O carcinoma de células renais (CCR) representa 3% das neoplasias humanas e aproximadamente 90% das neoplasias renais e entre os tumores urológicos. O CCR é bastante resistente à radioterapia convencional. Entretanto, com o aparecimento de novas técnicas/equipamentos é possivel a aplicação de doses com precisão presevando-se os tecidos adjacentes. Para a verificação da expressão proteica em diferentes tecidos e fluidos corporais, foi utilizado o estudo proteômico sob diferentes condições e / ou tempos. A espectrometria de massa permite a identificação e quantificação de milhares de proteínas e peptídeos em fluidos biológicos ou células lisadas, sendo assim uma ferramenta poderosa para identificação de potenciais biomarcadores de doenças. A finalidade deste trabalho foi analisar o perfil proteico das células de adenocarcinoma renal (786-0) após a radiação com doses que variaram de 2 a 10 Gy. Os dados foram tratados com o programa One-way ANOVA seguida do de Bonferroni. Pelo ensaio de clonogenicidade definiou-se a dose de 8 Gy como a ideal estudos. A extração das proteínas citoplasmáticas foi realizada com o kit de extração do proteoma subcelular PE e a quantificação das proteínas feita pelo método de Lowry. A integridade das proteínas foi analisada por SDS-PAGE e a solução proteica foi verificada em LTQ Orbitrap. Os resultados gerados foram analisados pelo servidor MASCOT para a busca de peptídeos. A análise por espectrometria de massa foi possível identificar 44 proteínas nas amostras não irradiadas - e 87 das amostras irradiadas. Nas amostras não irradiadas a distribuição dos grupos funcionais foi de síntese proteica 46,66%; Metabolismo energético 16,66%; Migração e proliferação 16,66%; Antioxidantes 3,33%. No grupo irradiado síntese proteica 35,89%; Metabolismo energético 20,51%; Migração e proliferação 20,51%; Antioxidantes 5,12%; Chaperonas moleculares 5,12% e Endopeptidases 5,12%. Em seguida, analisou-se o espetro de as sequências com escores acima de 40. Nas amostras irradiadas encontrou-se: ENO1 (47 kDa); A VIM (53 kDa)/ HEL113; PSMA1; TRAJ56; hCG; Cofilina-1 (19 kDa); HIST1H4H; PKM2; ANXA1; HSPB1/ HSP27. Deste grupo, entendemos que a subunidade alfa do proteassoma - tipo 1 (PSMA1), que possui uma atividade molecular de endopeptidase, seja um alvo interessante para estudos posteriores. / Renal cell carcinoma (CRC) represents 3% of human neoplasms and approximately 90% of renal neoplasms and among urological tumors. The RCC is quite resistant to conventional radiotherapy. This technique allows the dose of radiation, in a single fraction, to be accurately applied to the tumor and the tissues adjacent to it, most of the time, are spared. The protein expression analysis in different tissues and body fluids was realized according the proteomics study under different conditions and / or times. Mass spectrometry allows the identification and quantification of thousands of proteins and peptides in a biological fluid or lysed cells, and is analyzed on a platform to identify differences in the expression of proteins associated with the proliferation of cancer cells and to establish potential biomarkers predictive of answer. The aim of this work was to analyze the protein profile of human renal cancer 786-0 cells after radiation, evaluated according the mitotic potential of irradiated cells in GammaCell performed at doses of 2 to 10 Gy. The irradiated cell colonies were stained and counted, and the multiple comparisons were analyzed by One-way ANOVA followed by the Bonferroni post-test. The dose of 8 Gy was defined as ideal for cell irradiation, the cytoplasmic proteins were extracted by the subcellular proteome PE kit and quantified by the Lowry method. For protein integrity analysis, SDS-PAGE was performed. The protein solution was analyzed in LTQ Orbitrap. The generated result was analyzed by the MASCOT server for search of peptides. Mass spectrometric analysis identified 44 proteins in non-irradiated samples - and 87 in irradiated samples. In non-irradiated samples the distribution of functional groups was protein synthesis 46.66%; Energy metabolism 16.66%; Migration and proliferation 16.66%; Antioxidants 3.33%. In the irradiated group protein synthesis 35.89%; Energy metabolism 20.51%; Migration and proliferation 20.51%; Antioxidants 5.12%; Molecular chaperones 5.12% and Endopeptidases 5.12%. Then, the spectrum of the sequences above 40 was analyzed. In the irradiated samples we found: ENO1 (47 kDa); VIM (53 kDa) / HEL113; PSMA1; TRAJ56; hCG; Cophylline-1 (19 kDa); HIST1H4H; PKM2; ANXA1; HSPB1 / HSP27. From this group, we identified the alpha subunit of the proteome type 1 (PSMA1) that has an endopeptidase This group, understood as a proteasome - type 1 (PSMA1) alpha subunit, has an endopeptidase molecular molecule and is an interesting target for further studies.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:32:55Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2012-04-27Bitstream added on 2014-06-13T19:22:46Z : No. of bitstreams: 1 000729611.pdf: 1074120 bytes, checksum: 01a15f0dd4775f078dccbc81da271357 (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Helicobacter pylori é o principal agente etiológico causador da gastrite crônica, úlcera péptica, adenocarcinoma e linfoma gástrico. Concentrações subinibitórias de antimicrobianos podem modificar os fatores de virulência da bactéria e, consequentemente, a relação micro-organismo/hospedeiro, podendo alterar a progressão da infecção. Este estudo avaliou fatores de virulência de H. pylori cultivados em ½ e ¼ da concentração inibitória mínima de amoxicilina que poderiam alterar a liberação de citocinas, indução de óxido nítrico e apoptose em macrófagos RAW 264.7 infectados. A análise proteômica foi realizada por eletroforese bidimensional e a identificação das proteínas diferencialmente expressas através da digestão por tripsina e espectrometria de massas A indução de óxido nítrico foi analisada através do reagente de Griess, as citocinas (interleucina - 1 beta, interleucina - 6, interleucina - 10, interleucina - 12, fator de necrose tumoral alfa e fator transformador de crescimento - beta) por ensaio imunoenzimático e apoptose por citometria, após 24 horas de infecção. Nossos resultados demonstraram que H. pylori previamente mantidos em sub-CIMs de amoxicilina apresentaram maior expressão de proteínas de choque térmico, enolase, argininosuccinato sintase, superóxido dismutase, ATP alfa sintase e proteína ativadora de neutrófilo, proteínas capazes de aumentar a indução de NO, IL – 1 β e IL - 12 e apoptose em relação à macrófagos infectados com H. pylori sem tratamento. Estes resultados sugerem que a amoxicilina em concentrações subinibitórias pode estimular a resposta imune no hospedeiro através da indução de alguns fator... / The infection caused by Helicobacter pylori is considered a major etiology agent in chronic gastritis, peptic ulcer, gastric carcinoma and gastric lymphomas. Sub-inhibitory concentrations of antibiotics have been shown to change virulent expression of microorganisms, which may change the progression of infection. This study assessed virulence factors of H. pylori after contact with ½ and ¼ the minimal inhibitory concentration of amoxicillin subinhibitory concentrations of amoxicillin that could modify the induction of cytokines, nitric oxide and apoptosis by infect RAW 264.7 macrophage-like cells. The proteomic analysis was realized by two dimensional electrophoresis and proteins differential expressions were characterized by tryptic digestion and mass spectroscopy. The induction of nitric oxide was assayed by Griess reagent, cytokines (interleukin – 1 beta, interleukin - 6, interleukin - 10, interleukin – 12, tumor necrosis factor alpha and transforming growth factor - beta) by Enzyme-Liked Immunoabsorbent Assay and apoptosis by annexin V - fluorescein isothiocyanate after 24 hours. Our results demonstrated that H. pylori previously maintained in sub - MICs of amoxicillin showed higher expression of virulence factors such as heat shock proteins, enolase, argininosuccinate synthetase, superoxide dismutase, ATP synthase alpha and neutrophil-activating protein inducing more oxide nitric, interleukin - 1β and interleukin – 12 and increased apoptosis than macrophages infected with H. pylori without treatment. These results suggest that amoxicillin, at sub-inhibitory concentrations, could contribute to the stimulation of immune response in the ...

O metabolismo celular é substancialmente alterado durante a oncogênese, progressão tumoral e outros processos patológicos. Tem sido frequentemente analisado para compreensão dos processos que permitem o crescimento dos tecidos, reprodução, manutenção da homeostase e resposta a sinais extracelulares. Dentre os vários métodos para caracterização de alterações metabólicas, a espectrometria de massas tem contribuído significativamente para a identificação e quantificação de proteínas envolvidas no metabolismo, e também para a caracterização do metaboloma. A análise proteômica baseada em espectrometria de massas permite estudos qualitativos em grande escala, adequados para a busca e descoberta de analitos relevantes. A análise proteômica dirigida complementa esse caráter com qualidade quantitativa para proteínas alvo pré-selecionadas. Neste trabalho foram desenvolvidos métodos de proteômica dirigida para o monitoramento de alterações quantitativas nos níveis de proteínas envolvidas na via glicolítica do metabolismo da glicólise. Para tal peptídeos proteotípicos para cada proteína foram identificados e padronizados utilizando a estratégia de monitoramento de reações múltiplas. O painel foi aplicado para obter resultados das alterações que ocorrem em um modelo de progressão tumoral. Com esta estratégia empregada, foi possível selecionar e utilizar vários peptídeos representativos das enzimas da via glicolítica e também de algumas proteínas relevantes ao câncer. A utilização de peptídeos sintéticos facilitou substancialmente o processo de desenvolvimento do método. Por fim, com a metodologia desenvolvida, foi demonstrado para células MCF7, que o fator EGF alterou a expressão das proteínas da via glicolítica, aumento no fluxo para via das pentoses e capacidade aumentada da respiração celular. Este estudo, portanto, sugere uma nova disposição do metabolismo celular dado o conhecimento estabelecido em relação aos efeitos na respiração, como o efeito Warburg. / Cellular metabolism is altered during ontogenesis, cancer progression and several other pathological events. Because of that, the metabolism is constantly analyzed in order to provide further comprehension of processes that allow tissue growth, reproduction, homeostasis maintenance, and response to extracellular signals. Among the methods great diversity of methods used to characterize metabolic alterations, mass spectrometry has been contributing significantly to identify and quantify proteins involved in a diversity of metabolic pathways, but also to monitor the changes in metabolome. Proteomics based on mass spectrometry allows highthroughput in-depth qualitative resources for discovery phases stages, providing the new relevant candidates for further biochemical characterization. In a complementary way, targeted proteomics allows precise quantitative analyses of such selected protein targets. Here, it was developed a targeted proteomics method for multiplex monitoring glycolytic pathway enzymes and relevant cancer-related proteins. For that, proteotypic peptides representing proteins of interest were selected and studied in detail to be incorporated in a multiple reaction monitoring assay. The developed method was applied to monitor the alterations in the glycolytic pathway in a cancer progression model. Using targeted proteomics strategies, we selected and applied for quantification several proteotypic peptides representing glycolitic enzymes and cancerrelated proteins. The use of synthetic peptides allowed faster method development and more sensitive methods. The application of such methods, demonstrated alterations in glycolytic pathways and cancer-related proteins promoted in MCF7 cells treated with EGF. Also, an activation of pentose-phosphate pathway was suggested and increase in cellular oxygen consumption. This study, therefore, suggests changes in the cellular metabolism that differs from the classic Warburg effect observed during cancer development.

Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências Agrárias, Programa de Pós-Graduação em Recursos Genéticos Vegetais, Florianópolis, 2011 / Made available in DSpace on 2012-10-26T06:38:28Z (GMT). No. of bitstreams: 1 289228.pdf: 1486347 bytes, checksum: acd470fda9f45a55c31dbe6aeb4337c9 (MD5) / Estudos de biossegurança que comparam OGMs e não-OGMs geralmente compreendem características agronômicas/fenotípicas, composição nutricional e bromatologia. No entanto, técnicas que analisam um perfil molecular do OGM (molecular profiling techniques) podem facilitar uma análise comparativa mais completa e holística. Essa abordagem envolve diversas tecnologias, entre as quais destaca-se a proteômica. Desta forma, focando os eventuais riscos inerentes à transformação genética de plantas, nosso trabalho buscou caracterizar possíveis efeitos pleiotrópicos em híbridos comerciais de milho transgênico Bt (Evento MON810) comercializados e cultivados em Santa Catarina, Brasil. Para tanto, utilizou-se a técnica de eletroforese bidimensional para análise comparativa e diferencial de perfis protéicos de folhas de milhos transgênicos em comparação a sua versão não-transgênica (isogenica). Também, objetivou-se detectar a proteína CRY1Ab expressa nos mesmos híbridos. Mais além, buscou-se avaliar algumas técnicas e metodologias para tal estudo, incluindo a utilização de protéina CRY1Ab bacterial. Foram coletadas folhas de plantas em estagio de florescimento em três localidades diferentes, Canoinhas, Chapecó e Campos Novos. O delineamente experimental utilizado foi o de blocos completamente casualizados. Nossos resultados indicam que a proteína CRY1Ab detectada também sofre clivagem enzimática, gerando uma molécula de peso molecular de aproximadamente 70kDa, o que pode corresponder a parte da ?- endotoxina. Entretanto, quando realizada extração baseada em tampão fenol saturado (pH ±8,0) e precipitação com acetato de amônio em metanol, a proteína CRY1Ab detectada apresenta cerca de 100kDa. Esta proteina detectada pode não estar na sua forma não clivada, ou ainda, pode ser uma isoforma. Caso seja confirmado, tal resultado permitiria o seqüenciamento total da proteína expressa, ou o seqüenciamento de isoformas presentes em plantas geneticamente modificadas. Os resultados das análises dos géis bidimensionais de proteínas CRY1Ab bacterial (expressas em E. coli) apresentaram seis spots com mesmo peso molecular (aproximadamente 70kDa) porém com diferentes pI, variando de aproximadamente 5,6 a 6,0. A presença de BSA na amostra não explica os seis spots, uma vez que existem indicações que BSA exista em três isoformas. Desta forma, análises posteriores para o seqüenciamento destes spots devem ser realizadas a fim de esclarecer a origem destes spots. Uma possibilidade está relacionada a interações proteína-proteína durante a expressão e purificação da mesma. Tal resultado é importante, pois serve como indicação de que estes possíveis processos também ocorram com proteínas CRY1Ab expressas em plantas. Os experimentos de Chapecó e Campos Novos obtiveram menor coeficiente de variação médio (entre 20 e 23%) para os spots detectados, o que traz maior consistência para análise proteômica comparativa e diferencial. O experimento de canoinhas obteve maior coeficiente de variação médio (aprox. 60%) e a hipótese levantada diz respeito à possível degradação das amostras durante as coletas e conseqüente má resolução dos géis bidimensionais. Em relação aos spots diferenciais, observou-se um grande número de spots detectados. O experimento de Campos Novos obteve 96 spots diferenciais; seguido de Chapecó com 69 e Canoinhas com 41. O tipo de diferença que obteve maior número de spots foi aquele cujo spot é exclusivo ao tratamento não-Bt (118 spots). Observou-se que o software utilizado pode não ser eficiente quando os géis apresentam distorções geométricas pontuais e globais. As proteínas diferencialmente expressas podem estar relacionadas com diversas funções e interações com diversos processos metabólicos importantes para a planta. No entanto, apenas após o seqüenciamento das mesmas é que se podem estimar os possíveis efeitos adversos oriundos desta tecnologia moderna. De qualquer forma, a abordagem utilizada em nosso trabalho, incluindo a metodologia para amostragem, desenho experimental e procedimento de análise de imagens, foi eficiente em detectar efeitos pleiotrópicos oriundos da engenharia genética de plantas cultivadas em larga escala.

Submitted by Marco Antônio de Ramos Chagas (mchagas@ufv.br) on 2017-06-22T17:13:14Z No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 1578494 bytes, checksum: d7fa5a752b4c56f8611d2e504d7afa84 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-06-22T17:13:14Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 1578494 bytes, checksum: d7fa5a752b4c56f8611d2e504d7afa84 (MD5) Previous issue date: 2017-02-10 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / Os carrapatos são artrópodes parasitas que se alimentam obrigatoriamente de sangue, sendo capazes de parasitar diversos hospedeiros vertebrados. O intestino dos carrapatos machos e fêmeas possui diferenças morfológicas, tendo como principal função a digestão intracelular dos componentes do sangue obtidos durante a alimentação. Este órgão possui várias proteínas relacionadas com o desenvolvimento, metabolismo e mecanismo de digestão da hemoglobina. Neste trabalho, as proteínas do intestino de carrapatos Amblyomma sculptum, machos e fêmeas foram analisadas com o auxílio da cromatografia líquida acoplada com a espectrometria de massas. O algoritmo PEAKS identificou um maior número de proteínas do intestino nas estratégias fracionadas e não fracionadas em relação aos algoritmos MASCOT e SCAFFOLD, tanto para o banco de dados Chelicerata quanto para o banco de dados Oryctolagus, utilizando os analisadores Ion Trap e QTOF. Pelo KOG, as classes das proteínas analisadas no intestino dos carrapatos machos e fêmeas que se destacaram estão envolvidas na dinâmica e estrutura da cromatina, tradução, biogênese e estrutura ribossomal, modificação pós-traducional, turnover proteico, chaperonas, citoesqueleto, conversão e produção de energia, metabolismo e transporte de carboidratos, lipídeos e íons inorgânicos. Na identificação das proteínas do hospedeiro, a hemoglobina, componente de maior volume no sangue, foi encontrada em ambos os sexos. As informações obtidas neste trabalho podem fornecer uma base sobre a fisiologia do intestino de machos e fêmeas A. sculptum e auxiliar na escolha de proteínas como alvos moleculares potenciais, visando avanço nas estratégias de controle aplicadas para estes artrópodes. / Ticks are parasitic arthropods that feed necessarily of blood, being able of parasitizing various vertebrate hosts. The midgut of males and females ticks has morphological differences, having as main function the intracellular digestion of blood components obtained during feeding. This organ has several proteins related to the development, metabolism, and mechanism of hemoglobin digestion. In this work, the midgut proteins of Amblyomma sculptum ticks, males and females were analyzed with aid of liquid chromatography coupled with mass spectrometry. The PEAKS algorithm identified a larger number of proteins in fractional and non-fractionated strategies in relation to algorithms MASCOT and SCAFFOLD for both Chelicerata and Oryctolagus databases, using Ion Trap and QTOF analyzers. By KOG, the classes of proteins analyzed in the midgut of the males and females ticks are involved in the chromatin structure and dynamics, translation, ribosomal structure and biogenesis, post- translational modification, protein turnover and chaperones, cytoskeleton, energy production and conversion, metabolism and transport of carbohydrates, lipids and inorganic ions. In the identification of the host proteins, the hemoglobin, greater blood volume component, was found in both genders. The informations obtained in this work can provide a basis about the midgut phisiology of males and females A. sculptum and assist in the selection of proteins as potencial molecular targets, aiming advance in the control strategies applied to these arthropods.

Submitted by Marco Antônio de Ramos Chagas (mchagas@ufv.br) on 2015-11-30T14:25:39Z No. of bitstreams: 1 texo completo.pdf: 2677049 bytes, checksum: 4119454474e0194b1ec3c3efcf9fa533 (MD5) / Made available in DSpace on 2015-11-30T14:25:39Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texo completo.pdf: 2677049 bytes, checksum: 4119454474e0194b1ec3c3efcf9fa533 (MD5) Previous issue date: 2014-08-20 / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / É comum a suposição de que plantas C4, por sua fotorrespiração desprezível, tenham menor restrição de CO2 quando a transpiração for reduzida pelo fechamento estomático e, consequentemente, maior tolerância à seca. No entanto, esta interpretação foi demonstrada não ser verdadeira e relativamente pouca informação existe sobre a tolerância a deficiência hídrica em plantas C4, em particular, cana-de- açúcar. Aqui analisou-se dois genótipos contrastantes quanto à tolerância à seca, os quais apenas informações empíricas existem, sem dados publicados disponíveis. Embora em pequenos vasos não se observou diferenças entre cultivares, utilizando vasos maiores (30L) e rizotrons longos (1,2 m-38L) demonstramos que a cultivar RB 867515 foi mais tolerante à seca que a cultivar RB 855536, principalmente devido à redução da desidratação foliar e maior massa seca do colmo sob estresse hídrico severo. A tolerância à seca não foi associada com maior massa seca e volume de raízes ou maior relação raiz/parte aérea, mas foi claramente associada com comprimento total e profundidade da raiz sendo que a cultivar tolerante apresentou raízes mais finas e apesar da inferior massa, teve maior área superficial radicular. Este dado é um bom exemplo de como importante para a tolerância à seca é a arquitetura e morfologia das raízes comparada a analise apenas da massa. As trocas gasosas, análise de fluorescência da clorofila a, atividade total de algumas enzimas antioxidantes (SOD, APX e CAT) não contribuíram para tolerância diferencial ao défict hídrico da cultivar RB 867515. Apesar disso, resultados de proteômica diferencial e fosfoproteômica mostraram aumento exclusivo de abundância de 10 de proteínas fotossintéticas sob estresse severo e aumento da fosforilação de 14, sendo 8 exclusivamente na cultivar tolerante. Esta discrepância entre a medição pontual da fotossíntese e a análise sistêmica ilustra a importância desta última abordagem para obter não só uma visão mais integrada das respostas bioquímicas, mas também uma visão mais fiável das respostas de plantas a seca. Estas evidências sugerem que alterações moleculares na fotossíntese podem contribuir para a tolerância à seca em cana devido a sua contribuição parcial para o aumento da biomassa do colmo sob estresse. O maior nível de ABA foliar sob déficit hídrico severo na cultivar tolerante poderia estar envolvido na mudança de profundidade e área superficial radicular, mas não parece contribuir para um comportamento estomático diferencial. Análises do proteoma diferencial e fosfoproteoma das folhas indicam a importância do metabolismo da glutationa na tolerância ao estresse hídrico, embora o genótipo tolerante tenha apresentado maior carbonilação de proteínas e sem diferenças relativas na peroxidação lipídica e extravasamento de eletrólitos. A análise do redoxproteoma não permitiu inferências claras sobre a tolerância à seca sendo que a maior parte de proteínas com carbonilação foram detectadas em genótipos tolerantes. Levando-se em conta o atraso do enrolamento foliar sob estresse e da maior biomassa do colmo, pode-se interpretar que o genótipo tolerante não teve uma queda tão pronunciada no fluxo fotossintético como resultado de uma maior carbonilação, e sugere-se que o aumento na abundância e fosforilação de proteínas envolvidas neste processo seria uma resposta ao aumento da carbonilação observada. A contribuição específica da glicólise na tolerância ao estresse severo também foi visualizada simultaneamente no proteoma diferencial e fosfoproteoma, e o aumento da fosforilação de várias enzimas dessa via não pode ser atribuído ao aumento da abundância relativa das mesmas. Mais uma vez as duas abordagens proteômicas citadas mostroram claras evidências da importância do metabolismo de aminoácidos nas folhas na tolerância à seca, mas a contribuição de diferentes aminoácidos poderem mudar, dependendo do grau de estresse. Essas mudanças na proteômica foram fortemente reforçadas por dados enzimáticos e metabolômicos. Genótipo tolerante apresentou maiores teores de aminoácidos totais sob estresse, e sob estresse severo, níveis mais elevados de cisteína, substrato para biossíntese de glutationa, além de maiores níveis de glicina, serina, lisina, treonina e isoleucina. Estes dados sugerem a importância de vários aminoácidos diferentes para ajuste osmótico, e poderia explicar parcialmente a menor desidratação foliar no genótipo tolerante sob déficit hídrico severo. Outra boa concordância entre os dados de proteômica e metabolômica foi observada para a respiração. Análise funcional do proteoma diferencial e fosfoproteoma claramente indicam o enriquecimento da abundância de enzimas glicolíticas e genes do metabolismo de açúcares no genótipo tolerante. Adicionalmente, os dados de metabolômica indicam níveis mais elevados de glicose, isocitrato, aconitato e malato nesse genótipo, o que sugere que um maior fluxo respiratório suportando o aumento da biossíntese de aminoácidos nas folhas sob estresse possa ser um importante mecanismo de tolerância à seca em cana. Em síntese, este estudo ilustra a natureza poligênica da tolerância à seca, bem como a importância do uso de abordagens sistêmicas para complementar as medidas pontuais, a fim de compreender melhor os mecanismos de resposta das plantas ao déficit hídrico. / Is a quite usual the assumption that C4 plants, because their negligible photorespiration, will have lower CO2 restriction when transpiration will be reduced by stomatal closure and consequently higher drought tolerance. However this interpretation was shown not to be true, and relatively reduced information exist about C4 drought tolerance, in particular, with sugarcane. Here we analyzed two contrasting genotypes regarding drought tolerance, from which only empirical information exist, without any published data available. Although with small pots we were unable to show differences between cultivars, using large pots (30L) and long rizotrons (1,2 m), we have demonstrated that the cultivar RB 867515 was more drought tolerant that cultivar RB 855536, mainly due to reduced leaf dehydration and higher culm dry mass under severe water stress. Drought tolerance was not associated with higher root dry mass and root volume or higher root/shoot ratio, but was clearly associated with individual root length, root deepness, and the tolerant cultivar have thinner roots, and despite lower root mass, have higher root surface area. This data is a good picture how more important for drought tolerance is root architecture and morphology than root mass. Gas exchange, chlorophyll a fluorescence analysis and total activity of some antioxidative enzymes (SOD, APX and CAT) do not contribute for the differential drought tolerance of cultivar RB 867515. Despite that, differential proteomics and phosphoproteomics shows an exclusive increase of abundance of 10 photosynthesis proteins under severe stress, and increase in phosphorylation of 14 of then, 8 exclusively in the tolerant. This discrepancy between single time point measurement of photosynthesis and systemic analysis illustrate the importance of this last approach to get not only a more integrated picture of biochemical responses, but also a more reliable time picture of the whole drought plant responses. These evidences suggest that molecular changes in photosynthesis could contribute to drought tolerance in sugarcane, due its partial contribution to the increased culm biomass under stress. The higher leaf ABA under severe water deficit of tolerant cultivar could be involved in the change of root deep and root surface area, but do not seems to contribute to a differential stomatal behavior. Differential proteomics and phosphoproteomics analysis of leafs indicate the importance of glutathione metabolism in water deficit tolerance, although the tolerant genotype has higher protein carbonilation and no relative differences in lipid peroxidation and electrolyte leakiness. The redox proteomics analyses do not allow clear inferences about drought tolerances, and the greater part of proteins with carbonilation were detected in tolerant genotypes. Taking in account the delay of leaf rolling under stress and the high culm biomass, we could interpret that tolerant genotype do not have a so pronounced decrease in photosynthetic flux, which could result in higher carbonilation, and could suggest that increase in protein abundance and phosphorylation of proteins involved in this process as an response to the increased oxidative carbonilation observed. The specific contribution of glycolysis in tolerance to severe stress was also simultaneously sustained by differential proteomics and fosfoproteomics, and increase in phosphorilation of several enzymes of this pathway could not be attributed to the abundance increase of them. Again both proteomic approaches cited have gave clear evidences of the importance of amino acid metabolism in leaves for drought tolerance, but the contribution of different amino acids could change depending of the stress degree. These changes in proteomics are strongly reinforced by enzymatic and metabolomics data. Tolerant genotype have higher total amino acids under stress, and under severe stress, higher levels of cysteine, substrate for glutathione biosynthesis, besides higher increases in glycine, serine, lysine, threonine and isoleucine. This data clear suggest the importance of several different amino acids to osmotic adjustment, and could partially explain the lower leaf dehydration of tolerant genotype under severe water deficit. Other good agreement between proteomic and metabolomics data is observed for respiration. Topological analysis of differential proteomics and phosphoproteomics clear indicates the enrichment of the abundance of glycolytic enzymes and sugar metabolism genes in the tolerant genotype. Additionally, metabolomics data indicates the higher levels of glucose, isocitrate, aconitate and malate in this genotype, which strongly suggest that an higher increase in respiration flux to support increased amino acid biosynthesis in leaves under stress could be an important mechanism for drought tolerance in sugarcane. This study offers a good picture to illustrate the polygenic nature of drought tolerance, and the importance of the use of systemic approaches to complement single time point measurements, in order to better understand the mechanism of plant responses to water deficit.

Submitted by Marco Antônio de Ramos Chagas (mchagas@ufv.br) on 2016-06-07T12:23:37Z No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 1448935 bytes, checksum: 539043b4fb5a9f0a81c28f36d44f0d29 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-06-07T12:23:37Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 1448935 bytes, checksum: 539043b4fb5a9f0a81c28f36d44f0d29 (MD5) Previous issue date: 2016-02-04 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / Dentre os fatores ambientais, a seca é uma das principais causas na limitação da produção agrícola. Alguns fatores, como indicadores de expansão da área de plantio e alterações climáticas, evidenciam a necessidade de desenvolvimento de genótipos mais tolerantes. Nosso grupo de pesquisa na Universidade Federal de Viçosa (UFV) tem observado que a chaperona molecular BiP atua em respostas a estresses no retículo endoplasmático (ER) e osmótico, conferindo uma maior tolerância à seca. Neste trabalho, foram caracterizados os perfis proteômicos e metabólicos de plantas transgênicas de soja superexpressando a chaperona molecular BiP e de sua isolinha por eletroforese 2DE-MS e GC/MS, respectivamente. E análise de hormônios utilizando LC-MS. Plantas transgênicas apresentaram uma maior abundância relativa de proteínas relacionadas à fotossíntese, o que sustenta a hipótese que estas plantas estão predispostas geneticamente e fisiologicamente a suportar períodos de seca. Ao contrário do genótipo selvagem, plantas transgênicas não apresentaram mudanças significativas em proteínas relacionadas à glicólise, respiração e estresse oxidativo, o que evidencia uma menor percepção do estresse pelo genótipo geneticamente modificado. O acúmulo intracelular de solutos osmoticamente ativos pode ser um importante mecanismo de ajuste adotado pelas plantas transgênicas. Como evidenciado pelos perfis metabólicos, o acúmulo de aminoácidos pode ser o mecanismo responsável pela manutenção da turgescência celular no genótipo transgênico. Este mecanismo protetor pode possibilitar que a fotossíntese e outras atividades fisiológicas sejam mais operantes em condições de seca. Em condições de déficit hídrico, o ácido salicílico parece ter considerável importância em induzir efeitos de proteção na planta transgênica, podendo ter uma possível ação antagonista ao ácido jasmônico. / Among the environmental factors, drought is one of major cause in limiting agricultural production. Some factors, such as the expansion of the acreage and climate changes, highlight the need to develop more tolerant genotypes. Our research group at the Federal University of Viçosa (UFV) has observed that the molecular chaperone BiP acts in response to stress in the endoplasmic reticulum (ER) and osmotic stress, and gives greater drought tolerance. In this work we characterized the proteomic and metabolic profiles of transgenic soybean plants overexpressing the molecular chaperone BiP and its isoline by electrophoresis 2DE-MS and GC / MS, respectively. And hormones analysis using LC-MS. Transgenic plants showed a higher abundance of proteins related to photosynthesis, which supports the hypothesis that these plants are genetically and physiologically predisposed to withstand periods of drought. Unlike the wild genotype, transgenic plants showed no significant changes in proteins related to glycolysis, respiration and oxidative stress. That indicates a lower perception of the stress by the engineered genotype. The intracellular accumulation of osmotically active solutes may be an important adjustment mechanism adopted by transgenic plants. As evidenced by the metabolic profiles, the amino acid accumulation might be the mechanism responsible for the maintenance of cellular turgor in the transgenic genotype. This protective mechanism may allow photosynthesis and other physiological activities to be more active in drought conditions. In drought conditions, the salicylic acid seems to have considerable importance in protective effects in transgenic plant and may have a possible action antagonist to jasmonic acid.

Tese (doutorado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências Agrárias, Programa de Pós-Graduação em Ciência dos Alimentos, Florianópolis, 2014. / Made available in DSpace on 2015-02-05T20:31:22Z (GMT). No. of bitstreams: 1 330836.pdf: 12343568 bytes, checksum: 12c01698325832ee00689cae10bea61e (MD5) Previous issue date: 2104 / A crescente presença de novos produtos alimentícios no mercado desperta discussões relacionadas à segurança de alimentos. Cada país ou região tem suas próprias leis para liberação de novos alimentos para consumo, porém existe um consenso internacional no que diz respeito às regulamentações para segurança do consumo destes produtos, inclusive de alimentos provenientes de tecnologia de DNA recombinante. O conceito de equivalência substancial tem sido utilizado com este fim, fundamentado no fato de que os alimentos já existentes no comércio são admitidos como seguros para o consumo e servem como base para comparação por meio e análises de componentes específicos. Apesar de convenientes, estas análises-alvo são bastante limitadas por pesquisarem a presença de somente alguns elementos previamente conhecidos. Deste modo, abordagens mais completas para avaliação de alimentos têm sido propostas, como análises transcriptômica e proteômica. Como estas análises geram um grande volume de dados, enfoques utilizando análise estatística multivariada têm sido sugeridos para interpretação dos resultados. Neste trabalho verificou-se a aplicação de ferramentas estatísticas multivariadas para análises transcriptômica (microarranjo) e proteômica (eletroforese bidimensional) com vistas à sua utilização como análise complementar na avaliação de segurança de novos alimentos. Para isso, analisaram-se cinco variedades de batatas reconhecidas como seguras para consumo (Biogold, Fontane, Innovator, Lady Rosetta e Maris Piper). As análises do transcriptoma das amostras revelaram que foi possível a classificação das amostras utilizando a ferramenta SIMCA com uma classe. Foram desenvolvidos dois cenários contendo um conjunto de cinco classificadores e, em cada cenário, foram testadas duas amostras independentes sabidamente seguras, porém analisadas em diferentes momentos (incluindo, assim, variabilidade técnica no teste). Em cada conjunto de classificadores, as amostras teste que foram mais vezes classificadas como não pertencentes aos modelos (ou seja, não classificadas como seguras) representam as amostras com maior variabilidade técnica, pois foram cultivadas e analisadas em tempos diferentes daquelas utilizadas para a construção dos classificadores. Já as amostras que foram reconhecidas como seguras na maioria dos classificadores possuem menor variabilidade técnica. Foi também realizada a análise proteômica por eletroforese bidimensional destas amostras. Utilizou-se tiras de gradiente de pH imobilizado (IPG) de dois comprimentos diferentes, 13 e 24 cm, todas na faixa de pH de 4-7, e os conjuntos de dados gerados, representando a porcentagem de volume de spots (tendo os valores omissos substituídos ou simplesmente eliminados), foram visualizados por diagramas de análise de componentes principais (PCA). Foi verificada clara separação das variedades já nos dois primeiros componentes principais do conjunto de dados contendo valores omissos substituídos. Estes resultados revelam a possibilidade de se construir ferramentas de classificação por técnicas de análise ampla de perfil como a transcriptômica e proteômica, explorando assim uma nova abordagem para avaliação de segurança de alimentos. Para aprimorar o trabalho, a análise de um maior número de amostras permitirá maior precisão dos resultados, incluindo-se assim um alto nível de variabilidade técnica na construção dos classificadores. Desta forma, será possível a reprodução em pequena escala de situações reais de avaliação de segurança de alimentos.<br> / Abstract : The increasing occurrence of new food products in the market stimulates ever more discussions related to food safety. Each country or region possess their own laws for releasing new foods for consumption, but there is an international consensus regarding the regulations for the safety of consumption of these products, including foods derived from recombinant DNA technology. The concept of substantial equivalence has been used for this purpose, based on the fact that food already commercialized are accepted as safe for consumption and serve as basis for comparison through analysis of specific components recognized as toxic. These targeted analyzes are convenient, but they are rather limited because they search for the presence of only a few elements which are previously known. Thus, more comprehensive approaches such as transcriptomics and proteomics analyses have been proposed for food safety evaluation. Multivariate statistical approaches have been suggested for interpretation of results, given that these analyzes generate a large amount of data. On this study the application of multivariate statistical tools for analysis of data from transcriptomics (microarray) and proteomics (two-dimensional electrophoresis) techniques was verified, aiming its use as a complementary tool in safety assessment of novel foods. For that, five varieties of potatoes recognized as safe for consumption (Biogold, Fontane, Innovator, Lady Rosetta and Maris Piper) were analyzed. Transcriptome analysis of samples showed that it was possible to classify the samples using the SIMCA one class. Two scenarios containing a set of five classifiers have been developed, and each set of two independent samples considered as safe were tested, but analyzed at different time points (including technical variability in the test). In each set of classifiers, the test samples which were most often classified as not belonging to the models (i.e. not classified as safe) represent the samples with higher technical variability, given they were grown and analyzed at different time points from those used to construct the classifiers. However, the samples that have been recognized as safe in most classifiers have lower technical variability. In addition, proteomic analysis using two-dimensional electrophoresis was performed with these samples. Immobilized pH Gradient (IPG) strips pH 4-7 of two different lengths, 13 and 24 cm, were used, and the generated datasets representing percentage of volume of spots (missing values have been replaced or simply removed) were visualized by PCA. Clear separation of the varieties was verified already in the first two principal components of the dataset containing replaced missing values. These results reveal the possibility of building classification tools through profiling techniques such as transcriptomics and proteomics, thus exploring a complimentary approach for food safety assessment. To improve the work, analysis of an increased amount of samples will enable more accurate results, thus including a high level of technical variability in the construction of classifiers. As a result, it is possible to represent real situations of food safety assessment in small-scale.

Tese (doutorado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências Agrárias, Programa de Pós-Graduação em Recursos Genéticos Vegetais, Florianópolis, 2014. / Made available in DSpace on 2015-05-26T04:03:41Z (GMT). No. of bitstreams: 1 333791.pdf: 2327740 bytes, checksum: 95e2339bcf227efb5576a978ea3b8898 (MD5) Previous issue date: 2014 / O cultivo de espécies frutíferas no Brasil encontra na incidência de pragas e doenças suas principais limitações. Uma estratégia adequada para o controle das moléstias é o uso dos mecanismos de defesas natos das plantas. Para isto as plantas apresentam um sistema de resposta basal associado a um sistema de defesa especifica para cada tipo de patógeno, o que gera respostas sistêmicas e duradouras, como transdução de sinais e transcrição dos genes de defesa. As proteínas relacionadas a patogenene (PR) bem como os fitohormônios, importantes na sinalização, são alvos importantes de estudos relacionados à resistência contra patógenos. Dentre as doenças de grande impacto em culturas com relevância econômica está o míldio da videira (Plasmopara viticola). A videira (Vitis vinifera) além da sua importância econômica é a primeira espécie frutífera cujo genoma foi sequenciado, tornando-se assim um ótimo modelo de estudo. Análises proteômicas possibilitam avanços significativos no conhecimento dos mecanismos moleculares de resistência a patógenos e a associação de diferentes técnicas relacionadas a proteomica para estudar as diversas partes do mecanismo de resistência na planta pode auxiliar no entendimento da relação planta-patógeno. Assim, o presente estudo tem como objetivo contribuir para o esclarecimento dos mecanismos moleculares e bioquímicos associados à resistência à doença causada por Plasmopara viticola em videira (Vitis sp). Os estudos histológicos tiveram como objetivo caracterizar o desenvolvimento do P. viticola, bem como determinar diferenças estruturais nas variedades escolhidas para o estudo: uma resistente (Bordô) e outra susceptível (Cabernet Sauvignon). Nessas avaliações histológicas foram observadas diferenças estruturais e bioquímicas entre as duas variedades como presença de pêlos e mesofilo mais compactos na var. resistente. Já para o desenvolvimento do patógeno constatou-se a dificuldade dos esporos na penetração dos tubos germinativos através dos estômatos também na variedade resistente. Para as analises da expressão protéica foi utilizado uma combinação de eletroforese bidimensional (2-DE) associado ao nanoLC- MS/MS. Foram observadas diferenças protéicas quantitativas e qualitativas nos diferentes tempos após a inoculação. Foram identificadas 44 proteínas exclusivas, sendo 33 da var. resistente e 10 da var. suscetível. A ativação da resposta de defesa foi observada somente na var. Bordô com aumento constante na expressão das proteínas no decorrer dos tempos analisados, principalmente as 96 hai(horas após a infecção). As analises do proteoma das linhagens de videira contendo o locus de resistência Rpv1 e Rpv3 também estudadas nesse projeto apresentaram resultados semelhantes os da var. Bordô. Nessas analises foram identificados 41 proteínas. As proteínas foram classificadas em diferentes categorias funcionais: metabolismo energético, metabolismo de proteínas, resposta ao estresse e resposta de resistência. Proteínas relacionadas à resistência estavam presentes apenas as 96 hai. A ativação de uma reação de defesa, com um aumento da expressão das proteínas foi observada mais frequentemente em 48 hpi, o que é consistente com o estabelecimento da interação incompatível para P. viticola.<br> / Abstract: Cultivation of fruit species in Brazil has its limitations due to the incidence of pests and diseases. An adequate strategy for disease control is the use of a basal response system intrinsic to the plant. For that, plants show a basal response system associated with a specific defense system for each type of pathogen, which creates lasting and systemic responses, such as signal transduction and transcription of defense genes. Pathogenesis-related proteins (PR), as well as phytohormones (important for signaling), are important targets for studies related to resistance against pathogens. The Grapevine Powdery Mildew (Plasmopara viticola) is among the diseases of great impact in economically relevant cultures. Grapevine (Vitis vinifera), besides its economic importance, is the first fruit specie whose genome was sequenced, becoming a great model of study. Proteomic analyzes enable significant advances in knowledge of molecular mechanism on pathogen resistance and the association of different techniques to study different parts of resistance mechanisms in plants can help to understand the plant-pathogen relation. Therefore, this study aimed to contribute to the elucidation of the molecular and biochemical mechanisms associated to disease resistance caused by Plasmopara viticola in Grapevine (Vitis sp.). Histological studies aimed to characterize the development of P. viticola, as well as to determine structural differences in the chosen varieties for the study: a resistant one (Bordo) and susceptible one (Cabernet Sauvignon). Structural and biochemical differences were observed between the varieties on the histological analyzes, such as presence of leaf hair and more compact mesophyll on the resistant variety. For the pathogen development it was found a difficulty for the spores to penetrate the germ tubes through stomata for the resistant variety. The combination of bidimensional electrophoresis (2-DE) associated with nanoLC -MS/MS was used for the protein expression analyzes. Quantitative and qualitative differences were found in the protein analyzes for different hour after infection. 44 exclusive proteins were found, 34 for the resistant variety and 10 for the susceptible variety. The activation of defense response was observed only in the Bordo variety with a constant increase on protein expression over time, mainly at 96 hours after infection. Proteomic analyzes of Grapevine lines containing Rpv1 and Rpv3 resistant locus, also studied in this project, showed similar results to the Bordo variety, where 41 proteins were identified. The proteins were classified in different functional categories: energetic metabolism, protein metabolism, stress response and resistance response. Proteins related to resistance were present only at 96 hours after infection. The activation of a defense reaction with an increase of protein expression was observed most often at 48 hours after infection, which is consistent with the establishment of incompatible interaction for P. viticola.

Made available in DSpace on 2016-03-28T12:39:37Z (GMT). No. of bitstreams: 2 patricia_ferrao_ioc_dout_2014.pdf: 5118660 bytes, checksum: d25122b18e1bcb82dee22e425b2ed062 (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2016-01-13 / Fundação Oswaldo Cruz. Instituto Oswaldo Cruz. Rio de Janeiro, RJ, Brasil / Estudos recentes mostraram que TGF-\03B2 esta envolvido na cardiopatia chagásica aguda e crônica. O aumento de seus níveis plasmáticos e a ativação da sua via de sinalização celular são aspectos peculiares da doença chagásica crônica. Além do seu relevante papel na patologia chagásica, também se observou que esta citocina está intimamente associada ao T. cruzi como um regulador de diferentes etapas de seus ciclo de vida. Trabalhos anteriores demostraram que T. cruzi é capaz de ativar TGT-\03B2 latente, utilizando-o na invação às células hospedeiras e que amastigotas de T. cruzi se ligam e internalizam TGF-\03B2 recombinante, estando este evento relacionado à capacidade de proliferação de amastigotas e sua diferenciação em tripomastigotas no final do ciclo intracelular. Este conjunto de informações nos levou ao questionamento de quais moléculas de T. cruzi poderiam estar envolvidas nos processos de proliferação e diferenciação celular frente ao estímulo por TGF-\03B2. Neste sentido, o presente projeto tem por principal objetivo a caracterização de moléculas responsivas ao estimulo de TGF-\03B2 através de uma abordagem fosfoproteômica. Para tal, extratos de proteínas totais de epimastigotas de T. cruzi (cepa Y), incubadas ou não com TGF-\03B2, foram preparados durante a fase exponencial de crescimento do parasito. Evidenciamos que a dose ótima de TGF-\03B2 para maior indução de fosforilação seria de 5 ng/ml. em seguida, o tempo ótimo de indução com TGF-\03B2 (1,5,15,30 e 60 minutos) foi testado e concluímos que as diferenças entre os padrões de fosforilação são muitos sutis em géis unidimensionais, nos fazendo optar pela análise exclusiava dos perfins em géis bidimensionais de 7 cm com faiza de PH 3-10 não-linear. A avaliação dos perfis bidimensionais demonstrou diferenças nos padrões de fosforilação entre os tempos estudados, nos levando a manter um estudo de cinética de tempo. As imagens dos géis foram analisadas e algumas das proteínas consideradas responsivas a TGF-\03B2 foram identificadas por espectrometria de massas. Observamos que as proteínas de choque térmico, tubulinas, desidrogenases, enolases, ciclofilina A, GrpE, cruzipaína, fator de elongamento 1-\03B1, fator de iniciação eucariótica 5a, entre outras, têm sua fosforilação e/ou expressão moduladas em resposta a TGF-\03B2. Buscamos correlacionar a função já descrita na literatura para cada proteína com seu possível papel na sinalização intracelular dsparada por TGF-\03B2, em concordância com o comportamento de fosforilação e/ou expressão apresentado em novas análises. Por último, foi avaliado se a adição de TGF-\03B2 a culturas de epimastigotas teria algum efeito sobre a proliferação dos parasitos. Verificamos que a adição de TGF-\03B2 promoveu um aumento de até 73% no crescimento dos parasitos nas primeiras 24 horas de estudo. O conjunto de dados obtidos contribui para a elucidação dos mecanismos moleculares relacionados à sinalização de TGF-\03B2, proporcionando uma fonte para detecção de novos alvos terapêuticos para a doença de Chagas / Recent studies show that TGF - β is involved in the acute and chronic chagasic cardiopathy. High levels of TGF - β and the activation of its signaling pathway were shown to be peculiar aspects of patients with chron ic Chagas disease. Besides its relevant role in the pathology of Chagas dis ease, this cytokine was also observed to be intimately associated with Trypanosoma cruzi as a regulator of different stages of the parasite ́s life cycle. Previous works have show n that T. cruzi , using it in the process of h ost cell invasion. In addition, amastigote forms are able to bind and internalize recombinant TGF - β , and this event is related to their capacity to proliferate and differentiate int o trypomastigote forms at the end of the intracellular cycle. Taken togethe r, this set of information raises the question as molecules are involved in the processe of cellular proliferation and differentiation stimulated by TGF - β . Therefore, this work aims to characterize TGF responsive molecules through a pho sphoproteomic approach. For this purpose, total T. cruzi epimastigotes (Y strain), incubated or not with TGF were prepared from parasites in the exponential gro wth phase. We determined that 5 was the dose that induce d the highest number of phosphorylation events. Next, the optimal induction time (1, 5, 15, 30 and 60 minutes) was evaluated and we concluded that the phosphorylation patterns from the studied times showed only subtle differences using 1 -DE analysis, leadi ng us to evaluate these profiles DE gels (7cm pH 3 -10 non- linear). The profiles obtained showed differences in phosphorylation patterns duri ng the time - which led us to maintain a time - kinetics study. Gel images wer responsive proteins were identified by mass spectr ometry. We observed that heat shock proteins, tubulins, dehydr ogenases, enolases, cyclophilin A, GrpE, cruzipain, elongation factor - 1 α , eukaryotic initiation factor their phosphorylation and/or expression levels modu lated by TGF correlate the function already described in the lit erature for each protein with their possible role in intracellular signaling triggered by TGF - β , in agreement with thei phosphorylation and/or expression behavior shown in our analysis. Finally, we assessed whether the addition of TGF - β to epimastigotes cultures would have some effect on parasite proliferation. We found that TGF - β addition led to an increase of up in parasite growth in the first 24 hours of culture . The data presented here contributes to the elucidation of the molecular mec hanisms related to TGF , providing a source of new potential therapeutic t argets against in response to TGF - β is involved in the acute and chronic chagasic and the activation of its signaling pathway were shown to be peculiar aspects of patients with chron ic Chagas disease. Besides its ease, this cytokine was also observed to as a regulator of different stages of T. cruzi is able to activate ost cell invasion. In addition, amastigote , and this event is related to their capacity to proliferate and differentiate int o trypomastigote forms at the end of r, this set of information raises the question as molecules are involved in the processe of cellular proliferation and . Therefore, this work aims to characterize TGF - β sphoproteomic approach. For this purpose, total epimastigotes (Y strain), incubated or not with TGF - β , were prepared from parasites in the exponential gro wth phase. We determined that 5 d the highest number of phosphorylation events. Next, the optimal induction time (1, 5, 15, 30 and 60 minutes) was evaluated and we concluded that the phosphorylation patterns from the studied times showed ng us to evaluate these profiles linear). The profiles obtained - course under study, kinetics study. Gel images wer e analyzed and responsive proteins were identified by mass spectr ometry. We observed that heat shock proteins, tubulins, dehydr ogenases, enolases, cyclophilin , eukaryotic initiation factor -5a and others had their phosphorylation and/or expression levels modu lated by TGF - β . We tried to correlate the function already described in the lit erature for each protein with their , in agreement with thei r phosphorylation and/or expression behavior shown in our analysis. Finally, we to epimastigotes cultures would have some addition led to an increase of up in parasite growth in the first 24 hours of culture . The data presented here contributes to the elucidation of the molecular mec hanisms related to TGF - β , providing a source of new potential therapeutic t argets against Chagas disease