A glutationa S-transferase (GST) tem a capacidade de conferir resistência do tipo não-alvo aos efeitos danosos de certos herbicidas em várias culturas, principalmente gramíneas. Entretanto, o papel das GSTs em relação aos herbicidas em cana-de-açúcar é desconhecido, e tal elucidação poderia auxiliar na redução de perdas de produtividade e/ou aumento na eficiência de produção. O objetivo desse trabalho foi caracterizar as diversas classes de GST de cana-de-açúcar por análise filogenética e padrão de expressão por amplificação quantitativa de transcritos reversos (RT-qPCR). Foi realizada no banco de dados de Saccharum Gene Index a busca completa das seqüências codificadoras de GST referentes às classes Phi, Tau, Theta e Zeta, baseando-se nos 61 genes de GST de arroz; estas foram traduzidas e empregadas em análise filogenética. Foram identificados 18 agrupamentos de ESTs codificando GSTs, totalizando 355 transcritos das 255.635 seqüências disponíveis no banco de dados. A análise filogenética identificou 7 agrupamentos como pertencentes à classe Phi (denominados ScGSTF), 7 como Tau (ScGSTU), 1 como Theta (ScGSTT), e 3 como Zeta (ScGSTZ); respectivamente. As classes Phi e Tau, consideradas planta-específica, foram as mais representativas em termos de número de agrupamentos de ESTs em relação à Theta e Zeta (mamífero-específica). Os 18 agrupamentos de cana-de-açúcar equivalem aos genes mais expressos em termos de número de ESTs individuais em arroz. Foram extraídos RNA de diversos tecidos/órgãos, e de tecido foliar das cultivares \'SP87-365\' e \'SP80-3280\' coletados a 0 e 48 h após tratamento com herbicidas, seguida da síntese de cDNA e RT-qPCR. O gene da proteína ribossômica rpl35-4 foi determinado como referência nas análises de expressão. A expressão nos tecidos/órgãos mostraram que os genes ScGSTF3, ScGSTU8 e ScGSTU13 foram menos expressos no colmo, inflorescência, meristema e raiz em relação ao limbo foliar; ScGSTF4, ScGSTF6, ScGSTF14 e ScGSTF15 foram mais expressos no colmo; ScGSTF5, ScGSTU1, ScGSTU17, ScGSTU31, ScGSTU39 e ScGSTT1 na inflorescência; e ScGSTZ1 foi único mais expresso no meristema. De forma geral, todas as classes tiveram expressão detectada nos tecidos, mas os genes da Phi e Tau foram os mais expressos. Os genes da classe Phi foram mais expressos no colmo em relação aos demais; os da classe Tau e Theta na inflorescência; e os da Zeta no meristema. A validação a 0 h determinou que os genes ScGSTF3, ScGSTF4, ScGSTU8, ScGSTU13 e ScGSTU17 foram os mais expressos na cultivar \'SP80-3280\' em relação à \'SP87-365\'. As evidentes diferenças na expressão basal entre as cultivares foram dos genes das classes Phi e Tau. Com relação à expressão das GSTs 48 h após aplicação dos herbicidas, foi observado que a aplicação de Ametryn ou Diuron, os genes de GST foram induzidos, enquanto foram reprimidos com Imazapic ou Isoxaflutole. Os genes ScGSTF3, ScGSTF4, ScGSTU13 e ScGSTU17 foram os mais expressos nas cultivares tratadas com os herbicidas; e foram considerados possíveis candidatos a associação em resposta a desintoxicação desses herbicidas. O Southern blot determinou que o maior número de cópias de GST em cana-de-açúcar foi os pertencentes às classes Phi e Tau, sendo nas classes Zeta e Theta, menos freqüentes / Glutathione S-transferase (GST) has the ability to confer non-target tolerance to damaging effects of certain herbicides in various crops, especially grasses. However, the role of GSTs in relation to herbicide tolerance in sugarcane s is unknown, and its elucidation could help in reducing yield losses and/or increase in production efficiency. The objective of this work was to characterize the various classes of sugarcane GSTs by phylogenetic analyses and expression profile using RTqPCR. A complete search at the Saccharum Gene Index database was conducted for sequences encoding GSTs from the classes Phi, Tau, Theta and Zeta, based on 61 rice GST genes; the conceptually translated sequences were used in the phylogenetic analyses. Eighteen EST clusters encoding GSTs were identified, in a total of 355 transcripts out of the 255,635 available sequences at the database. Phylogenetic analysis identified 7 groups as belonging to Phi class (denominated ScGSTF), 7 as Tau (ScGSTU), one as Theta (ScGSTT), and 3 as Zeta (ScGSTZ); respectively. The Phi and Tau classes, considered plant-specific, were the most frequent in terms of number of EST clusters in comparison to Theta and Zeta (mammal-specific). The 18 groups of sugarcane ESTs were equivalent to the mostly expressed ortologues in rice. Total RNA from various tissues and organs, and from leaves from cultivars \'SP87-365\' and \'SP80-3280\', collected at 0 and e 48 h after treatment with herbicides were obtained and converted into cDNA, and analyzed by RT-qPCR. The transcript of the ribosomal protein rpl35-4 was established as gene reference for the RT-qPCR analyses. The analyses of expression in tissues/organs demonstrated that the genes ScGSTF3, ScGSTU8 and ScGSTU13 were less expressed in stem, inflorescence, meristem and roots in relation to leaf blades; ScGSTF4, ScGSTF6, ScGSTF14 and ScGSTF15 were more expressed in stems; ScGSTF5, ScGSTU1, ScGSTU17, ScGSTU31, ScGSTU39 and ScGSTT1 in the inflorescence; and ScGSTZ1 was the only more expressed in the meristem. In general, all classes had gene member expression detected in the tissues, but the genes from Phi and Tau were the most expressed. The genes from class Phi were more expressed in the stem in comparison to the others; genes from classes Tau and Theta were more expressed in the inflorescence; and the ones from Zeta in meristem. Gene expression validation at 0 or 48 h after treatment with herbicides determined that ScGSTF3, ScGSTF4, ScGSTU8, ScGSTU13 and ScGSTU17 were more expressed in cultivar \'SP80-3280\' than \'SP87-365\'. The more evident differences in basal expression between cultivars were for genes from classes Phi and Tau. In response to herbicides treatment, GSTs expression was higher in response to Ametryn or Diuron in comparison to Imazapic or Isoxaflutole. Genes ScGSTF3, ScGSTF4, ScGSTU13 and ScGSTU17 displayed more difference in expression at 48 h between cultivars, and might be associated with differences in herbicide detoxification. Southern blot analyses determined that a larger number of GST gene copies in sugarcane from classes Phi and Tau, with less copies from classes Zeta and Theta

Orientador: Rogério Martins Amorim / Coorientador: Fernanda da Cruz Landim Alvarenga / Coorientador: Reneé Laufer-Amorim / Banca: Ana Liz Garcia Alves / Banca: Maria Verônica de Souza / Banca: Brunna Patrícia A. da Fonseca / Banca: Márjorie de Assis Golim / Resumo: O interesse terapêutico e biológico nas células-tronco tem aumentando nos últimos anos, fato este demonstrado pelo número crescente de pesquisas e publicações na área. Na espécie equina, as pesquisas envolvendo o uso da terapia celular com células-tronco mesenquimais (CTMs) estão focadas, particularmente para o tratamento de lesões tendíneas e osteoarticulares, havendo poucos relatos da sua utilização em outros tecidos, tais como o sistema nervoso. Desta forma, as vias de aplicação mais utilizadas até então para uso clínico em equino são as intralesionais e intra-articulares, carecendo assim na medicina equina de estudos pré-clínicos que avaliem a segurança de administração das CTMs em outras vias, tais como a intratecal por via liquórica. Nesse sentido, o objetivo geral deste estudo foi a obtenção, o cultivo e a caracterização das CTMs provenientes da medula óssea (MO) de equinos, além da avaliação da viabilidade e da segurança de aplicação dessas células autólogas por via intratecal através do espaço atlanto-occiptal. Também foi avaliado in vitro o potencial de transdiferenciação das CTMs-MO em fenótipos neurais, utilizando-se dois protocolos de diferenciação neural: P1 (forksolin e ácido retinóico) e P2 (2- mercaptoetanol). Ao término do cultivo primário, a análise imunofenotípica revelou a presença de CTMs com elevada expressão do marcador CD90, seguida de menor expressão para o marcador CD44 e ausência de expressão do marcador CD34. Nos ensaios de diferenciação nas tri-linhagens mesodermais ficou evidenciada a resposta positiva às diferenciações osteogênica (OST), condrogênica (CDG) e adipogênica (ADP) caracterizadas pela deposição de matriz extracelular rica em cálcio (OST), proteoglicanos e colágeno... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Biological and therapeutic interest in stem cells has increased in recent years, a fact demonstrated by the crescent number of research and publications in the area. In equine species, research involving the use of cell therapy with mesenchymal stem cells (MSCs) are focused, particularly for the treatment of tendineous and osteoarticular injuries, having scarces reports of its use in other tissues such as the nervous system. Thus, the pathways of administration most used so far for clinical use in equines are the intralesional and intra-articular, needing thereby in equine medicine of preclinical studies that asses the security of administration of MSCs in other pathways such as intrathecal by liquoric way. In this sense, the general aim of this study was the obtaining, cultivation and characterization of MSCs from bone marrow (BM) of equines, besides the evaluation of the feasibility and safety of application of these autologous cells by intrathecal pathway through atlanto-occipital space. It was also evaluated in vitro the potential of transdifferentiation of MSCs-MO in neural phenotypes, using two protocols of neural differentiation: P1 (forksolin and retinoic acid) and P2 (2- mercaptoethanol). At the end of the primary culture immunophenotypic analysis revealed the presence of MSCs with high expression of marker CD90, followed by the lower expression for the marker CD44 and absence of expression of marker CD34. In tests of differentiation in the tri-lineage mesodermal became evidenced the positive response to osteogenic (OST), chondrogenic (CDG) and adipogenic (ADP) differentiation characterized by the deposition of extracellular matrix rich in calcium (OST), proteoglycans and collagen II (CDG) and deposition of intracellular lipid droplets (ADP). In immunocytochemical characterization MSCs were... (Complete abstract click electronic access below) / Doutor

Orientador: Sandra Cecilia Botelho Costa / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciencias Medicas / Made available in DSpace on 2018-08-08T20:07:57Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Thomasini_RonaldoLuis_M.pdf: 1552471 bytes, checksum: 69e020e777011a1dab1c773d2466694a (MD5) Previous issue date: 2007 / Resumo: Neste estudo, 29 pacientes adultos, transplantados de fígado foram monitorados (até 180 dias pós-transplante) para infecções ativas por HCMV, HHV-6 e HHV-7 usando Nested-PCR (N-PCR). O protocolo de imunossupressão foi baseado na combinação de esteróides e ciclosporina e profilaxia com ganciclovir não foi usada. Aciclovir foi usado como profilaxia para o Herpes simples. Um grupo controle foi estudado, N-PCR em DNA extraído de PBL e soro de 53 indivíduos sadios foram realizados. Destes indivíduos, 8 amostras de saliva foram coletadas para isolamento do HHV-7 e produção de controle positivo. DNA do HHV-7 foi detectado em 87,5% de saliva, em 28,3% de PBL e 0% de soro. Isolamento do vírus mostrou ser 100% correlato com N-PCR. Soro foi considerado a amostra de escolha para detectar infecção ativa por HHV-7. DNA do HHV-6, HHV-7 e HCMV foram, frequentemente, detectados em pacientes após transplante hepático (65,5%, 51,7% e 48,2%, respectivamente). A maioria dos pacientes com infecção ativa por mais que um vírus é infectado de forma seqüencial e não concorrente. Infecção ativa por HHV-7 ocorreu em muitos casos antes da infecção ativa por HCMV e/ou HHV-6 indicando que ele poderia ser um fator para reativação daqueles vírus. Nested-PCR para HCMV teve valor preditivo positivo de 50% e valor preditivo negativo de 100% para infecção sintomática. Neste estudo, o HCMV foi relacionado disfunção do enxerto, HHV-6 foi associado com pneumonite, encefalite, disfunção e rejeição do enxerto e predisposição para infecção oportunista. Em pacientes livres de HCMV e/ou HHV-6, nenhuma manifestação clínica nem achados laboratoriais significativos foram relacionados ao HHV-7. O tratamento antiviral com ganciclovir foi considerado satisfatório para o HCMV, mas para o HHV-6 e HHV-7, os dados não foram conclusivos. O aciclovir poderia ter demonstrado uma limitada atividade contra o HHV-7 / Abstract: In this study, 29 adult liver transplant patients were monitored (until day 180th posttransplantation) for HCMV, HHV-6 e HHV-7 active infections using Nested-PCR (N-PCR). Immunosuppression protocol was based on combinations of steroids and cyclosporine and no ganciclovir prophylaxis was used. Aciclovir was employed as Herpes simplex prophylaxis. A control group was studied; N-PCR in DNA extracted from PBL and serum of 53 healthy individuals was carried out. From these individuals, 8 samples of saliva were collected to design a positive control to N-PCR. HHV-7 DNA was detected in 87.5% of saliva, in 28.3% of PBL and 0% of serum. Virus isolation showed to be 100% correlated with N-PCR. Serum was considered to be the sample of choice to detect HHV-7 active infection. HHV-6, HHV-7 and HCMV DNA were frequently detected in patients after liver transplant (65.5%, 51.7% and 48.2%, respectively). The results show that few patients remain negative to active infection with betaherpesviruses after liver transplantation. Most of the patients with active infection with more than one virus were infected sequentially and not concurrently. HHV-7 active infection occurred in most of cases prior HCMV and HHV-6 active infections indicating that it could be a factor to reactivation of these viruses. HCMV Nested-PCR presented positive predictive value of 50% and negative predictive value of 100%. In this study, HCMV was related with graft dysfunction, HHV-6 was associated with pneumonitis, encephalitis, liver dysfunction, graft rejection and predisposition to opportunist infections. In HCMV and/or HHV-6 free patients, no clinical manifestation nor significant laboratory findings was related to HHV-7. Ganciclovir Antiviral treatment was considered satisfactory to HCMV symptomatic infections but to HHV-6 and HHV-7, no conclusive data was found. Aciclovir could be a limited activity against HHV-7 / Mestrado / Farmacologia / Mestre em Farmacologia

Orientador: Aarão Mendes Pinto-Neto / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciências Médicas / Made available in DSpace on 2018-08-19T08:21:35Z (GMT). No. of bitstreams: 1 ClaroJunior_Francisco_M.pdf: 1505915 bytes, checksum: 78bcbaa4da8cbfbdd83f72a8939d4506 (MD5) Previous issue date: 2011 / Resumo: Introdução: a enxertia de gordura autóloga lipoaspirada na topografia mamária permanece controversa quanto a efetividade para fins estéticos e reparadores e a segurança do procedimento. O objetivo do estudo foi realizar uma revisão sistemática da literatura sobre a aplicabilidade clínica do procedimento e a segurança em relação às complicações clínicas, as alterações radiológicas e o risco oncológico. Métodos: busca digital na Cochrane Library, MEDLINE, EMBASE e SCIELO, entre julho de 1986 a junho de 2011. A revisão incluiu artigos com casos originais, em mulheres, enxertia de gordura autóloga recém-lipoaspirada, topografia mamária, descrição de complicações clínicas e/ou alterações radiológicas e/ou recidiva de câncer mamário. Resultados: Foram incluídos nesta revisão 60 artigos, que totalizaram 4739 casos. A lipoenxertia mamária foi utilizada satisfatoriamente para o tratamento estético e reconstrutivo das mamas. Foram identificadas 155 complicações clínicas, sendo 60% de enduramento e/ou nodulação palpável. A sua incidência, avaliada em 21 estudos, foi de 64/3015. A incidência de alterações radiológicas, avaliada em 17 estudos, foi de 266/2560. Imagens compatíveis com cisto à mamografia e/ou ultrassonografia e/ou ressonância nuclear magnética foram identificadas em mais da metade destes casos. Não foi identificado um único caso de câncer de mama primário. A incidência de recorrência local foi avaliada em três estudos, sendo 14/616 e não foi diferente nas mulheres mastectomizadas sem lipoenxertia. Conclusão: Foi identificada ampla aplicabilidade clínica da lipoenxertia autóloga na mama com baixo índice de complicações e sem evidência de comprometimento na detecção do câncer de mama. Em relação ao risco oncológico, pelo pequeno número de casos, os resultados embora aparentemente seguros, não foram conclusivos / Abstract: Background: Autologous fat grafting to the breast for cosmetic and reconstructive purposes is still controversial regarding the safety and efficacy of the procedure. The aim of this study was to conduct a systematic review on clinical applicability and safety of the technique concerning clinical complications, radiographic changes and oncological risk. Methods: an online search of the Cochrane Library, MEDLINE, EMBASE and SCIELO was conducted from July 1986 to June 2011. Studies included original articles of autologous liposuctioned fat grafting to the female breast with description of clinical complications and/or radiographic changes and/or local breast cancer recurrence. Results: This review included 60 articles (total: 4739 patients). Thirty studies use fat grafting for augmentation and 41 for reconstructive procedures. It was satisfactory in aesthetic and reconstructive breast treatment. Clinical complications incidence identified in 21 studies was 64/3015, the majority of them were induration and/or palpable nodulation. The incidence of radiographic changes was 266/2560 in 17 studies. Fifty per cent of Images changes were consistent with cysts on mammography and/or ultrasound and/or magnetic resonance. There were no cases of primary breast cancer. The incidence of local recurrence (14/616) was evaluated in just three studies and among them only one is prospective and none is randomised. Conclusion: a broad clinical applicability of autologous fat grafting to the breast was found. Complication rate was low and there was no evidence of interference with breast cancer detection. Although apparently safe, study results concerning oncological risk are not clear at present / Mestrado / Oncologia Ginecológica e Mamária / Mestre em Ciências da Saúde

Submitted by Edisangela Bastos (edisangela@ufpa.br) on 2014-02-26T17:36:27Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 23898 bytes, checksum: e363e809996cf46ada20da1accfcd9c7 (MD5) Dissertacao_AtivacaoEspermaticaCriopreservacao.pdf: 1141968 bytes, checksum: 74eed1f405ad30396a6689d7773d3614 (MD5) / Approved for entry into archive by Ana Rosa Silva (arosa@ufpa.br) on 2014-02-27T13:15:31Z (GMT) No. of bitstreams: 2 license_rdf: 23898 bytes, checksum: e363e809996cf46ada20da1accfcd9c7 (MD5) Dissertacao_AtivacaoEspermaticaCriopreservacao.pdf: 1141968 bytes, checksum: 74eed1f405ad30396a6689d7773d3614 (MD5) / Made available in DSpace on 2014-02-27T13:15:31Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 23898 bytes, checksum: e363e809996cf46ada20da1accfcd9c7 (MD5) Dissertacao_AtivacaoEspermaticaCriopreservacao.pdf: 1141968 bytes, checksum: 74eed1f405ad30396a6689d7773d3614 (MD5) Previous issue date: 2010 / CAPES - Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / CNPq - Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / A espécie Cebus apella (macaco-prego) é amplamente utilizada como modelo experimental na pesquisa biomédica. Entretanto, são escassos os estudos dedicados a avaliar o sêmen desses animais, que é composto por uma fração líquida e uma coagulada de difícil manipulação e alta concentração de espermatozóides imóveis. Portanto, objetivou-se I) avaliar o efeito de duas concentrações de cafeína (6 e 10 mM/mL) diluídas em TES-TRIS e água de coco in natura (ACIN) na ativação de espermatozóides de C. apella e II) testar um protocolo de criopreservação do sêmen comparando dois diluidores (TES-TRIS e ACIN) acrescidos de gema de ovo e glicerol. O sêmen de seis animais mantidos no Centro Nacional de Primatas foi coletado por eletroejaculação, diluído na fração-A de TES-TRIS ou ACIN, e incubado a 35°C até dissolução do coágulo seminal. O tempo de liquefação foi comparado. Posteriormente foi mensurado volume, concentração, morfologia espermática e percentual de espermatozóides vivos. No experimento I as amostras foram diluídas em TES-TRIS ou ACIN acrescidos de 6 e 10 mM de cafeína após o término da motilidade durante a liquefação e mantidas a 35°C. Motilidade e vigor foram avaliados por 5 h. Para o experimento II, após liquefação, o sêmen foi diluído na fração-B (fração-A + gema de ovo e glicerol) dos diluidores, envasado, resfriado a 4°C (2 h), em seguida a -60°C (20 min), antes de ser mergulhado em nitrogênio líquido. O sêmen foi descongelado a 35°C (5 min). Os resultados foram expressos como média ± EP. O efeito dos diluidores foi comparado pelo teste t Student e ANOVA (p _ 0,05). O coágulo liquefez em 4,5 ± 1,7 e 2,8 ± 1,1 horas (p < 0,05) em TES-TRIS e ACIN respectivamente. O volume médio, concentração, percentual de espermatozóides normais e vivos antes de congelação foi respectivamente 0,6 ± 0,2 mL; 1.806 ± 367 x 106 espermatozóides/mL; 81,3 ± 2, e 40,1 ± 3,3 (TES-TRIS) e 30,9 ± 4 (ACIN). A duração da motilidade em TES-TRIS e ACIN foi, respectivamente, 5 ± 1,4 e 1 ± 0,5 h. A motilidade média nesse período foi 38 ± 10% (TES-TRIS) e 18 ± 9% (ACIN). Foi verificado aumento da motilidade após adição de cafeína apenas nas amostras diluídas em ACIN 6 mM (21 ± 9%) e ACIN 10 mM (22 ± 11) (p > 0,05). O percentual de espermatozóides vivos após descongelação foi 26,2% em TES-TRIS e 13,2% em ACIN (p < 0,05). Para a criopreservação de sêmen de C. apella TES-TRIS é mais indicado e pode, assim como ACIN + cafeína, ser empregado na inseminação artificial com sêmen a fresco diluído. / The species Cebus apella (capuchin monkey) is an important experimental model used in biomedical research. However, there are few reports regarding their semen, which is composed by both liquid and coagulated fractions, difficult to handle and containing a high proportion of immobile spermatozoa. Thereafter, the aims of this study were to: I) evaluate the effect of two caffeine concentrations (6 and 10 mM/mL) diluted in TES-TRIS and coconut water solution (CWS) on the activation of C. apella spermatozoa and; II) test and compare two extenders for semen cryopreservation (TES-TRIS and CWS plus egg yolk and glycerol). Semen from six males maintained at the National Primate Center was collected by electroejaculation, diluted in A-fraction of TES-TRIS or CWS, and incubated at 35 °C until coagulum liquefaction. In Experiment I, the samples were diluted in TES-TRIS or CWS plus 6 and 10 mM caffeine after stopped motility during liquefaction and maintained at 35 °C. Motility and vigor were evaluated for 5 h. In Experiment II, after liquefaction, semen was diluted in B-fraction (A-fraction + egg yolk and glycerol) of the extenders, packed, cooled to 4 °C (2 h), then to -60 °C (20 min), before being plunged into liquid nitrogen. Semen was thawed at 35 °C (5 min). The results were expressed as mean ± SEM. The seminal coagulum liquefied in 4.5 ± 1.7 and 2.8 ± 1.1 hours in TES-TRIS and CWS, respectively. Volume, concentration, percentage of normal and live sperm before freezing were, respectively, 0.6 ± 0.2 mL; 1806 ± 367 x 106 spermatozoa/mL; 81.3 ± 2, and 40.1 ± 3.3 (TES-TRIS) and 30.9 ± 4 (CWS). For TES-TRIS and CWS, the duration of sperm motility was 5 ± 1.4 and 1 ± 0.5 hours and mean motility was 38 ± 10% and 18 ± 9%, respectively. Motility increased after caffeine addition only in samples diluted in CWS 6 mM (21 ± 9%) and CWS 10 mM (22 ± 11) (p > 0.05). Post-thaw live sperm percentage was 26.2 in TES-TRIS and 13.2 in CWS (p < 0.05). For cryopreservation of semen from C. apella TES-TRIS was more appropriate than CWS. However, TES-TRIS and CWS + caffeine potentially may be useful in artificial insemination of fresh diluted semen.

Submitted by Edisangela Bastos (edisangela@ufpa.br) on 2014-06-09T18:09:42Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 23898 bytes, checksum: e363e809996cf46ada20da1accfcd9c7 (MD5) Dissertacao_ComparacaoTRILactose.pdf: 12362671 bytes, checksum: befb540e1392ea0ad095eb2c9ad74dae (MD5) / Approved for entry into archive by Ana Rosa Silva (arosa@ufpa.br) on 2014-07-02T12:39:58Z (GMT) No. of bitstreams: 2 license_rdf: 23898 bytes, checksum: e363e809996cf46ada20da1accfcd9c7 (MD5) Dissertacao_ComparacaoTRILactose.pdf: 12362671 bytes, checksum: befb540e1392ea0ad095eb2c9ad74dae (MD5) / Made available in DSpace on 2014-07-02T12:39:58Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 23898 bytes, checksum: e363e809996cf46ada20da1accfcd9c7 (MD5) Dissertacao_ComparacaoTRILactose.pdf: 12362671 bytes, checksum: befb540e1392ea0ad095eb2c9ad74dae (MD5) Previous issue date: 2012 / CNPq - Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / O objetivo do experimento foi testar a eficácia de diferentes diluidores, a base de Ringer-Lactato, Leite Desnatado, TRIS (hidroxi-methil-amino-methan) e Lactose/TRIS, na criopreservação de sêmen bubalino. Foram utilizados três machos bubalinos da raça Murrah em plena atividade sexual. O sêmen foi colhido por vagina artificial totalizando 71 ejaculados. Após a colheita, cada amostra foi submetida às análises qualitativas e quantitativas do sêmen. Os ejaculados foram fracionados e diluídos nos quatro diluidores. O sêmen diluído foi envasado em palhetas de 0,25ml e submetidos a um tempo de equilíbrio de até quatro horas a 5ºC, com posterior congelação em nitrogênio líquido. As amostras identificadas foram descongeladas em banho maria à temperatura de 40°C por 30 segundos e seqüencialmente avaliadas quanto a motilidade, vigor, lesão de acrossoma, e percentual de patologias espermáticas. As amostras também foram submetidas ao teste de termo-resistência, permanecendo incubadas à temperatura de 40°C durante 30 segundos, 3-5 minutos, 30 minutos, 1 hora, 2 horas e 3 horas, onde foram avaliadas quanto a motilidade e o vigor espermático. As características físicoquímicas, após análise do sêmen in natura, encontraram-se dentro dos valores preconizados para a espécie bubalina e satisfatórios para o processo de congelação. Após descongelação do sêmen, observou redução numérica estatística (p<0,05) na motilidade espermática, sendo que no sêmen in natura se observou 86,67±6,17% reduzindo para 70±6,92% em TRIS, 67,4±8,01% em Ringer/lactato, 67,09±9,03% em Lactose/TRIS e 59,7±9,05% em leite desnatado e ao comparar entre os quatro tratamentos apenas o Leite desnatado mostrou diferença estatística significativa (p<0,05). Após descongelação, o vigor espermático também diminuiu estatisticamente (p<0,05) nos quatro tratamentos (3,50±0,53 TRIS; 3,38±0,49 Ringer-lactato; 3,3±0,46 Lactose/TRIS e 3,25±0,44 Leite desnatado) versus (4±0,39 sêmen in natura) e ao comparar entre os tratamento, apenas entre Leite desnatado e TRIS se observou diferença estatística (p<0,05). Quanto aos defeitos maiores (4,15±1,9% sêmen in natura; 10,51±4,4% TRIS; 11,94±4,2% Ringer-Lactato; 11,88±4,8% Lactose/TRIS; 12,01±5% Leite desnatado), menores (3,81±1,2% sêmen in natura; 4,67±1,1% TRIS; 4,98±1,7% Ringer-Lactato; 4,93±2,0% Lactose/TRIS; 4,93±2,0% Leite desnatado) e totais (7,91±2,1% sêmen in natura; 15,18±4,7% TRIS; 16,92±4,8% Ringer-Lactato; 16,82±5,6% Lactose/TRIS; 17,11±5,6% Leite desnatado), após descongelação houve aumento significativo dos defeitos nos quatro tratamentos (p<0,05), e entre eles não foram observadas diferenças estatísticas entre si (p>0,05). Na fase pós-TTR, após 3 horas de incubação, a motilidade progressiva (TRIS 21,13±7,5%; Ringer-Lactato 20,78±7,4%; Lactose/TRIS 20,25±5,3%; Leite desnatado 20,12±6,6%) e vigor espermático (TRIS 2,04±0,5; Ringer-Lactato 2,07±0,5; Lactose/TRIS 2,02±0,4; Leite desnatado 2,00±0,5) não apresentaram diferença estatística entre os tratamentos (p<0,05). Quanto a intergridade do acrossoma, após a descongelação (Sêmen in natura 97,85±0,6%; TRIS 91,65±4,3%; Ringer-Lactato 90,46±4,8%; Lactose/TRIS 89,76±5,4%; Leite desnatado 90,56±5,6%), houve diminuição estatística (p<0,05) e quando se comparou tal parâmetro entre os tratamentos não foi observado diferenças estatísticas significativas entre os tratamento (p>0,05). Diante dos resultados observados é possível concluir que a congelação de sêmen de búfalo com os diluidores TRIS (Trishydroxy- methyl-amino-methan), Ringer-Lactato, Lactose/TRIS, e Leite desnatado mostraram satisfatória função de crioproteção na viabilidade espermática do sêmen nas diferentes etapas da criopreservação. / The objective of this experiment was to test the effectiveness of different extenders, the basis of Ringer Lactate, Skim Milk, TRIS (hydroxymethyl-amino-methil Methan) and Lactose/TRIS, the cryopreservation of buffalo semen. We used three male Murrah buffaloes in full sexual activity. The semen was collected by artificial vagina total of 71 ejaculates. After harvest, each sample was subjected to qualitative and quantitative analyzes of semen. The ejaculates were split and diluted in four extenders. The diluted semen was stored in straws of 0,25 mL and subjected to an equilibration time of up to four hours at 5°C, with subsequent freezing in liquid nitrogen. The identified samples were thawed in a water bath at a temperature of 40°C for 30 seconds and subsequently evaluated for motility, vigor, acrosome damage, and percentage of sperm pathologies. The samples were also tested with heat-resistance, while remaining incubated at 40°C for 30 seconds, 3-5 minutes, 30 minutes, 1 hour, 2 hours and 3 hours, which were evaluated for motility and spermatic . The physico-chemical, after fresh semen analysis, were within the prescribed values for buffaloes and satisfactory for the freezing process. After thawing the semen, observed numerical reduction (p<0,05) in sperm motility, with fresh semen was found 86,67±6,17% decreasing to 70±6,92% in TRIS, 67,4±8,01% in Ringer/lactate, 67,09±9,03% in Lactose/TRIS and 59,7±9,05% in skim milk and to compare between the four treatments only the skimmed milk showed a statistically significant difference (p<0,05). After thawing, spermatic vigor also decreased significantly (p<0,05) in four treatments (3,50±0,53 TRIS, 3,38±0,49 Ringer's lactate, 3,3±0,46 Lactose/TRIS and 3,25±0,44 Skim milk) versus (4±0,39 fresh semen) and when comparing between treatment, only between skimmed milk and TRIS was no statistical difference (p<0,05). As for the larger defects (4,15±1,9% fresh semen; 10,51±4,4% TRIS, 11,94±4,2% Ringer's lactate, 11,88±4,8% Lactose/TRIS; 12,01±5% skim milk), smaller (3,81±1,2% fresh semen and 4,67±1,1% TRIS, 4,98±1,7% Ringer's lactate, 4,93±2,0% Lactose/TRIS, 4,93±2,0% skimmed milk) and total (7,91±2,1% fresh semen; 15,18±4,7% TRIS, 16,92±4,8% Ringer's lactate, 16,82±5,6% Lactose/TRIS, 17,11±5,6% skimmed milk), after thawing showed a significant increase of defects in the four treatments (p<0,05), and among them were not statistically different between groups (p>0,05). In the post-TTR after 3 hours of incubation, progressive motility (21,13±7,5% TRIS; Ringer lactate 20,78±7,4%; Lactose/TRIS 20,25±5,3%; Skimmed milk 20,12±6,6%) and spermatic vigor (TRIS 2,04±0,5, Ringer Lactate 2,07±0,5, Lactose/TRIS 2,02±0,4, 2 skim milk, 2,00±0,5) showed no statistical difference between treatments (p<0,05). As for intergridade acrosome after thawing (semen in natura 97,85,±0,6%; TRIS 91,65±4,3%, Ringer-Lactate 90,46±4,8%; Lactose/TRIS 89,76±5,4%; Skimmed milk 90,56±5,6%), decreased (p<0,05) and when comparing this parameter between treatments was not observed statistically significant differences between the treatment (p>0,05). Given the observed results we conclude that the freezing of buffalo semen extenders with TRIS (Tris-hydroxy-methyl-amino- Methan), Ringer Lactate, Lactose / TRIS and skimmed milk showed satisfactory function in cryoprotection of sperm viability semen in different stages of cryopreservation.

Submitted by Cássio da Cruz Nogueira (cassionogueirakk@gmail.com) on 2017-01-26T13:46:03Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Tese_VitrificacaoTecidoOvariano.pdf: 4015963 bytes, checksum: 40c8ba45cdbfd05b51e3296153b718d1 (MD5) / Approved for entry into archive by Edisangela Bastos (edisangela@ufpa.br) on 2017-01-27T13:24:34Z (GMT) No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Tese_VitrificacaoTecidoOvariano.pdf: 4015963 bytes, checksum: 40c8ba45cdbfd05b51e3296153b718d1 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-01-27T13:24:34Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Tese_VitrificacaoTecidoOvariano.pdf: 4015963 bytes, checksum: 40c8ba45cdbfd05b51e3296153b718d1 (MD5) Previous issue date: 2016-09-06 / CAPES - Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / Esta tese tem como principal objetivo desenvolver um protocolo eficiente de vitrificação de tecido ovariano de gata doméstica (Felis catus). O estudo foi dividido em: Fase I: Efeito de diferentes tipos de meios-base durante a vitrificação de tecido ovariano de gata; Fase II: Efeito de diferentes crioprotetores extracelulares e técnicas de vitrificação em tecido ovariano de gata; Na fase I, a morfologia de folículos pré-antrais foi similar ao controle fresco (p > 0,05), quando o RPMI-1640 foi utilizado como meio-base. RPMI-1640 não contém vermelho fenol que, adicionado ao meio, intensificou a toxicidade do crioprotetor etileno glicol durante a vitrificação. Na fase II, a percentagem de folículos morfologicamente normais foi similar ao controle, apenas quando o meio de vitrificação foi suplementado com 0,1 M ou 0,5 M de trealose (p > 0,05). Além disso, através dos parâmetros como a morfologia, proliferação celular e espessura de fibras colágenas pode-se dizer que a combinação de trealose com etilenoglicol (EG) sozinho ou adicionado de dimetilsufóxido (DMSO), aplicando os métodos Solid-surface vitrification (SSV) ou Ovarian Tissue cryosystem (OTC), apresentaram sucesso na preservação do tecido ovariano vitrificado. Apesar do OTC com EG não apresentar diferença significativa dos demais tratamentos, uma vez que este protocolo apresentou o maior percentual de folículos morfologicamente normais (56%), sendo similar ao controle (64%). Adicionalmente, nenhum efeito sobre a regulação de expressão gênica foi observada nos grupos testados, quando foram avaliados marcadores de apoptose (BAX - proteína X associada ao Bcl-2), de estresse do retículo endoplasmático (ERP29 – proteína do retículo endoplasmático 29), de canais de água como as aquaporinas 3 e 9 (AQP3 e AQP9), e os transportadores de membrana ABC (ABCB1 e ABCG2), com exceção do método SSV com EG que apresentaram, após 7 dias de cultivo in vitro, um aumento da expressão da ERP29 (indica estresse no reticulo endoplasmático) e a diminuição da expressão da AQP9 (afeta canais de transporte de agua). Com isso, para a manutenção da preservação do tecido ovariano de gata é necessário o uso de um protocolo de vitrificação contendo meio-base livre de vermelho fenol, suplementado com trealose, como crioprotetor extracelular, e EG sozinho ou associado com DMSO, como crioprotetores intracelulares. Ambos os sistemas abertos (SSV) e fechados (OTC) são equivalentes na eficiencia em manter a sobrevivência folicular durante o processo de vitrificacao. / The aim o the present thesis was to develop an efficient vitrification protocol of the ovarian tissue from domestic cat (Felis catus). This study was divided: Phase I: Effect of different basis media during the vitrification of cat ovarian tissue; Phase II: Effect of different sugars (extracellular cryoprotectants) and the vitrification technique for the vitrification of feline ovarian tissue. In phase I, the morphology of preantral follicles was similar (p > 0.05) to fresh control when RPMI-1640 was used as basis medium for vitrification. RPMI-1640 does not contain phenol red, which was found to enhance ethylene glycol (EG) toxicity during vitrification. In phase 2, the percentage of morphologically normal preantral follicles was similar (p > 0.05) to fresh control only when the vitrification medium contained 0.1 or 0.5 M trehalose, instead of sucrose or raffinose at same concentrations. Furthermore, based on parameters such as morphology, cell proliferation and thickness of collagen fibers, it is possibe to assume that efficient vitrification of feline ovarian tissue can be performed by combining trehalose with EG, with or without dimethylsulfoxide (DMSO), applying the solid-surface vitrification (SSV) or ovarian tissue cryosystem (OTC) method. Although vitrification with OTC in the presence of EG did not differ from the other treatments, this protocol presented the highest percentages of preserved preantral follicles (56%), being similar to control (64%). Additionally, no effect on gene regulation was observed after vitrification when apoptosis markers (BAX – protein X associated to Bcl-2), endoplasmic reticulum (ER) stress (ER protein 29 – ERP29), water channels proteins like aquaporins 3 and 9 (AQP3 and AQP9), the membrane ABC transporters ABCB1 and ABCG2, except when the SSV method was applied using only EG as cryoprotectant followed by seven days in vitro culture, where ERP29 up-regulation (ER stress) and AQP9 down-regulation (impaired water transport) were observed. Based on this, it can be concluded that to efficiently preserve feline ovarian tissue, is is necessary the use of a vitrification protocol free of phenol red, supplemented with trehalose, as extracellular cryoprotectant, and EG alone or in combination with DMSO, as intracellular cryoprotectants. Both open (SSV) and closed (OTC) systems are equaly efficient to maintain follicular survival during the vitrification procedure.

Submitted by Diogo Misoguti (diogo.misoguti@gmail.com) on 2016-06-29T12:59:34Z No. of bitstreams: 1 cp118956.pdf: 11152798 bytes, checksum: 413c607598471e1abd0db7c49883c8ac (MD5) / Approved for entry into archive by Diogo Misoguti (diogo.misoguti@gmail.com) on 2016-06-29T13:00:23Z (GMT) No. of bitstreams: 1 cp118956.pdf: 11152798 bytes, checksum: 413c607598471e1abd0db7c49883c8ac (MD5) / Made available in DSpace on 2016-06-29T13:00:23Z (GMT). No. of bitstreams: 1 cp118956.pdf: 11152798 bytes, checksum: 413c607598471e1abd0db7c49883c8ac (MD5) Previous issue date: 2009 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / Com o crescente aumento da prevalência mundial de diabetes mellitus, tem-se buscado modelos experimentais para melhor compreensão de sua fisiopatologia e tratamento que atendam de maneira mais adequada à preservação de células beta, proteção de órgãos-alvo e atenuação da aterosclerose. Objetivos: Desenvolver modelo experimental de diabetes mellitus tipo 2 induzido por meio de dieta, e utilizá-lo para examinar os efeitos de um inibidor da enzima conversora de angiotensina (IECA) e de um bloqueador do receptor de angiotensina (BRA) na proteção de órgãos-alvo. Métodos: Coelhos machos Nova Zelândia (n=49) receberam dieta acrescida de banha (10%), sacarose (40%) durante todo o protocolo do estudo além de colesterol (0,5% nos três primeiros meses e 0,1% nos meses subseqüentes). Os animais receberam aleatoriamente: apenas a dieta sem fármacos (G1), olmesartana 5 mg (G2), quinapril 30 mg (G3), ou a combinação de ambos (G4), acrescidos à mesma dieta por seis meses. Foram analisados lípides, frutosamina, glicose e insulina em jejum com cálculo dos índices para resistência à insulina e função de células beta pancreáticas. Foram ainda examinadas as áreas sob as curvas de insulina e glicose, após infusão de glicose intraperitoneal. Angiofluoresceinografias e análises histopatológicas avaliaram lesões em órgãos-alvo. Resultados: Os coelhos ganharam peso, e houve aumento dos níveis de glicose, colesterol total, LDL-C e triglicérides e redução do HDL-C (p <0,05 vs. basal). A frutosamina e o HOMA-IR se elevaram, enquanto houve redução do HOMA-β (p <0,05 vs. basal). Sinais precoces de retinopatia diabética foram observados a partir do terceiro mês, progredindo até o final do experimento (p<0,0005). Lesões ateroscleróticas em aorta, esteatofibrose hepática e infiltrado glomerular de macrófagos constituíram os principais achados histomorfológicos. O bloqueio do sistema renina-angiotensina modificou favoravelmente a glicemia e o HOMA-β (p<0,05) e houve atenuação do número e grau dos microaneurismas pelo tratamento com BRA isoladamente ou combinado com IECA (p<0,05 vs. G1). Conclusões: Nosso modelo reproduziu várias características glucometabólicas do diabetes mellitus tipo 2 humanóide, incluindo déficit de secreção e resistência à insulina. O bloqueio do sistema renina-angiotensina atenuou algumas alterações bioquímicas e as lesões microvasculares em retina. / With the increasing prevalence of diabetes mellitus worldwide, new experimental models are required to better understand the pathophysiology of this disease and to offer therapeutic options that can preserve pancreatic beta-cells, protect target organs and attenuate atherosclerosis. Objective: The aims of this study were to develop an experimental model of type 2 diabetes mellitus induced by diet and assess on this model the effects of an angiotensin-converting enzyme inhibitor (ACEI) and an antagonist of the angiotensin II type1 receptor (AT1R) on target organ protection. Methods: New Zealand male white rabbits (n=49) were fed high-fat/high-sucrose (10/40%) during the study protocol and cholesterol-enriched diet (0.5% in the first three months followed by 0.1% until the end of the study). These animals were randomized to receive: diet alone (G1), olmesartan 5 mg (G2), quinapril 30mg (G3), or combination of both drugs (G4), added to the same diet for six months. Fasting lipids, fructosamine, glucose and insulin, with calculation of insulin resistance and beta-cell function indexes were evaluated. The areas under the curves for glucose and insulin were obtained after intraperitoneal glucose bolus injection. Fluorescein angiography and histopathological analyses were performed to assess target-organs lesions. Results: The animals gained weight, and there were increases in blood glucose, total cholesterol, LDL-C and triglycerides, and decrease in HDL-C (p<0.05 vs. baseline). Fructosamine levels and the homeostasis model assessment of insulin resistance (HOMA-IR) were increased, while there was a reduction in the HOMA-β (p<0.05 vs. baseline). Early clinical features of diabetic retinopathy were seen since the third month, progressing up to the end of the experiment (p<0.0005). Aortic atherosclerosis, hepatic steatofibrosis and glomerular macrophage infiltration were the main histomorphologic findings of this study. The renin-angiotensin system (RAS) blockade favorably modified blood glucose and the HOMA- β (p<0.05) and promoted attenuation of the number and grade of microaneurysms in retina in the group of animals receiving AT1R antagonist or combined therapy with the ACEI (p<0.05 vs. G1). Conclusion: Our model reproduced several glucometabolic characteristics of humanoid type 2 diabetes, including decreased insulin secretion and insulin resistance. The RAS blockade attenuated some biochemical abnormalities and the diabetic retinopathy. / FAPESP: 07/51058-8

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:29:38Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2010-11-24Bitstream added on 2014-06-13T18:39:24Z : No. of bitstreams: 1 silva_mf_me_fran.pdf: 404710 bytes, checksum: 7708b235dd529f1c9fdc66e21dd6b391 (MD5) / A doação de órgãos e tecidos para transplantes está diretamente relacionada ao consentimento familiar e acontece em três momentos: o primeiro em vida nos casos de pessoas com boas condições de saúde cuja retirada não comprometa as funções vitais; o segundo momento em casos de pessoas com morte de coração parado e o terceiro momento em pessoas com morte encefálica. Este estudo teve por objetivo a busca da compreensão do significado da doação de órgãos para os familiares de potenciais doadores, com morte encefálica, que participaram da entrevista para autorização da retirada de órgãos e tecidos para transplantes, na Santa Casa de Franca. Entender a decisão da família sobre a doação de órgãos é um processo de ampla complexidade, que pressupõe ao pesquisador várias questões a serem consideradas como o atendimento que a família recebe no hospital; a experiência vivenciada durante o processo saúde doença, a experiência da perda diante da morte, a decisão sobre a doação dos órgãos, bem como a concepção do sagrado e formação religiosa. A escolha do método é de extrema importância para elucidar fatos da realidade e contribuir com o conhecimento científico. A pesquisa qualitativa foi o percurso metodológico encontrado para a realização deste estudo. Sua capacidade de aprofundar a complexidade dos acontecimentos a serem estudados, envolvendo os seres humanos em suas relações sociais propicia ao pesquisador o contato com as reais condições de vivência dos sujeitos, o seu modo de vida, suas experiências sociais, o significado atribuído à sua vivência, bem como o que pensam a respeito do objeto pesquisado. A pesquisa tem como sujeitos os familiares de potenciais doadores de órgãos e tecidos internados na Santa Casa de Franca com o diagnóstico de morte encefálica, durante o ano de 2007 e que participaram do processo de captação de órgãos... / The donation of organs and tissues for transplantation is directly related to family consent and happens in three moments: the first during life, in cases of people with good health in which the removal will not compromise the individual’s vital functions; the second in cases of people who died of cardiac arrest and the third moment in people with brain death. This study aims to search for understanding the meaning of organ donation to relatives of potential donors in brain death, who attended the interview to authorize the removal of organs and tissues for transplant, at Santa Casa de Franca. Understanding the family’s decision about organs donation is a process of huge complexity, in which the researcher has to consider several issues such as the care that a family receives at the hospital; the lived experience during the health–disease process, the experience of loss before death, the decision about organ donation, as well as their conception of sacred and religion education. The method choice is of extreme importance in order to clear facts of reality and also to contribute to scientific knowledge. A qualitative research was the methodological approach found to perform this study. Its ability to deepen the complexity of the facts being studied, involving human beings and their social relationships provides the researcher contact with real living conditions of the subjects, their lifestyle, social experiences, the meaning ascribed to their living, and how they feel about the target being researched. The subjects of the research are the relatives of potential organs and tissues donors hospitalized at Santa Casa de Franca with the diagnosis of brain death, during the year of 2007 and that took part in the process of organ-raising. This year, Santa Casa indicators showed that the number of relative’s rejections was of 50% in relation to brain death notifications... (Complete abstract click electronic access below)

Cryopreservation of fish semen is a key to optimization of reproductive management, the formation of germplasm bank and the development of genetic improvement programs. The success of this technique depends on the management and balance of several factors such as the collection, dilution, packaging, freezing and thawing. Tambaqui semen cryopreservation protocols have been developed using 0.5 mL straws on packaging. However, the high volumes of semen produced and the elevated taxes of fecundity are presented by this specie, it is necessary to use larger volume storage containers for application to large-scale production. The objective of this study was to establish a tambaqui semen cryopreservation protocol in large straw 4,0mL, from the definition of cryosolution, equilibration time and the best ratio between temperature and time semen thawing. The semen collected was diluted, packaged in large straws, frozen in liquid nitrogen which was conditioned in dry-shipper and stored in cryogenic cylinder at -196 °C. In the first experiment, different cryosolutions (M1 - 5% 5% methylglycol; M2 - 5% 5% methylglycol+ 5% egg yolk; M3 - 10% 5% methylglycol; M4 - 10% 5% methylglycol + 5% egg yolk; M5 - 15% 5% methylglycol; M6 - 15% de 5% methylglycol + 5% egg yolk) and three equilibration times (4, 20 and 40 minutes) were tested. In the second experiment, different relation between temperature and time thawing on sperm quality (30ºC for 50s - T1; 30ºC for 80s - T2; 60ºC for 25s - T3 e 60ºC for 40s - T4) were evaluated. In conclusion, this study showed that the ideal protocol for cryopreservation of tambaqui semen in large straw 4,0mL is made by diluting semen at a ratio of 1: 9 (v: v) in a medium composed of 5% methylglycol and 5% egg yolk. Both of them must have remained in contact with each other for 4 minutes until both were subjected to freezing in dry-shipper. The thawing of samples required to be performed in a water bath at 60 ° C for 25s. / A criopreservação de sêmen de peixes é uma ferramenta para a otimização do manejo reprodutivo, a formação de bancos de germoplasma e o desenvolvimento de programas de melhoramento genético. O sucesso dessa técnica depende do domínio e o equilíbrio de vários fatores que envolvem os processos de coleta, diluição, envase, congelamento e descongelamento. Protocolos de criopreservação sêmen de tambaqui já foram desenvolvidos utilizando palhetas de 0,5mL no envase, no entanto, o elevado volume de sêmen produzido e alta fecundidade da espécie sugere o armazenamento em recipientes de maior volume para a aplicação na produção em larga escala. Com isso, o objetivo do presente estudo foi estabelecer um protocolo de criopreservação seminal do tambaqui em macropalhetas de 4,0mL, a partir da definição de um meio diluidor, tempo de equilíbrio e a melhor relação entre temperatura e o tempo de descongelamento do sêmen. O sêmen coletado foi diluído, envasado em macropalhetas, congelado em vapor de nitrogênio líquido no botijão dry-shipper e armazenadas em botijão criogênico a -196°C. No primeiro experimento, foram testadas diferentes composições do meio diluidor (M1 - 5% de metilglicol; M2 - 5% de metilglicol + 5% de gema de ovo; M3 - 10% de metilglicol; M4 - 10% de metilglicol + 5% de gema de ovo; M5 - 15% de metilglicol; M6 - 15% de metilglicol + 5% de gema de ovo) e três tempos de equilíbrio (4, 20 e 40 minutos). No segundo experimento, foram avaliadas diferentes velocidades de descongelamento do sêmen em banho-maria, sobre a qualidade espermática (30ºC por 50s - T1; 30ºC por 80s - T2; 60ºC por 25s - T3 e 60ºC por 40s - T4). Ao final do estudo concluiu-se, que o protocolo ideal para a criopreservação do sêmen do tambaqui em macropalhetas de 4,0mL consiste na diluição do sêmen na proporção de 1:9 (v:v) em um meio composto por 5% de metilglicol e 5% de gema de ovo, os quais devem permanecer em contato por 4 minutos até que sejam submetidos ao processo de congelamento em botijão dry-shipper. O descongelamento das amostras deve ser realizado em banho-maria a 60°C por 25s.