Submitted by KELVIN FURTADO LIMA null (kelvinf.lima@hotmail.com) on 2016-05-02T17:44:44Z No. of bitstreams: 1 Dissertação - Kelvin.pdf: 3687789 bytes, checksum: d826d05398d0eb1bdb80f3a5d8770738 (MD5) / Approved for entry into archive by Felipe Augusto Arakaki (arakaki@reitoria.unesp.br) on 2016-05-04T18:32:33Z (GMT) No. of bitstreams: 1 lima_kf_me_araiq.pdf: 3687789 bytes, checksum: d826d05398d0eb1bdb80f3a5d8770738 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-05-04T18:32:33Z (GMT). No. of bitstreams: 1 lima_kf_me_araiq.pdf: 3687789 bytes, checksum: d826d05398d0eb1bdb80f3a5d8770738 (MD5) Previous issue date: 2016-04-15 / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq) / Os diferentes tipos de cânceres estão entre as principais causas de morbidade e mortalidade em todo mundo, contabilizando 8,2 milhões de óbitos no ano de 2012. Dentre eles, o câncer de pulmão é o mais recorrente, sendo que o subtipo denominado câncer pulmonar de células não-pequenas (non-small cell lung cancer – NSCLC) é diagnosticado em 85% dos casos. Dada a importância epidemiológica do câncer pulmonar, associado ao platô atingido pelos tratamentos com quimioterapia e radioterapia, novas estratégias terapêuticas têm sido buscadas e neste contexto, o peptídeo vasoativo Angiotensina-(1-7) [Ang-(1-7)] tem se mostrado bastante promissor. Além da participação em uma gama de processo fisiológicos no organismo, a Ang-(1-7) está sendo cada vez mais exploradas nos processos patológicos devidos suas funções vasodilatadora, anti-hipertensiva, anti-proliferativa e antitumoral. Outros estudos apontam ainda que uma melhor compreensão da regulação gênica nos processo tumorais poderia direcionar o desenvolvimento de outros métodos terapêuticos para o câncer de pulmão. Neste sentido, os microRNAs assumem posição ímpar por sua capacidade regulatória pós-transcriocional de vários genes, a citar o miR-21-5p superexpresso em vários tipos tumorais, incluindo o NSCLC. Portanto, o presente trabalho investigou os efeitos bioquímicos, moleculares e fisiológicos decorrentes do tratamento da linhagem celular tumoral A549 com Ang-(1-7), concomitantemente a análises comparativas dos efeitos da superexpressão do miR-21-5p nas células tumorais. Para isso foram utilizados os grupos celulares A549 controle e tratamento [10-7 M de Ang-(1-7)], e os clones A549-pEP-miR-Controle e A549-pEP-miR-21-5p. Análises bioquímicas mostraram que a presença do heptapeptídeo no grupo tratamento, e as condições de cultura dos clones estudados, causaram um aumento na síntese de lactato pelas células A549. Foi observado também que a Ang-(1-7) retarda o crescimento celular. Análises de expressão gênica não apontaram ativação do processo apoptótico em nenhuma das condições estudadas, entretanto o peptídeo Ang-(1-7) modula positivamente a expressão do gene tjp1 e negativamente a transcrição dos genes itgb8 e mmp-8, sugerindo que o tratamento celular com o heptapeptídeo fortaleça as interações celulares e dificulte os processo de migração e invasão celular. Estes dados são corroborados pelo ensaio de cicatrização da ferida o qual evidenciou que a Ang-(1-7) diminui a taxa de migração celular em comparação ao grupo controle. Por sua vez, a superexpressão do miR-21-5p intensifica consideravelmente a capacidade invasiva das células tumorais como observado no ensaio da gota de agarose. Conjuntamente, os resultados apontam para o potencial terapêutico da Ang-(1-7) no controle dos processos de adesão, migração e invasão celular, e corrobora o papel do miR-21-5p na evolução e intensificação dos processos tumorais. / The different types of cancers are among the leading causes of morbidity and mortality worldwide, accounting for 8.2 million deaths in 2012. Among them, lung cancer is the most frequent, and the subtype called non-small cell lung cancer (NSCLC) is diagnosed in 85% of cases. Given the epidemiological importance of lung cancer, associated with the plateau reached by chemotherapy and radiation therapies, new therapeutic strategies have been pursued and in this context, the vasoactive peptide Angiotensin-(1-7) [Ang- (1-7)] has shown quite promising. Besides participating in a range of physiological process in the body, Ang- (1-7) is being increasingly exploited in pathological processes due to its vasodilator, anti-hypertensive, anti-proliferative and anti-tumor functions. Other studies also indicate that a better understanding of gene regulation in tumor process could direct the development of other therapeutic methods for lung cancer. In this sense, microRNAs assume unique position due to its post-transcriocional regulatory capacity of several genes, for exemple the miR-21-5p upregulated in several tumor types, including NSCLC. Therefore, this study investigated the biochemical, molecular and physiological effects of Ang-(1-7) treatment on tumor cell line A549, concurrently to the comparative analysis of the effects of upregulation of miR-21-5p in tumor cells. In order to do this, the cell groups A549 control and treatment [10-7 M of Ang-(1-7)], and the A549-pEP-miR-control and A549-pEP-miR-21-5p clones were used. Biochemical analyzes showed that the presence of the heptapeptide in treatment group, and the culture conditions of the studied clones, caused an increase in lactate synthesis on A549 cells. It was also observed that Ang-(1-7) slows cell growth. Gene expression analysis showed no activation of apoptotic process in any of the conditions studied, though the peptide Ang-(1-7) positively modulates the expression of tjp1 gene and negatively the transcription of itgb8 and mmp-8 genes, suggesting that the cell treatment with the heptapeptide strengthen cell interactions and prevents cell migration and invasion. These data are corroborated by wound healing assay which showed that Ang-(1-7) decreases cell migration rate compared to the control group. In turn, the upregulation of miR-21-5p considerably enhances tumor cells invasiveness as observed in the agarose spot assay. Collectively, the results point to Ang-(1-7) therapeutic potential in controling cell adhesion, migration and invasion, and supports miR-21-5p role in the evolution and enhancement of tumor processes. / CNPq: 132514/2014-1

Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / The Renin-Angiotensin System (RAS) has been associated with various reproductive functions, including the ovulatory cascade. Unlike angiotensin II (AngII), the role of angiotensin-(1-7) [Ang-(1-7)] has not been characterized in the ovary of mono-ovulatory species. The objective of this study was to determine the Ang-(1-7) concentration in follicular fluid and Ang-(1-7)-related enzymes and MAS receptor mRNA expression during the ovulatory process in cattle. Forty cows were synchronized and those with follicular diameter ≥ 12 mm received GnRH analog (i.m.) to induce a LH peak and were ovariectomized at different periods (0, 3, 6, 12 and 24 h). Follicular fluid was stored to measure Ang-(1-7). Theca and granulosa cells were collected to evaluate gene expression by RT-qPCR assay. In a second experiment, the effect of Ang-(1-7) and A-779 (MAS receptor inhibitor) on the epiregulin mRNA expression by granulosa cells was evaluated in vitro. In the third experiment, the hypothesis that Ang-(1-7) is essential for ovulation was tested using an in vivo model by injecting A-779 intrafollicularly. Twenty synchronized cows were intrafollicularly injected with A-779 or saline 0.9% (control group) when the follicles reached a diameter of at least 12 mm and were challenged with an IM application of GnRH analogs. The levels of Ang-(1-7) increased in the follicular fluid at 24 h post-treatment (p < 0.05). Messenger RNA expression of MAS, ECA2, NEP and PEP was detected in theca and granulosa cells at all periods after GnRH injection. In granulosa cells, ACE2, NEP and PEP mRNA expression was regulated in different moments after GnRH treatment (p < 0.05). The addition of Ang-(1-7) or A-779 was not able to change the pattern of Ereg mRNA expression in our granulosa cell culture system. The intrafollicular application of A-779 (10-5M) did not block ovulation when performed before the expected peak of LH (100% of cows ovulated in treated and control groups). Differential expression of ACE2, NEP and PEP in granulosa cells and increased concentrations Ang-(1-7) next ovulation may indicate a role of this peptide in ovulation in cattle. / O Sistema Renina-Angiotensina (RAS) tem sido relacionado com diversas funções reprodutivas, incluindo a cascata ovulatória. Ao contrário da Angiotensina II (AngII), a função da Angiotensina-(1-7) [Ang-(1-7)] ainda não está caracterizada no ovário de espécies mono-ovulares como a bovina. Este estudo teve por objetivo determinar se os diferentes tipos celulares de folículos pré ovulatórios expressam o receptor MAS para Ang-(1-7) e a enzima conversora de angiotensina 2 (ECA2). Além disso, foi investigado se esses genes são induzidos por LH durante o processo ovulatório. Quarenta vacas foram sincronizadas e aquelas que alcançaram diâmetro folicular ≥ 12 mm receberam uma aplicação IM de GnRH e foram ovariectomizadas via colpotomia em diferentes momentos (0, 3, 6, 12 e 24 h) após o GnRH. O líquido folicular foi recuperado para dosagem de Ang-(1-7). As células da teca e da granulosa foram isoladas e submetidas à extração de RNA e transcrição reversa. A expressão relativa dos genes foi realizada por PCR em tempo real. Em um segundo experimento, utilizando um modelo in vitro de cultivo de células de folículos ≥ 12mm, buscou-se avaliar o efeito da Ang-(1-7) ou do bloqueio de seu receptor (MAS) na expressão de RNAm para epirregulina (Ereg). No terceiro experimento, utilizando o modelo de injeção intrafolicular in vivo, foi testada a hipótese de que Ang-(1-7) é essencial para a ovulação em bovinos. Vinte vacas foram sincronizadas e quando os folículos atingiram um diâmetro mínimo de 12 mm, receberam os tratamentos com A-779 (inibidor do receptor MAS) ou solução salina 0,9% (grupo controle) e foram no momento da injeção intrafolicular desafiados com uma aplicação IM de análogo de GnRH. Foi detectada a presença de Ang-(1-7) no líquido folicular, sendo que seus níveis foram constantes até 12 h após o GnRH e aumentando (P <0,05), às 24 h após o tratamento. A expressão de RNAm para MAS, ECA2, NEP e PEP foi detectada em células da teca e granulosa em todos os períodos após a aplicação de GnRH. A expressão de RNAm para ECA2, NEP e PEP, foi regulada nas células da granulosa em diferentes momentos após tratamento com GnRH (P <0,05). Folículos pré-ovulatórios possuem Ang-(1-7) no líquido folicular, bem como expressam RNAm para MAS, ECA2, NEP e PEP nas células da teca e granulosa durante o processo ovulatório. A suplementação com Ang-(1-7), ou o bloqueio de seu receptor nas doses utilizadas não foi capaz de alterar o padrão de expressão de RNAm para Ereg em nosso sistema de cultivo de pedaços de folículos ≥ 12 mm. A aplicação intrafolicular de A-779 (10-5 M) não bloqueou a ovulação quando realizada antes do início do pico esperado de LH (100% das vacas ovularam nos grupos A-779 e controle). A expressão diferencial das enzimas formadoras da Ang-(1-7) (ECA2, NEP e PEP) nas células da granulosa e o aumento nas concentrações Ang-(1-7) no líquido folicular próximos a ovulação podem indicar um papel desse peptídeo na ovulação em bovinos.

Precision agriculture, have a determinant role in the management of agriculture, has a direct effect in the reduction of production costs as the environmental impacts from the management of localized farming. The conservation of water and soil is of great importance to the management of water resources. Thus, this study aimed to analyze the system John Deere Surface Water Pro, as the best way to make the altimeter work, taking into account the routine of the property, as sowing and harvesting the rice paddy. Was also tested using the tool JD - APEX created in Software CAMPEIRO CR 7 for processing the data obtained in the field, together with John Deere APEX Software for managing soil water. JD Tool - APEX provides the functionality of converting the generated map in APEX shapefile of lines, which is subsequently used for the monitor John Deere 2630 GS3. The maps generated from the research were tested in the field and evaluated its power to identify whether the data collected in different studies may be used for water management in irrigated rice management. It was concluded that the tools created with few adjustments are appropriate and effective for the demarcation and establishment of contour lines for the management of water in irrigated rice. / A agricultura de precisão, tem hoje papel decisivo na gestão da agricultura, tem ação direta tanto na diminuição dos custos de produção quanto nos impactos ambientais a partir da gerenciamento localizada da lavoura. A conservação da água e do solo é de grande importância para a gestão dos recursos hídricos. Neste sentido, este trabalho teve como objetivo analisar o Sistema John Deere Surface Water PRO, quanto a melhor maneira de fazer o trabalho altimetrico, levando em consideração a rotina da propriedade, como semeadura e colheita em lavoura de arroz irrigado. Também foi testado a utilização da ferramenta JD - APEX criada no Software CR CAMPEIRO 7 para o processamento dos dados obtidos no campo, em conjunto com Software John Deere APEX para o gerenciamento da água no solo. A ferramenta JD APEX oferece a funcionalidade de conversão do mapa gerado no APEX em arquivo shapefile de linhas, que posteriormente é utilizado no monitor John Deere GS3 2630. Os mapas gerados a partir das pesquisas, foram testados a campo e avaliado seu potêncial visando identificar se os dados coletados em diferentes trabalhos, podem ser utilizadas para gerenciamento de água no manejo do arroz irrigado. Concluiu-se que as ferramentas criadas, com poucos ajustes, serão adequadas e eficientes para a demarcação e implantação de curvas de nível para o manejo da água na cultura do arroz irrigado.

This paper presents the structure and development of an online game that aims to be used as an educational support for teachers, students and other people interested in themes related to the History of Missions in Rio Grande do Sul. The game takes place inciting a critical assessment of their player, in a process where they can understand the history through its society and its cultural relations. This work was triggered by an investigation made in textbooks published by differentes editors in Brazil and in tests applied in competition of Prendas and Peões promoted by Gaucho Traditionalist Movement (MTG) that made us conclude that the history of the Jesuit Missions that unfolded in the territory where today is the Rio Grande do Sul (known as the history of "7 Missionarie People ") has been taught and played in a vulgar way, without exploring the cultural and social procedures which the history has. We demonstrate how we understand the missionary period, within the social relations developed, the specific cultural characteristics of the period, the human condition that pervade it and any historical moment. / Este trabalho apresenta a estrutura e desenvolvimento de um jogo online que visa ser utilizado como suporte didático para professores, alunos e interessados nas questões referentes à História das Missões no Rio Grande do Sul. O jogo transcorre instigando uma avaliação crítica do seu jogador, em um processo onde possa compreender a história através de sua sociedade e de suas relações culturais. Este trabalho surgiu em função de uma investigação feita em livros didáticos de diversas editoras que circulam pelo Brasil e em provas de concursos de prendas e peões promovidos pelo Movimento Tradicionalista Gaúcho, que nos fizeram concluir que a história das Missões Jesuíticas que se desenrolou no território onde hoje é o Rio Grande do Sul (conhecida como a história dos 7 Povos das Missões ) tem sido ensinada e reproduzida de forma vulgar e sem explorar os trâmites culturais e sociais do qual a história dispõe. Demonstramos a forma como compreendemos o período missioneiro, dentro das relações sociais desenvolvidas, das especificidades culturais que se fizeram características do período e das condições humanas que permeiam este e qualquer momento histórico.

Efter flertalet revisionsskandaler under åren har det blivit populärt att kritisera revisorn och ifrågasätta kvaliteten på den utförda revisionen. Revisorn har ett ansvar att informera om det finns väsentliga osäkerheter kring ett företags förutsättningar för fortsatt drift och att utfärda en fortlevnadsvarning innebär en hel del tuffa beslut och bedömningar. Dock finns det faktorer som kan påverka revisorns agerande så som revisorns närhet till klienten, byråtillhörighet och risken för rättsliga åtgärder. Tidigare studier har även visat på att det finns skillnader i revisionskvaliteten mellan män och kvinnor. Syftet med studien är att undersöka hur olika faktorer påverkar revisorns utfärdande av fortlevnadsvarning och därmed se vad det har för påverkan på revisionskvaliteten. Syftet är även att undersöka eventuella skillnader som finns i den svenska kontexten jämfört med tidigare studier i andra länder. För att undersöka sambandet genomfördes en kvantitativ studie där årsredovisningar och revisionsberättelser från svenska konkursdrabbade företag studerades. Studiens resultat visar på att det finns ett samband mellan finansiell stress och revisorns utfärdande av fortlevnadsvarning men dock gick det inte att påvisa något samband för variablerna kön, byråtillhörighet och ålder på företag. Resultatet visar även att revisionskvaliteten och utfärdandet av fortlevnadsvarningar i Sverige skiljer sig från andra länder. / After a numerous audit scandals over the years, it has become popular to criticize the auditor and question the audit quality. The auditor has a responsibility to inform if they have significant doubts about the continuity of a company. The issuing of a going-concern involves a lot of tough decisions and assessments for the auditor. However, there are factors that may affect the auditor’s actions such as the auditor’s closeness to the client, audit firm and the risk of legal action. Previous studies have also shown that there’s a difference in audit quality between men and women. The purpose with this paper is to study how different factors affect the auditor’s issuance of a going-concern and thus see how it affects the audit quality. The purpose is also to study any differences that exist in the Swedish context as compared to previous studies in other countries. To examine the relationship between going-concern and the variables, a quantitative study was conducted in which annual reports and audit reports from Swedish bankrupt companies were studied. The results of the study indicate that there is a relation between financial distress and a going-concern, but it was not possible to detect any relation to variables such as gender, audit firm and the age of the client. The result also shows that the audit quality and the issuance of a going-concern in Sweden differs from other countries.

Kungsängen är ett centralt beläget område i Uppsala. Området har stora mäktigheter av lera som når drygt 100 meters djup på sina håll. För att bygga på denna typ av jord måste långtidssättningar såsom konsolidering och krypning tas i beaktning. Att fastställa och beräkna krypningens storlek är dock svårt på grund av att det är en matematiskt komplicerad process. Det råder även oenigheter gällande när krypning inträder under sättningsförloppet samt gällande lämplig beräkningsmetod. För att erhålla en djupare förståelse för Kungsängslerans krypning samt för att finna en lämplig beräkningsmetod togs detta arbete fram i samarbete med Bjerking. Höjdavvägningar från dubbar och fixpunkter belägna i Kungsängen sammanställdes och resultaten visade att byggnader i Kungsängen som byggdes för 80–170 år sedan utsätts för krypning än idag. Medelvärdet av den relativa krypsättningen erhölls till 0,134 promille av lermäktigheten per år för dubbavvägningarna respektive 0,067 för fixpunktsavvägningarna. Ytterligare påvisade resultaten att både tid och lermäktighet var två drivande faktorer bakom Kungsängslerans krypning. Den europeiska standarden Eurokod 7 undersöktes för att finna förslag på beräkningsmetoder för krypning. Standarden hade dock inga konkreta förslag utan hänvisade till allmänt erkända metoder. Av denna anledning undersöktes tidsmotståndsteorin samt Chalmersmodellen med kryp. Tidsmotståndsteorin beräknade både realistiska och överskattade krypsättningar beroende på typ av lera. Vissa lerprover antydde att laster under cirka 45 kPa gav en försumbar krypning med andra lerprover indikerade annorlunda. Tidsmotståndsteorin har dock potential att vara en lämplig metod för beräkning av Kungsängslerans krypsättning. Chalmersmodellen med kryp tillämpades för att modellera ödometerförsök och resultaten visade att modellen generellt överskattade den totala deformationen och underskattade kryphastigheten. För att kunna förkasta eller verifiera modellen som lämplig vid beräkning av krypsättningar för Kungsängslera bör dock utförligare studier genomföras. / Kungsängen, a central area in Uppsala of Sweden, has a considerable depth of clay which stretches down to 100 m at some sites. In order to build at this type of soil one has to take long-term settlements into consideration, such as consolidation and creep. However, methods for calculating the latter aren’t straight forward since the mathematics behind the process is complicated. The starting time of creep is still unsettled and this is also the case regarding calculation methods. In order to enhance the understanding of creep of Kungsängen clay this study was developed in collaboration with Bjerking AB. Altimetry data from studs and fixed points from Kungsängen was compiled and the results showed that buildings in Kungsängen are experiencing creep even though some of them were built 80–170 years ago. The mean value of relative creep was found to be 0,134 per mille/year for the stud data and 0,067 per mille/year for fixed points. Another finding was that time and depth of clay were two factors behind the creep of Kungsängen clay. Another aim of the study was to investigate creep calculations methods in Eurocode 7. However, it was found that no method was proposed in the standard and therefore some other methods such as the time resistant theory and the Chalmer’s model with creep were investigated. It was found that the time resistant theory predicted creep realistically but with an overestimation in some cases, depending on the type of clay. Some clay specimen gave a negligible creep for loads under 45 kPa and other specimen indicated otherwise. All in all, this suggests that the time resistant theory might be an appropriate creep calculation method for the clay of Kungsängen. The Chalmer’s model with creep overestimated the total deformation but underestimated the creep when modelling odometer loads. Even so, the study of the model was not detailed enough in order to reject it or not. Therefore, a more detailed study of the model should be considered.

Submitted by Maike Costa (maiksebas@gmail.com) on 2017-07-10T12:16:42Z No. of bitstreams: 1 arquivototal.pdf: 1661395 bytes, checksum: 3b90c7dae81a55f752093bd4865ac20e (MD5) / Made available in DSpace on 2017-07-10T12:16:42Z (GMT). No. of bitstreams: 1 arquivototal.pdf: 1661395 bytes, checksum: 3b90c7dae81a55f752093bd4865ac20e (MD5) Previous issue date: 2016-03-04 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES / Conselho Nacional de Pesquisa e Desenvolvimento Científico e Tecnológico - CNPq / Serious infections caused by opportunistic fungal pathogens such as Candida genus, have been increasingly common in immunocompromised patients. The spread of drug-resistant fungi is one of the most serious threats to the successful treatment of fungal diseases, in addition, some drugs are very toxic, hindering adherence to therapy. In this context, the monoterpenes have stood out for having various pharmacological activities such as fungicide and bactericide. It also stands out the antioxidant activity of these compounds by being able to react and inactivate the different reactive species produced during a cellular oxidative stress. Based on this, the antifungal, cytotoxic and antioxidant effect of the monoterpenes (R)-(+)-citronellal (RC), (S)-(-)-citronellal (SC) and 7-hydroxycitronellal (7-OH) were studied. For the analysis of the antimicrobial potential of monoterpenes was used with the in silico analysis software Pass online. For the realization of antifungal studies used the microdilution test with different fungal strains of Candida for evaluation of minimum inhibitory concentration (MIC). In addition, it was determined the Minimum Fungicidal Concentration (MFC) for seeding on plates. In carrying out cytotoxicity studies and antioxidant was used human red blood cells obtained from the transfusion unit of the University Hospital Lauro Wanderley/UFPB. For the antioxidant studies used the techniques with phenylhydrazine and hydrogen peroxide. The study showed that the in silico monoterpenes RC, SC and 7-OH were more likely to be active in percentage, compared to fungal microorganisms. The antifungal activity of experiments revealed that the RC and SC monoterpenes promoted strong antifungal effect with MIC50 of 256 μg/mL for strains of Candida albicans and Candida tropicalis and fungicidal action for presenting CFM50 512 μg/mL. The monoterpene 7-OH showed strong antifungal effect for both strains of Candida albicans and for Candida tropicalis strains with MIC50 of 256 μg/mL and MIC50 512 μg/mL, respectively, and fungicidal action with CFM50 512 μg/mL and 1024 μg/mL. The monoterpenes RC, SC and 7-OH showed no oxidant opposite effect to human erythrocytes. Furthermore, the front monoterpenes had antioxidant effect against phenylhydrazine and hydrogen peroxide. RC analysis of cytotoxicity, SC and 7-OH front of haemolysis erythrocytes showed values below 25% for all blood types tested at a concentration of 256 μg/mL. Given these results, it was possible to infer that the stereoisomerism of RC and SC monoterpenes did not interfere in the tested activities. In conclusion, these results suggest that the RC, SC-OH and 7 show antifungal and antioxidant effect with low cytotoxic effect. / As infecções graves causadas por fungos patogênicos oportunistas, tais como do gênero Candida, têm sido cada vez mais comuns em pacientes imunocomprometidos. A disseminação de fungos resistentes aos medicamentos é uma das mais graves ameaças para o sucesso do tratamento das doenças fúngicas, além disso, algumas drogas são muito tóxicas, dificultando a adesão a terapêutica. Nesse contexto, os monoterpenos têm se destacado por apresentarem diversas atividades farmacológicas tais como: fungicida e bactericida, além da atividade antioxidante, por serem capazes de reagir e inativar as diferentes espécies reativas produzidas durante um estresse oxidativo celular. Com base nisto, foram estudados os efeitos antifúngico, citotóxico e antioxidante dos monoterpenos (R)-(+)-citronelal (RC), (S)-(-)-citronelal (SC) e 7-hidroxicitronelal (7-OH). Para a análise do potencial antimicrobiano dos monoterpenos foi utilizado a análise in silico com o software Pass online. Para a realização dos estudos antifúngicos utilizou-se o teste de microdiluição com diferentes cepas fúngicas do gênero Candida para avaliação da Concentração Inibitória Mínima (CIM). Além disso, determinou-se a Concentração Fungicida Mínima (CFM) por semeio em placas. Na realização dos estudos de atividade citotóxica e antioxidante utilizou-se hemácias humanas obtidas da unidade transfusional do Hospital Universitário Lauro Wanderley/UFPB. Para os estudos antioxidantes utilizou-se as técnicas com fenilhidrazina e peróxido de hidrogênio. O estudo in silico demonstrou que os monoterpenos RC, SC e 7-OH apresentaram uma maior probabilidade de serem ativos, expressa em porcentagem, frente aos microrganismos fúngicos. Os experimentos de atividade antifúngica revelaram que os monoterpenos RC e SC promoveram efeito antifúngico forte com CIM50 de 256 μg/mL para as cepas de Candida albicans e Candida tropicalis, bem como ação fungicida por apresentarem CFM50 512 μg/mL. O monoterpeno 7-OH apresentou forte efeito antifúngico tanto para as cepas de Candida albicans como para as cepas de Candida tropicalis, com CIM50 de 256 μg/mL e CIM50 512 μg/mL, respectivamente, bem como ação fungicida com CFM50 de 512 μg/mL e 1024 μg/mL. Os monoterpenos RC, SC e 7-OH não demonstraram efeito oxidante frente a eritrócitos humanos. Além disso, os monoterpenos apresentaram efeito antioxidante frente a fenilhidrazina e ao peróxido de hidrogênio. A análise da citotoxicidade de RC, SC e 7-OH frente a eritrócitos revelou valores de hemólise abaixo de 25% para todos os tipos sanguíneos testados, na concentração de 256 μg/mL. Diante desses resultados, foi possível inferir que a estereoisomeria dos monoterpenos RC e SC não interferiu nas atividades testadas. Em conclusão, estes resultados sugerem que o RC, SC e 7-OH apresentam efeito antifúngico e antioxidante, com baixo efeito citotóxico.

CAPES - Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / O câncer de mama é a neoplasia que mais acomete mulheres no mundo. Dentre os fatores prognósticos levados em consideração estão os receptores hormonais. O receptor de estrógeno beta (ERβ) é um dos receptores hormonais que pode ser encontrado na mama, mas que até então não é utilizado como um marcador preditivo de prognóstico tumoral por conta da sua ação paradoxal. Células tumorais de mama da linhagem MCF-7 foram utilizadas neste trabalho para averiguar a função dicotômica do ERβ no processo tumoral. De tal forma que foi avaliado alguns dos processos que são observados nas etapas do desenvolvimento do câncer de mama, como proliferação, transição epitélio-mesênquima (EMT) e investigação das células -tronco cancerosas (CSCs) . Para isso, foram utilizados o agonista de ERβ, Diarilpropionitrilo (DPN), o agonista ambíguo (ERα e ERβ) estradiol (E2) e o fator de crescimento transformante beta (TGF-β), indutor de EMT. As células que receberam tratamento com DPN obtiveram maior número de CSCs comparadas às que não foram cultivadas com esse agonista, resultado encontrado pela técnica de citometria de fluxo. As células que tiveram um tratamento prévio com TGF-β demonstraram menor taxa de proliferação e aumento na expressão de p21, uma proteína com ação bloqueadora de ciclina D1, cuja expressão ficou inalterada nos tratamentos com TGF-β e agonista de ERβ. A respeito dos genes relacionados a EMT (SLUG, SNAIL,VIMENTINA, ZEB1,TWIST1,RBFOX2,CICLINAD1 e p21), ERβ inibiu a expressão dos mesmos, sugerindo que esse receptor induza o fenômeno denominado transição mesenquimal epitelial (MET). Nesse cenário, DPN causou a diminuição da expressão de SLUG, SNAIL, TWIST, contrastando com a expressão obtida no tratamento com TGF-β que, além desses genes, também demonstrou aumento na expressão de ZEB1, RBFOX2 e vimentina. O efeito do TGF-β na EMT foi revertido ao associá-lo com DPN. Os dados corroboram com a literatura acerca do possível papel pró tumoral de ERβ no aumento da proliferação celular e da geração das células-tronco cancerígenas de mama (BSCs), além de ir ao encontro do fenótipo relacionado a MET nos tratamentos com DPN sozinho ou associado ao TGF-β. Com esses resultados, torna-se claro no nosso trabalho que dependendo o que é avaliado em relação a ação do ERβ, previamente tratado ou não com TGF-β, o seu efeito dicotômico ainda é observado. / Breast cancer is the most common neoplasm of women in the world. Among the prognostic factors taken into consideration are the hormonal receptors. The estrogen receptor beta (ERβ) is one of the hormone receptors that can be found in the breast, but is not used as a predictive marker of tumor prognosis due to its paradoxical action. Tumor cells of the MCF-7 lineage were used in this work to ascertain the dichotomic function of ERβ in the tumor process. Thus, we evaluated some of the processes that are observed in the stages of breast cancer development, such as proliferation, epithelial-mesenchymal transition (EMT) and cancer stem cell research (CSCs). For this, ERβ agonist Diarilpropionitrile (DPN), ambiguous agonist (ERα and ERβ) estradiol (E2) and transforming growth factor beta (TGF-β), inducer of EMT, were used. Cells receiving TGF- β treatment obtained a higher number of CSCs compared to those that were not cultured with this agonist, a result found by the flow cytometry technique. Cells that were pretreated with TGF-β demonstrated a lower rate of proliferation and increased expression of p21, a protein with cyclin D1 blocking action, whose expression was unchanged in TGF-β and ERβ agonist treatments. Regarding the EMT-related genes (SLUG, SNAIL, VIMENTINA, ZEB1, TWIST1, RBFOX2, CYCLINAD1 and p21), ERβ inhibited their expression, suggesting that this receptor induces the phenomenon called epithelial mesenchymal transition (MET). In this scenario, DPN caused a decrease in the expression of SLUG, SNAIL, TWIST, in contrast to TGF-β expression, which, in addition to these genes, also showed increased expression of ZEB1, RBFOX2 and VIMENTIN. The effect of TGF-β on EMT was reversed by associating it with DPN. The data corroborate with the literature about the possible ERβ pro-tumor role in increasing cell proliferation and the generation of breast cancer stem cells (BSCs), in addition to the MET related phenotype in treatments with DPN alone or associated to TGF-β. With these results, it becomes clear in our work that depending on what is evaluated in relation to the action of ERβ, previously treated or not with TGF-β, its dichotomous effect is still observed. / Dissertação (Mestrado)

Orientador: Ione Salgado / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-08-16T09:04:27Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Ferreira_PabloGomes_D.pdf: 2361486 bytes, checksum: bf9d8999e1dba8973f99ba609fa1a033 (MD5) Previous issue date: 2010 / Resumo: Embora as isoflavonas de soja naturalmente se acumulem nas formas glico- emalonil-conjugadas, os efeitos benéficos dos alimentos a base de soja para a saúde humana tem sido creditados às formas agliconas. O presente trabalho teve como objetivo desenvolver uma metodologia para produção de extratos de soja enriquecidos em isoflavonas agliconas e avaliar suas atividades na síntese e na degradação de óxido nítrico (NO) e na proliferação de células de adenocarcinoma de mama (MCF-7) cultivadas in vitro. O doador de óxido nítrico (NO), nitroprussiato de sódio (SNP), foi utilizado como agente indutor para o acúmulo de isoflavonas em sementes de soja, que foram identificadas e quantificadas por cromatografia líquida de alta eficiência e espectrometria de massas. O tratamento com SNP aumentou a síntese das isoflavonas agliconas de forma dosedependente. A produção relativa de formas agliconas foi de aproximadamente 75% nos exsudatos (solução indutora), em comparação com a extração feita apenas a partir somente dos tecidos (34%). Após tratamento com SNP, o exsudato do eixo embrionário acumulou a maior quantidade de isoflavonas livres (1,61 µg/mg) em relação ao cotilédone (1,1 µg/mg), enquanto que nos controles a produção total de isoflavonas foi de 0,3 µg/mg, sendo 95% nas formas conjugadas. Os extratos (350 µg) do eixo embrionário ou cotilédone enriquecido em agliconas, mas não os controles, estimularam a redução ácida do nitrito (determinada com eletrodo específico) levando à produção de 1,4 e 0,9 ?mol de NO em pH 2,0, valores que foram 8 vezes e 5,1 vezes maiores quando comparados à redução apenas na presença de 50 µM de nitrito. A atividade redutora de nitrito foi diminuída com a elevação do pH e estes resultados foram validados através da detecção de NO por quimiluminescência. As principais isoflavonas, livres ou conjugadas, identificadas nos extratos não estimularam a redução ácida do nitrito. Entretanto, foi observado que o tratamento com SNP também provocou o acúmulo de outros fenólicos, como os ácidos gálico, caféico e p-coumárico, que estimularam a redução ácida do nitrito. Em pH neutro os extratos apresentaram atividade sequestrante de NO sendo o de embrião novamente o mais ativo (0,85 ?mol de NO degradado/min), quando comparado com o cotilédone (0,24 ?mol/min) e com a degradação espontânea do controle (0,1 ?mol/min). Os extratos do eixo embrionário e do cotilédone apresentaram efeito bifásico dose-dependente na viabilidade e proliferação de células MCF-7. Nas doses menores (250-500 µg/mL) os extratos promoveram (10-25%) e em concentrações mais elevadas (750-1000 µg/mL) inibiram (15%) a proliferação celular. Na concentração de 500 µg/mL, o efeito proliferativo dos extratos foi revertido por nitrito (100 µM) em 34-36%. As doses mais elevadas dos extratos também estimularam a emissão de NO (detectado com um indicador fluorescente). O efeito bifásico foi atribuído à ação das isoflavonas agliconas em ativar os receptores estrogênicos e estimular a produção de NO, o que foi potencializado pelo nitrito. O conjunto dos resultados sugere que os extratos de soja enriquecidos em compostos bioativos interferem no metabolismo do NO e na proliferação de células de adenocarcinoma de mama / Abstract: Although soybean isoflavones naturally accumulate in their glyco- and malonylconjugated forms, the beneficial effects that soybean containing foods have on human health have been credited to their aglycones. This study aimed to develop a methodology for producing soybean extracts enriched with isoflavones aglycones and evaluate their activities in the synthesis and degradation of nitric oxide (NO) and proliferation of breast carcinoma cells (MCF-7) cultured in vitro. The nitric oxide (NO) donor, sodium nitroprusside (SNP), was used as a promoter for the accumulation of isoflavones in soybean seeds, which were identified and quantified by high performance liquid chromatography and mass spectrometry. SNP treatment increased the synthesis of the aglycone isoflavones in a dose-dependent manner. The relative production of aglycone forms was approximately 75% in the exudates (promoter solution), compared to the extraction made from only the tissues (34%). After treatment with SNP, exudate from the embrionary axis accumulated the largest amount of free isoflavones (1.61 µg/mg) compared to cotyledon (1.1 µg/mg), whereas in controls the total production of isoflavones was 0.3 µg/mg, with 95 % in conjugated forms. The extracts (350 µg) of embrionary axis or cotyledon enriched in aglycones, but not the controls, stimulated the acid reduction of nitrite (measured with specific electrode) leading to production of 1.4 and 0.9 ?mol of NO at pH 2, 0, values that were 8 times and 5.1 times higher when compared to the reduction only in the presence of 50 µM nitrite. The nitrite reduction activity was decreased with increasing pH and these results were validated by detection of NO by chemiluminescence. The main isoflavones, free or conjugated, identified in the extracts did not stimulate the acid reduction of nitrite. However, we observed that treatment with SNP also caused the accumulation of other phenolic compounds such as gallic, caffeic and p-coumaric acids, which stimulated the acid reduction of nitrite. At neutral pH extracts showed scavenging activity of NO and the embryo again was the most active (0.85 ?mol NO degraded/min) when compared to the cotyledon (0.24 ?mol/min) and to the spontaneous degradation of the control (0.1 ?mol/min). The embryo and cotyledon extracts showed dose-dependent biphasic effects on viability and proliferation of MCF-7 cells. At lower doses (250-500 µg/mL) extracts promoted (10-25%) and at higher concentrations (750-1000 µg/mL) inhibited (15%) cell proliferation. At 500 µg/mL, the proliferative effect of the extracts was reversed by nitrite (100 µM) in 34-36%. The higher doses of the extracts also stimulated emission of NO (detected with a fluorescent indicator). The biphasic effect was attributed to the action of isoflavone aglycones in activating estrogen receptors and stimulating the production of nitric oxide, which was increased by nitrite. Overall, the results suggested that soybean extracts enriched in bioactive compounds interfere with the metabolism of NO and the proliferation of breast adenocarcinoma cells / Doutorado / Bioquimica / Doutor em Biologia Funcional e Molecular

Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES / This research aims to study the lifecasting, especially one in which the lifecaster transmits your life uninterrupted, as an phenomenon of 24/7 conected society, such as Jonathan Crary (2014) understands and as technical mediation, intensified by the expansion of internet access, by increasing the connection speed, the cheapening of the cost of equipment, the use of mobile devices and a lot of surveillance practices that has been developing, particularly from the early 1980s. Undertaken a literature review, a web archival research (survey videos, testimonials and stories published about the pioneers in 24/7 lifecasting and his followers and the organization of a personal archive made up of recordings of broadcasts and prints chats) and questionnaires application to lifecasters and lifeviewers, we tried to draw a historical route and to identify the motivations that led them to this practice. The case study systematically accompanied the transmission of the three most important lifecasters of today (among those using the Portuguese, English and Spanish): the American Frank Taylor, the Danish Jan Billy and the Finn Ari Aarne Antero Kivikangas (Cyberman). The lifecasting was analyzed on the basis of four main axes: as a member of the 24/7 society, as a form of surveillance, spectacle of self and resistance. The reasons presented by lifecasters and lifeviewers are in line with current practices in the 24/7 connected society in which surveillance systems, exposure of personal life and the consumption habits have in lifecasting an extreme exemple. / A presente dissertação pretende estudar o lifecasting, transmissão contínua por vídeo através da internet, em especial aquele em que o lifecaster transmite a sua vida ininterruptamente, como fenômeno integrante da sociedade conectada 24/7, como a entende Jonathan Crary (2014), e como mediação sócio técnica, intensificada pela ampliação do acesso à internet, pelo aumento da velocidade de conexão, o barateamento do custo dos equipamentos, a utilização de dispositivos móveis e de uma série de práticas de vigilância que vem se desenvolvendo, particularmente, a partir da década de 1980. Através da pesquisa bibliográfica, da web archival research (com o levantamento de vídeos, depoimentos e matérias publicadas acerca dos pioneiros no lifecasting 24/7 e de seus seguidores e a organização de um arquivo pessoal composto por gravações de vídeos das transmissões e por prints de chats) e da aplicação de questionários a lifecasters e lifeviewers, procurou-se traçar um percurso histórico para identificar as motivações que os levaram a tal prática. O estudo de caso acompanhou sistematicamente a transmissão dos três mais importantes lifecasters da atualidade (dentre os que utilizam os idiomas português, inglês e espanhol): o americano Frank Taylor, o dinamarquês Jan Billy e o finlandês Ari Aarne Antero Kivikangas (Cyberman). O lifecasting foi analisado tomando como base quatro eixos principais: como prática integrante da sociedade conectada 24/7, como forma de vigilância, de espetacularização do eu e de resistência. As motivações apresentadas por lifecasters e lifeviewers encontram-se em consonância com as práticas correntes na sociedade conectada 24/7, na qual os sistemas de vigilância, a exposição da vida pessoal e os hábitos de consumo encontram no lifecasting um exemplo extremo.