oocyte maturation and the role of cumulus cells in this mechanism are also unknown. The aim of the present work was to study and compare the lipid metabolism and cellular homeostasis, as well as the miRNAs profile during oocyte maturation and early in vivo and in vitro embryo development in bovines. For that, the present work was divided in 4 studies. In Study 1, entitled \"in vitro maturation generates metabolically disrupted and overstressed cumulus-oocyte complexes in bovines\" cumulus cells and oocytes from immature and in vivo and in vitro matured cumulus-cells complexes (COC) were analyzed. Analysis of lipid stores, oxygen reactive species (ROS), reduced glutathione and ATP/ADP ratio quantification, as well as mRNAs and miRNAs involved with metabolism and cellular homeostasis pathways were performed. From the obtained data in this study, we concluded that in vitro maturation (IVM) leads to an increase of lipids in the COC, a decrease of oocyte GSH and mitochondrial activity, as well as a massive deregulation in metabolism and homeostasis related pathways in MIV cumuls cells. In Study 2, \"Fatty Acid Binding Protein 3 and transzonal projections are involved on lipid accumulation during in vitro maturation in bovine oocytes\" we observed an increase of lipid accumulation and FABP3 expression in MIV cumulus cells when compared to the in vivo system. Furthermore, we immunolocalized the FABP3 inside the transzonal projections (TZPs) and verified a concomitant increase of FABP3 and oocyte lipids on the first 9 hours of MIV. By removing the TZPs at 9 hours of MIV and by the consequent lipid decrease observed in the oocyte, we concluded that there is a possible traffic of fatty acids from the cumulus cells to the oocyte mediated by FABP3 and TZPs. In Study 3, entitled \"Alterations in lipid metabolism and cellular homeostasis between in vivo and in vitro produced bovine embryos\", we observed that, even though under serum free and low oxygen tension used during in vitro culture was used, IVP blastocysts had higher lipid and ROS levels than the counterparts produced in vivo. Moreover, we found that these lipid alterations during IVP are not followed by corresponding genes expression alterations, however, there is an increase of the expression of stress related genes. In the last study, \"in vitro system alters miRNAs profile during oocyte maturation and early embryo development in bovines\", we observed differences in miRNAs profiles and in pathways modulated by them in in vivo and in vitro matured cumulus cells and oocytes and in in vivo and in vitro produced blastocysts. We observed an intense miRNAs regulation during maturation in cumulus cells when compared to the oocyte. Furthermore, in both COC and blastocysts, miRNAs regulated important metabolism, cellular communication pathways, as well as important signaling pathways for maturation and early embryo development. Taken together, the findings of the present work allowed us to elucidate the differences caused by IVEP on cell metabolism and homeostasis as well as on miRNAs expression.