O transplante de ilhotas pancreáticas humanas é considerado uma estratégia promissora para curar pacientes portadores de Diabetes Mellitus tipo 1. Entretanto, sua eficiência é dramaticamente afetada pelo rendimento das ilhotas no processo de isolamento/purificação e pela viabilidade das células após o transplante. As ilhotas pancreáticas isoladas são obtidas através da perfusão do pâncreas com colagenase e purificação em gradiente de densidade. As espécies reativas de oxigênio (ERO) exercem um papel importante durante a obtenção e o transplante de ilhotas pancreáticas humanas, contribuindo significativamente para diminuir a viabilidade dessas células. Nesse trabalho foram avaliadas as respostas oxidativas de ilhotas pancreáticas humanas durante os processos de isolamento/purificação e cultivo. As atividades da superóxido dismutase (SOD), da catalase, bem como os níveis de oxidação em proteínas mostraram-se, na maioria dos casos, aumentados, principalmente durante a etapa de purificação das ilhotas em gradiente de Ficoll e no período de cultura das ilhotas. Esses resultados indicam que a purificação em gradiente de Ficoll parece ser uma etapa crítica de geração das ERO, assim como longos períodos de cultivo. Porém, verificou-se que influências advindas dos diferentes doadores (idade, causa- mortis, estilo de vida, etc.) e condições de preservação do órgão (tempo de isquemia, solução de conservação, etc.) poderiam estar relacionadas à discrepância de alguns resultados encontrados. Com o intuito de minimizar tais variáveis, optou-se por estudar os efeitos relacionados ao Ficoll em células de insulinoma INS-1E, um modelo celular fisiologicamente semelhante. Para tanto, as atividades das enzimas antioxidantes SOD, catalase, glutationa peroxidase (GPx) e glutationa redutase (GR), assim como os danos oxidativos em proteínas e lipídeos, os níveis de glutationa reduzida (GSH) e de glutationa oxidada (GSSG), a viabilidade celular e os níveis de algumas enzimas envolvidas no processo apoptótico como p38, JNK-1, ERK 1-2 e PI3-K expostas a polissacarose (1100 mg/mL), um genérico do Ficoll, foram determinadas. De acordo com os resultados, as atividades da SOD, catalase e GPx presentes em amostras expostas a polissacarose mostraram-se aumentadas. Em cultura, a atividade de isoforma mitocondrial da SOD (Mn-SOD) de células INS-1E correspondeu a 50% da atividade total da SOD. Na presença da polissacarose, a atividade da Mn-SOD aumentou para 80% do total. Além disso, a oxidação de lipídios e de proteínas aumentou e os níveis de GSH e GR diminuíram discretamente. Estes resultados mostraram que a exposição dessas células a polissacarose está associada com o estresse oxidativo. Entretanto, tal exposição não foi responsável pela diminuição da viabilidade celular embora os níveis protéicos de JNK-1, ERK1-2 e PI3-K tenham se mostrado consideravelmente aumentados e os níveis de p38, diminuídos. Os níveis de expressão e a atividade de enzimas antioxidantes são conhecidamente baixos em ilhotas pancreáticas. A N-acetilcisteína (NAC) foi adicionada em cultura de células para prevenir o estresse oxidativo. Nessas condições, a NAC foi capaz de proteger as células INS-1E do estresse oxidativo induzido. Esses resultados sugerem que a exposição à polissacarose está associdada ao estresse oxidativo em células INS-1E e que a NAC foi capaz de prevenir a morte celular de células INS-1E expostas a ERO através do aumento intracelular de GSH. / Human pancreatic islet transplantation is considered a promising strategy to cure the cure Diabetes Mellitus type I. However, transplantation efficiency is dramatically affected by sub-optimum islet recovery in the isolation/purification procedure and islet viability after transplantation. Isolated pancreatic islets are obtained through collagenase perfusion and cell purification in a Ficoll gradient. Reactive oxygen species (ROS) play an important role during human pancreatic islet isolation and may contribute to the decrease in cell viability. The aim of this study was evaluated the response of human pancreatic islets during its isolation/purification and culture time. Activities of superoxide dismutase (SOD) and catalase as well as protein oxidation levels increased in most of analyzed samples, mainly during the Ficoll gradient islet purification step and further culture. Ficoll seems to be the critical step for ROS generation. Nevertheless, it was observed that donors characteristics (aging, cause of death, habits, etc.) and organ preservation conditions (ischemic time, preservation solution, etc.) may be related to our results. To minimize these variations, a physiological cellular model based on INS-1E cells was chosen. The antioxidant enzymes SOD, catalase, glutathione peroxidase (GPx) and glutathione reductase (GR) activities as well the oxidative damage to proteins and lipids, reduced glutathione (GSH) and oxidized glutathione (GSSG) levels, cellular viability and the protein levels of some enzymes responsible for apoptotic signaling like p38, JNK-1, ERK 1-2 and PI3-K upon exposure to polysucrose (1100 mg/mL), a similar of Ficoll, were determined. The SOD, catalase and GPx in samples exposed to polysucrose displayed hight activities. In all cultures, the activity of mitochondrial isoform of SOD (Mn-SOD) corresponds to 50% of total SOD activity. In the presence of polysucrose, the activity of Mn-SOD increased up to 80%. Lipids and protein oxidation levels were also increased and the GSH levels with the GR activity decreased. These results indicated that the exposure of INS-1E cells to polysucrose is associated with oxidative stress. However, the polysucrose exposure was not responsible for cell death although JNK-1, ERK1-2 and PI3-K levels showed hight levels but not p38, upon polysucrose exposure. The expression and activities of antioxidants enzymes are known to be very low in pancreatic islets. N-acetylcysteine (NAC) was added to the INS-1E cultures to prevent oxidative stress. Under these conditions, NAC was able to protect INS- 1E cells from induced oxidative damage by increasing intracellular GSH levels. Taken together, these results suggest that the exposure to polysucrose is related to the oxidative stress in INS-1E cells and NAC seems to be able to maintain cell viability.

Made available in DSpace on 2016-12-06T17:07:30Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Cleber.pdf: 974012 bytes, checksum: dbb791b7e561536b085ed8b846d258c7 (MD5) Previous issue date: 2011-03-28 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / Cardiovascular diseases are a major cause of death in Brazil and physical exercise is considered an important agent in the prevention and treatment of these conditions. Studies related to the type, intensity and volume of physical training required to trigger biochemical protective material are still controversial. This study investigated the effects of two exercise protocols on parameters of ventricular oxidative metabolism in rats after myocardial infarction. Thirty-six male Wistar rats of two months were divided randomly into two groups (n = 18): Sham and Acute Myocardial Infarction (AMI). The rats were anesthetized and the AMI was induced by coronary artery occlusion. Thirty days after AMI induction, the rats were subdivided into six groups (n = 6): Sham, Sham + continuous training (SCT, 60 minutes), Sham + fractionated training (10x5 min with 1 minute interval), AMI, AMI + continuous training and AMI + fractionated training. The exercise sessions were conducted in water (30-32 º C), 5 times/wk for six-wk. Forty-eight hours after the last exercise session, the rats were killed and the left ventricle was surgically removed and stored at -80 º C for analysis of oxidative stress (activity and expression of antioxidant enzymes and oxidative damage to lipids and proteins) and oxidative metabolism (respiratory chain proteins). After AMI, superoxide production decreased significantly in both training models. The activity and expression of superoxide dismustase didn t change by training, but there was an increase on catalase levels in the continuous training group. Glutation peroxidase decreased in both groups. The damage in lipids decreased only in the continuous training group while the protein damage was reduced in the fractionated training group. Cytochrome C increased in both groups, and peroxisome proliferator-activated receptor-γ coactivator increased in the group under continuous training. Thehypoxia-inducible factor was significantly reduced with both training protocols. These results suggest a significant improvement in the redox state of the myocardium of AMI-induced rats exposed to different training models, but the continuous training seems to be more efficient for the evaluated parameters. / As doenças cardiovasculares se destacam como a principal causa de morte no Brasil e o exercício físico tem sido considerado como sendo um importante agente tanto na prevenção quanto no tratamento dessas doenças. Entretanto, os estudos ainda são controversos quanto ao tipo e à intensidade de esforço necessária para provocar alterações bioquímicas protetoras significativas. Verificar os efeitos de dois protocolos de exercício sobre parâmetros do metabolismo oxidativo ventricular em ratos pós-infarto. Foram utilizados 36 ratos Wistar machos, dois meses de idade, pesando entre 200-250g e divididos randomicamente em 2 grupos (n=18): Sham e Infarto Agudo do Miocárdio (IAM). Os animais foram anestesiados e induzidos ao IM por oclusão da coronária . Trinta dias após a indução do IAM os animais foram divididos em 6 subgrupos (n=6): Sham, Sham + treinamento contínuo (60 minutos), Sham + treinamento fracionado (10 x 5 minutos com 1 minuto de intervalo), IAM, IAM + treinamento contínuo e IAM + treinamento fracionado. As sessões de exercício foram realizadas na água (30-32ºC), 5 vezes por semana, durante 6 semanas. Quarenta e oito horas após a última sessão de exercício os animais foram mortos por decapitação, o ventrículo esquerdo foi cirurgicamente removido e armazenado em freezer -80ºC para análises de estresse oxidativo (atividade e expressão de enzimas antioxidantes e danos oxidativos em lipídeos e proteínas) e metabolismo oxidativo (complexos da cadeia respiratória). Após o infarto do miocárdio, a produção de superóxido reduziu significativamente em ambos os modelos de treinamento. A atividade e a expressão da SOD não foram alteradas pelos treinamentos, mas a CAT aumentou sua expressão com o treinamento contínuo e a expressão da GPX reduziu em ambos os grupos treinados coincidindo com o aumento de sua atividade. Os danos em lipídeos reduziram apenas no grupo submetido ao treinado contínuo enquanto que os danos em proteínas somente no grupo com treinado fracionado. Citocromo C aumentou em ambos os grupos enquanto PGC1-alfa teve sua expressão aumentada no grupo submetido ao treinamento contínuo. HIF-1 reduziu significativamente com ambos os protocolos de treinamento. Esses resultados sugerem uma melhora significativa no estado redox do miocárdio de ratos induzidos ao IAM e expostos a diferentes modelos de treinamento, porém o treinamento contínuo parece ser mais eficiente sobre os parâmetros analisados.

Made available in DSpace on 2014-12-17T14:03:29Z (GMT). No. of bitstreams: 1 LeandroSC.pdf: 650975 bytes, checksum: 6025a0ab11422614586386d571f936a6 (MD5) Previous issue date: 2008-12-23 / Coordena??o de Aperfei?oamento de Pessoal de N?vel Superior / In recent years, sulfated polysaccharides (SP) from marine algae have emerged as an important class of natural biopolymers with potential pharmacology applications. Among these, SP isolated from the cell walls of red algae have been study due to their anticoagulant,antithrombotic and anti-inflammatory activities. In the present study, three sulfated polysaccharides fractions denominated F1.5v, F2.0v and F3.0v were obtained from seaweed G. caudate by proteolysis followed to acetone fractionation. Gel electrophoresis using 0.05 M 1,3-diaminopropane-acetate buffer, pH 9,0, stained with 0.1% toluidine blue, showed the presence of SP in all fractions. The chemical analysis demonstrated that all the fractions are composed mainly of galactose. These compounds were evaluated in anticoagulant, antioxidant and antiproliferative activities. In anticoagulant activity evaluated through aPTT and PT tests, no one fractions presented anticoagulant activity at tested concentrations (0.1 mg/mL; 1.0 mg/mL; 2.0 mg/mL).The antioxidant activities of the three fractions were evaluated by the following in vitro systems: Total antioxidant capacity, superoxide and hydroxyl radical scavenging, ferrous chelating activity and reducing power. The fractions were found to have different levels of antioxidant activity in the systems tested. F1.5v shows the highest activity, especially in the ferrous chelating system, with 70% of ferrous inhibiting at 1.0 mg.mL-1. Finally, all the fractions showed dose-dependent antiproliferative activity against HeLa cells. The fractions F1.5v and F2.0v presented the highest antiproliferative activity at 2.0 mg/mL with 42.7% and 37.0% of inhibition, respectively. Ours results suggests that the sulfated polysaccharides from seaweed G. caudata are promising compounds in antioxidant and/or antitumor therapy / Nos ?ltimos anos, os polissacar?deos sulfatados de algas marinhas t?m emergido como uma importante classe de biopol?meros naturais com potenciais aplica??es farmacol?gicas. Dentre estas, os polissacar?deos sulfatados de algas vermelhas tem sido extensivamente estudados, principalmente devido seu potencial anticoagulante, antitromb?tico e antiinflamat?rio. Neste estudo, tr?s fra??es de polissacar?deos sulfatados, denominadas F1,5v, F2,0v e F3,0v, foram extra?das da alga vermelha Gracilaria caudata, atrav?s de prote?lise, seguida de fracionamento com acetona. Eletroforese em gel de agarose em Tamp?o PDA mostrou a presen?a de polissacar?deos sulfatados em todas as fra??es. As an?lises qu?micas demonstraram que todas as fra??es s?o compostas principalmente de galactose. Esses compostos foram testados para as atividades anticoagulante, antioxidante e antiproliferativa. Na atividade anticoagulante avaliada atrav?s de kits comerciais de aPTT e PT, nenhuma das fra??es apresentou atividade nas concentra??es testadas (0,1; 0,5 e 1,0 mg/mL). A atividade antioxidante das fra??es polissacar?dicas foi avaliada atrav?s de diversos ensaios in vitro: Capacidade antioxidante total, seq?estro de radical super?xido e hidroxila, quela??o f?rrica e poder redutor. As fra??es apresentaram diferentes n?veis de atividade antioxidante nos sistemas testados. A fra??o F1,5v apresentou a maior atividade antioxidante, principalmente no ensaio de quela??o f?rrica, com cerca de 70,00% de inibi??o na concentra??o de 1,0 mg/mL. Finalmente, todas as fra??es apresentaram atividade antiproliferativa dose-dependente frente a linhagem celular tumoral HeLa. As fra??es F1,5v e F2,0v apresentaram as maiores atividades antiproliferativa na concentra??o de 2,0 mg/mL, com 42,70% e 37,00% de inibi??o da prolifera??o celular em rela??o ao controle. Nossos resultados sugerem que os polissacar?deos sulfatados de G. caudata s?o promissores f?rmacos na terapia antioxidante e/ou antiproliferativa

Made available in DSpace on 2014-12-17T14:03:35Z (GMT). No. of bitstreams: 1 LeonardoARS_DISSERT.pdf: 3694454 bytes, checksum: 6813d4e2275c599aa11e18b29a511e71 (MD5) Previous issue date: 2010-09-17 / Conselho Nacional de Desenvolvimento Cient?fico e Tecnol?gico / Galactans are polysaccharides sulfated present in the cell wall of red algae. Carrageenans are galactans well known in the food industry as gelling polysaccharides and for induce inflammatory process in rodents as animal model. The extraction of polysaccharides from A. multifida has been carried out by proteolysis and precipitation in different volumes of acetone, which produced three fractions (F1, F2, and FT). Chemical and physical analyses revealed that these fractions are sulfated galactan predominantly. Results of the antioxidant activity assays showed that all of these fractions have antioxidant activity and that was associated with sulfate content of the analysis of reducing power and total antioxidant capacity. However, these fractions were not effective against lipid peroxidation. The fraction FT presented higher activity on the APTT test at 200 &#956;g (> 240 s). The assessment of the hemolytic activity showed that the FT fraction has the best activity, increasing lyses by the complement system to 42.3% (50 &#956;g) (p< 0,001). The fraction FT showed the best yield, anticoagulant and hemolytic activity between the three fractions and therefore it was choose for the in vivo studies. The Inflammation assessment using the FT fraction (50 mg / kg MB) showed that the cellular migration and the IL-6 production increased 670.1% (p< 0,001) and 531.8% (p< 0,001), respectively. These results confirmed its use as an inflammation inducer in animal model. Cytotoxicity assay results showed that all fractions have toxic effects on 3T3 and HeLa cells after exposition of 48 hours, except when 100 &#956;g for both F1 and FT were used. These results arise the discussion whether these polysaccharides it should be used as additive in foods, cosmetics and medicines. / Galactanas s?o polissacar?deos sulfatados presentes na parede celular de algas vermelhas. Carragenanas s?o galactanas bem conhecidas na ind?stria de alimentos como polissacar?deos gelificantes e para induzir o processo inflamat?rio em roedores como modelo animal. A extra??o de polissacar?deos de A. multifida foi realizada por prote?lise e precipita??o em diferentes volumes de acetona, que produziu tr?s fra??es (F1, F2, e FT). An?lises f?sicas e qu?micas revelaram que essas fra??es s?o predominantemente galactanas sulfatados. Resultados dos ensaios de atividade antioxidante mostraram que todas essas fra??es apresentam atividade antioxidante e que esteve associada ao teor de sulfato na an?lise da redu??o da pot?ncia e capacidade antioxidante total. No entanto, estas fra??es n?o foram eficazes contra a peroxida??o lip?dica. A fra??o FT apresentou maior atividade no teste de APTT a 200 mg (> 240 s). A avalia??o da atividade hemol?tica mostrou que a fra??o FT tem a melhor atividade, aumentando a lise pelo sistema complemento para 42,3% (50 mg) (p< 0,001). A fra??o FT apresentou o melhor rendimento, atividade anticoagulante e hemol?tica entre as tr?s fra??es e por isso foi escolhido para os estudos in vivo. A avalia??o da inflama??o com a fra??o FT (50 mg / kg MB) mostrou que a migra??o celular e a produ??o de IL-6 aumentaram 670,1% (p< 0,001) e 531,8% (p< 0,001), respectivamente. Estes resultados confirmam a sua utiliza??o como indutor de inflama??o em modelo animal. Resultados do teste de citotoxicidade mostraram que todas as fra??es t?m efeitos t?xicos nas c?lulas 3T3 e HeLa ap?s a exposi??o de 48 horas, exceto quando 100 mg para os F1 e FT foram utilizados. Estes resultados levantam a discuss?o se estes polissacar?deos devem ser usados como aditivo em alimentos, cosm?ticos e medicamentos

Objetivos. Avaliar o papel do transplante de células hematopoiéticas (TCH) e da interleucina 6 (IL – 6) sobre vários parâmetros de estresse oxidativo em pacientes com Adrenoleucodistrofia ligada ao cromossomo X (X-ALD). Métodos. A concentração de malondialdeído (MDA), o conteúdo de carbolinas e sulfidrilas e a concentração de ácido hexacosanóico (C26:0) foram quantificados no plasma de pacientes X-ALD antes e após serem submetidos ao TCH. E, a concentração de MDA, a formação de carbonilas e a concentração de IL-6 foram quantificados em plasma e o conteúdo de glutationa reduzida (GSH) foi quantificado em eritrócitos de pacientes X-ALD com fenótipos cerebral infantil (cALD) ou assintomáticos no momento diagnóstico. Resultados. Observamos um aumento significativo na concentração de MDA em plasma de pacientes X-ALD antes e após o TCH em comparação ao grupo controle e uma redução significativa nesses valores após o transplante em comparação aos anteriores ao procedimento. Verificamos uma redução significativa no conteúdo de sulfidrilas no plasma de pacientes X-ALD antes do TCH em comparação ao grupo controle e um aumento significativo desses níveis após o TCH. Não observamos diferenças significativas no conteúdo de carbonilas no plasma de X-ALD antes e após o TCH, em comparação aos controles, apesar de observarmos uma redução significativa nesta determinação nos pacientes após o transplante em relação a antes do TCH. Os pacientes X-ALD apresentam níveis plasmáticos de C26:0 significativamente aumentados antes do TCH em comparação aos controles e, após o TCH, as concentrações de C26:0 foram reduzidas. Observamos uma correlação negativa significativa entre a medida do conteúdo de sulfidrilas e os níveis plasmáticos de C26:0 de indivíduos X-ALD antes do TCH. Também evidenciamos elevados níveis de MDA e da formação de carbonilas no plasma de pacientes cALD e assintomáticos em comparação ao grupo controle. Ainda, observamos redução significativa do conteúdo de GSH nos dois grupos testados comparados aos controles. A quantificação de IL-6 foi significativamente maior nos pacientes cALD, o que não foi observado nos pacientes assintomáticos, apesar destes mostrarem uma tendência de aumento da concentração de IL-6. Conclusões. Os resultados obtidos a partir do plasma de pacientes X-ALD antes e após o TCH demonstram que esta terapia, quando bem indicada e bem sucedida, tem alta efetividade em reduzir a concentração plasmática de C26:0 e é eficaz em reduzir a peroxidação lipídica e o dano oxidativo às proteínas nos pacientes X-ALD. Ainda, é possível relacionar o acúmulo de C26:0 e o dano oxidativo na patogênese da X-ALD. Nossos dados permitem sugerir que a lipoperoxidação e o dano oxidativo às proteínas possam de alguma forma estar envolvidos na fisiopatologia da X-ALD. Além disso, podemos presumir que, nos pacientes X-ALD assintomáticos estudados, o dano oxidativo e os aspectos inflamatórios desempenham papéis importantes na evolução e nas futuras manifestações do fenótipo neuronal. Também podemos supor que a administração de antioxidantes deve ser considerada como uma terapia adjuvante potencial para os pacientes assintomáticos e sintomáticos afetados pela X-ALD, inclusive para aqueles submetidos ao TCH. / Objective. We aimed to evaluate the role of hematopoietic stem cell transplantation (HSCT) and interleukin 6 (IL – 6) on various parameters of oxidative stress in X-linked adrenoleukodystrophy (X-ALD) patients. Methods. Malondialdehyde (MDA), sulfhydryl, carbonyl and hexacosanoic acid (C26:0) levels were measured in plasma from X-ALD patients before and after HSCT. And, MDA, carbonyl and IL-6 levels were measured in plasma and reduced glutathione (GSH) content was measured in erythrocytes from X-ALD patients with different phenotype (asymptomatic and childhood cerebral (CCER patients) at diagnosis moment. Results. We observed increased levels of MDA in plasma from X-ALD before and after HSCT compared to control group, but there was a significant reduction in MDA values after transplantation compared to levels found before the procedure. We verified a significant decrease in sulfhydryl content in plasma of X-ALD patients before HSCT compared with the control group and we also verified a significant increase in the levels of sulfhydryl content after HSCT. No significant differences were observed in carbonyl content in plasma of X-ALD before and after HSCT, compared to controls. However, we observed a significant reduction of plasma carbonyl content from X-ALD patients after HSCT compared to before HSCT. X-ALD patients presented a significant increase of C26:0 plasma level before HSCT when compared to controls and an important reduction of C26:0 plasma concentration in X-ALD patients after HSCT when compared to before HSCT C26:0 levels. We observed an inverse significant correlation between sulfhydryl content and plasma C26:0 levels of X-ALD individuals before HSCT. We also evidenced high levels of MDA and carbonyl formation in plasma from CCER and asymptomatic patients compared to controls. Still, we observed a significant decrease of GSH content in both groups tested compared to controls. The quantification of IL-6 is significantly higher in CCER patients, which is not observed in asymptomatic patients, despite these patients show a tendency of increased concentration of IL-6. Conclusions. The results obtained from plasma of X-ALD patients before and after HSCT demonstrate that this therapy, when well indicated and successful, has high effectiveness in reducing C26:0 plasma and is effective in reducing lipid peroxidation and oxidative damage to proteins in X-ALD patients. Still, it is possible to relate the accumulation of C26:0 and oxidative damage in the pathogenesis of X-ALD. Our data also suggest that lipid peroxidation and protein damage may somehow be involved in the pathophysiology of X-ALD. Moreover, we can assume that in our asymptomatic X-ALD patients, oxidative damage and inflammatory issues seem to play an important role in the evolution and future manifestations of neuronal phenotype. We can also assume that the administration of antioxidants should be considered as a potential adjuvant therapy for asymptomatic and symptomatic patients affected by X-ALD, including those that are submitted to HSCT.

A produção de radicais de carbono \"in vivo\" durante a biotransformação da hidrazina foi demonstrada por ressonância para magnética eletrônica, utilizando o método do captador de spin. Eritrócitos de rato também oxidaram a hidrazina, formando radicais de carbono e nitrogênio, além de espécies reativas de oxigênio. Todas estas espécies, possivelmente formadas \"in vivo\", são potencialmente causadoras de dano a macromoléculas. Podem, por exemplo, iniciar reações secundárias formando radicais de componentes celulares, como ocorreu com a hemoglobina que foi oxidada a radicais tiil-hemoglobina em eritrócitos tratados com hídrazina. Radicais de carbono formados durante a biotransformação da hidrazina em animais expostos provêm necessariamente de substâncias endógenas e podem ser direta ou indiretamente responsáveis pela modificação ( alquilação ) de bases no DNA \"in vivo\". A hidrazona do formaldeído é descrita na literatura como um intermediário da alquilação induzida por hidrazina \"in vivo\". Células L 1210, catalase ou oxihemoglobina de rato foram capazes de formar radicais de carbono durante a oxidação da hidrazona do formaldeído. A oxidação da hidrazona do formaldeído pela catalase foi estudada \"in vítro\" e os radicais de carbono formados, identificados como radicais metila. A base modificada C8 -metil-guanina foi formada em animais expostos, como demonstrado por cromatografia líquida de alta eficiência associada à detecção eletroquímica, sugerindo que ocorreu alquilação do DNA por radicais metila durante a biotransformação da hidrazina \"in vivo\". / The production of carbon-centered radicais during hydrazine biotransformation \"in vivo\" was demonstrated by electron paramagnetic resonance ( EPR ) spin trapping technique. Rat red blood cells also oxidized hydrazine, forming carbon and nitrogen centered radicais, besides oxygen reactive speties. Ali these species, possibly formed \"in vivo\", are potentially harmful to macromolecules. For example, they can initiate secondary reactions in which the radicais from cell components are formed, as it occurred with hemoglobin, forming thiyl-hemoglobin radicais in the red blood cells treated with hydrazine. Carbon-centered radicais produced during the biotransformation of hydrazine in exposed animais must be derived from endogenous sources and may be directly or indirectly responsible for the modificaton ( alkylation ) of DNA bases \"in vivo\". The formaldehyde hydrazone is reported in the literature as an intermediate of hydrazine-induced alkylation \"in vivo\". L1210 cells, catalase and rat hemoglobin were able to produce carbon-centered radicais during the oxidation of the formaldehyde hydrazone. The oxidation of formaldehyde hydrazone by catalase was studied \"in vitro\" and the generated carbon-centered radicais were identified as methyl radicais. The modified base C8 -methylguanine was formed in exposed animais, as demonstrated by high performance liquid chromatography with electrochemical detection, suggesting that DNA alkylation by methyl radicais occurred during hydrazine biotransformation \"in vivo.\"

O estudo do processo da peroxidação de lipídios tem aumentado nos últimos anos, principalmente devido à implicação dos hidroperóxidos de lipídios (LOOH) em diversos processos patológicos. A decomposição destes LOOH é capaz de gerar subprodutos capazes de promover danos em biomoléculas, incluindo proteínas e DNA. No presente trabalho, utilizando hidroperóxidos de ácido linoléico isotopicamente marcado com átomo de oxigênio-18 (LA18O18OH), fomos capazes de demonstrar que estas moléculas gerararam oxigênio singlete marcado [18(1O2)] em células em cultura. A detecção de tal espécie foi possível através da utilização de uma nova metodologia utilizando um derivado antracenico. Para este propósito foi utilizado o derivado de antraceno 3,3\'-(9,10-antracenodiil) bisacrilato (DADB), cujo produto especifico da reação com o 1O2 (o endoperóxido do DADB DADBO2) do pode ser facilmente detectado por HPLC-MS/MS. De forma a expandir a compreensão dos efeitos tóxicos desses LOOH, investigamos o efeito destes compostos gerados intracelularmente. Para tal, foi utilizado o Rosa bengala (RB), um fotosensibilizador que tem afinidade por espaços apolares como membranas e lisossomos. A fotosenssibilização deste composto foi capaz de induzir a morte celular, e esta morte estaria relacionada a uma maior formação de 1O2 e a um maior acumulo de peróxidos. Nestes estudos foi possível demonstrar que carotenóides e sistemas antioxidantes dependentes de glutationa foram capazes de proteger contra os efeitos tóxicos da fotosensibilização na presença de RB. Adicionalmente foram avaliados os efeitos da hemoglobina (Hb) e do hidroperóxido do ácido linoléico (LAOOH) em uma série de parâmetros toxicológicos, como citotoxicidade, estado redox, a peroxidação lipídica e dano ao DNA. Nós demonstramos que a pré-incubação das células com Hb e sua posterior exposição à LAOOH (Hb + LAOOH) levou a um aumento na morte celular, a oxidação do DCFH, formação de malonaldeído e fragmentação do DNA e que esses efeitos estavam relacionados com o grupo peróxido e ao heme presentes na Hb. Foi demonstrado que as células incubadas com LAOOH e Hb apresentaram um nível maior das lesões de DNA; 8-oxo-7,8-diidro-2 \'desoxiguanosina e 1,N2-etheno-2\'-desoxiguanosina. Além disso, as incubações com Hb levaram a um aumento nos níveis de ferro intracelular, e este alto nível de ferro correlacionada com a oxidação do DNA, avaliadas através da medida de sitios EndoIII e Fpg sensíveis. Nossos resultados comprovam que os LAOOHs apresentaram efeito citotóxico e genotóxico, mesmo em concentrações muito baixas, podendo contribuir para o desencadeamento de processos patologicos como o câncer e doenças cardiovasculares e neurodegenerativas. / The study of the process of lipid peroxidation has increased in recent years, mainly due to the involvement of lipid hydroperoxide (LOOH) in a series of pathological processes. The decomposition of LOOH is able to generate products that can promote damage to biomolecules, including proteins and DNA. In the present work, using linoleic acid hydroperoxide isotopically labeled with 18O2 (LA18O18OH), we demonstrate that these molecules were able to generate labeled singlet oxygen [18(1O2)] in cultured cells. The detection of such species was possible using a new methodology using an anthracene derivative .For this purpose we used the anthracene derivative of 3,3\'-(9,10-antracendiil) bisacrilate (DADB), whose specific reaction product with 1O2 (DADB endoperoxide DADBO2) can be easily detected by HPLC-MS/MS. In order to expand the understanding of the toxic effects of LOOH, we investigated the effect of these compounds generated intracellularly. For this porpoise, we used Rose Bengal (RB), a photosensitizer that has affinity for apolar spaces such as membranes and lysosomes. The photosensitization of this compound was able to induce cell death, and this death was related to increased formation of 1O2 and a higher accumulation of peroxides. In these studies we have shown that carotenoids and glutathione-dependent antioxidant systems were capable of protecting against the toxic effects of photosensitization in the presence of RB. Additionally, we evaluated the effects of hemoglobin (Hb) and linoleic acid hydroperoxide (LAOOH) in a series of toxicological endpoints such as cytotoxicity, redox status, lipid peroxidation and DNA damage. We demonstrated that preincubation of cells with Hb and its subsequent exposure to LAOOH (Hb + LAOOH) led to an increase in cell death, DCFH oxidation, formation of malonaldehyde and DNA fragmentation, and that these effects were related to the peroxide and the heme group. It was demonstrated that cells incubated with LAOOH and Hb showed a higher level of the DNA lesions, 8-oxo-7,8-dihydro-2\'deoxyguanosine and 1,N2-etheno-2\'-deoxyguanosine. Furthermore, incubations with Hb led to an increase in intracellular iron levels, and this high level of iron correlates with the oxidation of DNA, measured as EndoIII and Fpg-sensitive sites. Our results show that the LOOHs showed cytotoxic and genotoxic, even at very low concentrations and may contribute to the onset of chronic malignancies like cancer, cardiovascular and neurodegenerative diseases.

Neste trabalho avaliamos a formação de oxigênio singlete in vitro em fagócitos, (células mononucleares e neutrófilos) isolados de sangue periférico humano, e eosinófilos, de lavado bronco alveolar de camundongos balb/c, ativados por estímulo partículado: zimosan opsonizado contendo o 9,10difenilantraceno (DPA) adsorvido como sonda captadora de 1O2. Por este método, a formação do 1O2 pode ser verificada pela formação do 9,10-difenilantraceno endoperóxido (DPAO2), que é detectado por HPLC. Observamos, que os fagócitos formam 1O2 e que esta formação parece ocorrer de forma diferenciada para os dois tipos celulares (neutrófilos e células mononucleares). Visando ampliar os estudos anteriores sobre o papel da melatonina (MLT) no processo inflamatório, foi testado seu efeito em fagócitos e a relação na produção de 1O2 destas células. Observamos que MLT inibe a formação de 1O2 totalmente no caso de neutrófilos e parcialmente no caso de células mononucleares e eosinófilos. Paralelamente, foi desenvolvida a síntese de um novo captador químico de 1O2, o éster 9,10-antracenil-3-bispropionato de etila (ABPE), cuja finalidade principal é o acúmulo no interior da célula, depois de sofrer hidrólise enzimática. Esta sonda, terá facil acesso ao interior das células em sua forma ester. Este novo captador de 1O2 foi testado em células mononucleares e neutrófilos estimulados de formas diferentes: via receptor independente e dependente. Os resultados demonstraram produção equivalente de 1O2 nestes fagócitos. / In this study, we evaluated the singlet oxygen (1O2) formation in vitro from phagocytes (neutrophils and mononuclear cells) isolated from human blood cells and eosinophils isolated from bronchoalveolar lavage fluid of mice balb/c activated, by opsonized zymosan. To determine whether singlet oxygen is produced by phagocytes, zymosan particles were coated with a specific chemical trap for 1O2, 9,10-diphenylanthracene (DPA). The production of 1O2 was followed using HPLC, to measure its product, 9,10-diphenylanthracene endoperoxide (DPAO2). We also noticed that the 1O2 production occurs at different levels of for two cell types, neutrophils and mononuclear cells. In order to broaden previous studies on the role of melatonin (MLT) in inflammatory processes, its effect was tested in phagocytes was tested in relation to 1O2 formation by these cells. We observed that MLT inhibits the 1O2 formation totallymt neutrophils and partiallym mononuclear cells and eosinophils. At the some time, it was also developed the synthesis of a new probe for 1O2, the 9,10-anthracene-bis-3-ethyl-propionate (ABEP), with the purpose to accumulate inside the cells, after its enzymatic hydrolysis. This probe presents easy acess to the inferior of the cells in its ester form. This new probe for trapping 1O2 was tested in mononuclear cells and neutrophils stimulated in two ways: via independent and dependent receptor. The results showed equivalent production of 1O2 for both cell types.

Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES / In aquatic organisms, changes in salinity in water provoke a variety of physiological responses, so this study aimed to evaluate the effect of water salinity on weight gain, survival and expression of the genes Catalase (CAT), Glutathione Reductase (GSR), Glutathione Synthase (GSS), Glutaione peroxidase (GPX), and heat shock protein (HSP70) in the liver of Nile Tilapia (Oreochromis niloticus). For the conduction of the experiment, 160 tilapias with a mean weight of 20.8 g ( ± 4.02) were used. The experiment was conducted in a completely randomized design (DIC) composed of four treatments and four replicates, being: T1 = Treatment 1 (salinity 0 + basal diet); T2 = Treatment 2 (salinity 7 + basal diet); T3 = Treatment 3 (salinity 21 + basal diet); T4 = treatment 4 (salinity 21 + diet with 1500 mg of vitamin C / kg of feed). The parameters of water quality were monitored daily and were kept within the range of comfort for the species. For the analysis of gene expression samples of liver of tilapia were collected in two distinct periods, 24 hours and 14 days after the beginning of the experiment. Gene expression quantification was performed by qRT-PCR. There was a significant effect of the treatments on weight gain, treatment 1 (4.10 g) and treatment 2 (6.42 g) had the highest weight improve. Animals from T4 had greater weight gain than animals from T3. Higher survival was observed in treatment 2 followed by control (T1). HSP 70 and GSS were more expressed in the 24 h period and GSRR was more expressed in the 14 day period, whereas CAT and GPX did not differ from one period to the other (P <0.05). The salinity variation had an effect under the expression of the genes evaluated in the liver of O. niloticus with the exception of catalase for the 24 hour period. After 14 days of evaluation, animals raised in salinity 21 and fed with vitamin C supplementation presented greater expression of GPX, GSR and GSS, suggesting that animals raised at this level of salinity had greater need of action of glutathione system, and that the supplementation of vitamin C under these conditions allowed greater expression of these genes. It was concluded that salinity had an effect on the expression of the antioxidant defense system genes evaluated, which varied considerably over the 24-hour period and presented a more defined pattern in the 14-day period. Supplementation of vitamin C contributed, in parts, for better development of tilapia created in salinity 21, which can be observed, through the results of weight gain and gene expression. / Em organismos aquáticos, mudanças de salinidade na água provocam uma variedade de respostas fisiológicas, assim, este estudo objetivou avaliar o efeito da salinidade da água sobre o ganho de peso, a sobrevivência e a expressão dos genes Catalase (CAT), Glutatona Redutase (GSR), Glutationa Sintetase (GSS), Glutationa peroxidase (GPX) e o da proteína de choque térmico (HSP70) no fígado de Tilápias do Nilo (Oreocrhomis niloticus). Para a condução do experimento foram utilizadas 160 tilápias com peso médio 20,8 g (± 4,02). O experimento foi conduzido em delineamento inteiramente casualizado (DIC) compostos por quatro tratamentos e quatro repetições, sendo: T1 = Tratamento 1 (salinidade 0 + dieta basal); T2= Tratamento 2 (salinidade 7 + dieta basal); T3= Tratamento 3 (salinidade 21 + dieta basal ); T4 = tratamento 4 (salinidade 21 + dieta com 1500 mg de vitamina C/ kg de ração). Os parâmetros de qualidade de água foram monitorados diariamente e se mantiveram dentro da faixa de conforto para a espécie. Para as análises de expressão gênica foram coletadas amostras do fígado de tilápias em dois períodos distintos, 24 horas e 14 dias após o início do experimento. A quantificação da expressão gênica foi realizada por qRT-PCR. Houve efeito significativo dos tratamentos sobre o ganho de peso, tilápias do tratamento 1 (4,10g) e tratamento 2 (6,42 g) obtiveram os maiores ganhos de peso. Animais do tratamento 4 (salinidade 21 + acréscimo de vitamina C na ração) tiveram maior ganho de peso que os animais do tratamento 3 (salinidade 21 + dieta basal). Maior sobrevivência foi observada no tratamento 2 seguido pelo controle. HSP 70 e GSS foram mais expressos no período de 24 h e GSR sendo mais expressa no período de 14 dias, enquanto que CAT e GPX não diferiram de um período para o outro. A variação de salinidade teve efeito sob a expressão dos genes avaliados no fígado de O.niloticus com exceção da catalase para o período de 24 horas. Após 14 dias de avaliação animais criados em salinidade 21 e alimentados com suplementação de vitamina C apresentaram maior expressão de GPX, GSR e GSS, sugerindo que animais criados nesse nível de salinidade, tiveram maior necessidade de ação do sistema glutationa, e que a suplementação de vitamina C nessas condições permitiu maior expressão desses genes. Conclui-se que a salinidade apresentou efeito sobre a expressão dos genes do sistema de defesa antioxidantes avaliados, os quais variaram bastante no período de 24 horas e apresentaram um padrão mais definido no período de 14 dias. A suplementação de vitamina C contribuiu em partes, para melhor desenvolvimento das tilápias criadas em salinidade 21, o que pode ser observado, pelos resultados de ganho de peso e expressão gênica.

Dissertação(mestrado) - Universidade Federal do Rio Grande, Programa de Pós-Graduação em Enfermagem, Escola de Enfermagem, 2004. / Submitted by eloisa silva (eloisa1_silva@yahoo.com.br) on 2012-10-30T15:02:04Z No. of bitstreams: 1 sirleikowalczyk.pdf: 1400137 bytes, checksum: 7de7324387ebf4609d3a0c201d4f3982 (MD5) / Approved for entry into archive by Bruna Vieira(bruninha_vieira@ibest.com.br) on 2012-11-22T16:07:49Z (GMT) No. of bitstreams: 1 sirleikowalczyk.pdf: 1400137 bytes, checksum: 7de7324387ebf4609d3a0c201d4f3982 (MD5) / Made available in DSpace on 2012-11-22T16:07:49Z (GMT). No. of bitstreams: 1 sirleikowalczyk.pdf: 1400137 bytes, checksum: 7de7324387ebf4609d3a0c201d4f3982 (MD5) Previous issue date: 2004 / A alimentação assume um papel determinante na saúde da população, principalmente quando os alimentos são empregados para prevenir ou tratar doenças. Neste trabalho investigou-se a utilização do mate (Ilex paraguariensis) e sua propriedade de antioxidante natural, como estratégia para promoção da saúde a partir de um estudo experimental. Foram utilizados 67 (sessenta e sete) ratos machos, da linhagem Wistar-FURG, distribuídos em dois grupos. Grupo I, com 40(quarenta) ratos adultos, subdivididos em quatro subgrupos (A, B. C, D), com 10 (dez) ratos em cada grupo respectivamente. O Grupo II, com 27 ratos velhos, subdivididos em três subgrupos (A, B, C), com 10 (dez, 7 (sete), 10 (dez) ratos em cada subgrupo, respectivamente. Os ratos adultos que receberam tratamento com um inibidor de NO-sintase (L-Name), que favorece o aparecimento de espécies reativas de oxigênio (radicais livres), foram submetidos ao extrato aquoso de Ilex paraguariensis, sendo evidenciado pelas provas bioquímicas e histológicas o efeito deletério do L-Name e a proteção celular realizada pelo extrato aquoso da Ilex paraguariensis. Os ratos velhos submetidos ao extrato aquoso da Ilex paraguariensis apresentaram também proteção celular hepática, com efeito antioxidante desta substância, bem como efeito hipoglicêmico nos ratos velhos quando tratados com o extrato aquoso da Ilex paraguariensis por um período mais longo, bem como com taxas reduzidas de triglicerídeos. Os resultados obtidos permitiram concluir que o hábito de utilizar a erva-mate, principalmente para realizar o chimarrão, pode trazer benefícios para a saúde de quem o consome, reforçando o papel de uma alimentação saudável, convergindo para a interação entre o ser humano, a promoção da saúde e o meio ambiente. / Feeding represents a determinant role in population health, especially when food is used to prevent or treat diseases. This work investigates the use of maté, or Paraguay tea (Ilex paraguariensis), and its natural anti-oxidant property as a healthpromotion strategy from an experimental study. Sixty-seven Wistar-FURG rats were used and distributed in two groups. Group I had forty adult rats, subdivided into four groups (A, B, C, and D), where each subgroup had ten rats. Group II had twentyseven old rats, subdivided into three groups (A, B, C) with ten, seven and ten in each subgroup, respectively. The adult rats that received treatment with a NO-synthase (LName), which favors the appearing of reactive oxygen species (free radicals), were afterwards submitted to an Ilex paraguariensis water extract. Biochemical and histological tests evinced both the harmful effect of L-Name and the subsequent cell protection caused by the Ilex paraguariensis water extract. The old rats submitted to the Ilex paraguariensis water extract also presented hepatic cell protection, with the antioxidant effect of this substance, as well as hypoglycemic in the old rats, when treated with Ilex paraguariensis water extract for a longer period, and reduced triglyceride ratios. Results allowed to conclude that the regional habit of having Paraguay tea may be beneficial for the consumer’s health, strengthening the role of a healthy diet, converging to interaction between the human being, health promotion and environment. / La alimentación tiene un rol determinante en la salud de la población, principalmente cuando los alimentos son empleados para prevenir o tratar dolencias. En este trabajo se ha investigado la utilización del mate (Ilex paraguariensis) y sus propiedades de antioxidante natural, como estrategia para la promoción de la salud a partir de un estudio experimental. Fueron utilizados 67 (sesenta y siete) ratones machos, de la linaje Wistar-FURG, distribuidos en dos grupos. Grupo I con 40 (cuarenta) ratones adultos, subdivididos en cuatro grupos (A, B, C, D), con 10 ratones en cada grupo respectivamente. Grupo II, con 27 (veinte siete) ratones viejos,subdivididos en tres subgrupos (A, B, C) con 10 (diez), 7 (siete), 10 (diez) ratones en cada subgrupo, respectivamente. Los ratones adultos que recibieron tratamiento con un inhibidor de NO-sintase (L-Name), que favorece el aparecimiento de especies reactivas al oxigeno (radicales libres), fueron sometidos al extracto acuoso de Ilex paraguariensis, siendo evidenciado por las pruebas bioquímicas e histológicas el efecto deletéreo del L-Name y la protección celular realizada por el extracto acuoso de Ilex paraguariensis. Los ratones viejos sometidos al extracto acuoso de Ilex paraguariensis presentaron también protección celular hepática, con efecto antioxidante de esta sustancia, bien como efecto hipoglicémico en los ratos viejos cuando tratados con el extracto acuoso de Ilex paraguariensis por un período más largo, bien como con las tasas reducidas de triglicéridos. Los resultados obtenidos permitieron concluir que el hábito del mate puede traer beneficios para la salud de quien lo consume, reforzando el rol de una alimentación saludable, convergiendo para la interacción entre el ser humano, la promoción de la salud y del medio ambiente.