O presente estudo foi conduzido com o objetivo de determinar se a sensibilidade do teste de Soroneutralização (SN) seria afetada quando utilizados distintos subtipos de herpesvírus bovino tipos 1 (BoHV-1) e 5 (BoHV-5). Dessa forma, soros de bovinos, coletados randomicamente (n= 287) foram testados por SN frente a três amostras de BoHV-1 (BoHV-1.1: EVI123/98 e Los Angeles (LA); BoHV-1.2a: SV265/96) e três amostras de BoHV-5 (BoHV-5a: EVI88/95; BoHV-5b: A663 e BoHV-5c: ISO 97/95), utilizando um período de incubação soro-vírus de 24 horas. A sensibilidade da SN variou significativamente dependendo da amostra viral utilizada. Esta variação foi de 77% (80/104 soros positivos) até 91% (95/104) com as amostras ISO 97/95 e LA, respectivamente, quando cada vírus foi considerado individualmente. A sensibilidade máxima (104/104) foi obtida quando os resultados positivos de uma combinação particular de quatro vírus (LA + EVI123 + SV265 + A663), algumas combinações de cinco vírus, ou ainda, todos os seis vírus foram adicionados. Estes resultados evidenciaram que quando a SN é realizada frente a uma única amostra viral, a sensibilidade pode variar significativamente, podendo comprometer programas de controle e erradicação das infecções por estes agentes. Além disso, a realização de SN frente a diferentes isolados virais mostrou aumentar significativamente a sensibilidade do teste. Com isso, a caracterização de novos isolados de campo pode favorecer futuras avaliações de diferentes subtipos de BoHV-1 e BoHV-5 e contribuir com a escolha de amostra e/ou combinação de amostras mais sensíveis. Deste modo, buscou-se caracterizar isolados de campo de BoHV-1 e BoHV-5 com base na análise molecular da região carboxi-terminal do gene que codifica a glicoproteína C (gC) e na análise com enzima de restrição (REA) do genoma viral. Para tanto, a multiplicação de 24 isolados da América do Sul foi realizada em células CRIB para posterior extração do DNA viral, PCR e sequenciamento. As seqüências foram alinhadas utilizando o programa ClustalX2 para uma inferência filogenética pelo método de Neighbor-Joining (Mega 4.0), Kimura 2-parâmetros. O alinhamento das seqüências de nucleotídeos revelou níveis de identidade variando de 70 a 99,6% entre os isolados de BoHV-1; de 66,9 a 100% entre os isolados de BoHV-5 e de 62,9 a 92,8% entre os isolados BoHV-1 e BoHV-5. A árvore filogenética mostrou o agrupamento dos vírus de acordo com o tipo (BoHV-1 e BoHV-5) e subtipo de BoHV-1 (BoHV-1.1 e BoHV-1.2). No entanto, essa técnica não permitiu a diferenciação dos isolados em diferentes subtipos de BoHV-5. Do mesmo modo, a análise por restrição enzimática não proporcionou uma clara diferenciação dos isolados em subtipos devido à presença de variações nos padrões de restrição. Somente um isolado (ISO 94/232) pode ser diferenciado como subtipo 5a. Todavia, este estudo mostrou que a análise filogenética utilizada representa uma potencial ferramenta para a diferenciação e classificação dos vírus em BoHV-1.1, BoHV-1.2 e BoHV-5. No entanto, ambas as técnicas podem ser empregadas, de maneira complementar, quando maiores informações sobre estes vírus forem requeridas. Além disso, com o presente estudo, foi possível expandir o número de amostras caracterizadas, fornecendo subsídios para estudos futuros. / This study was carried out to determine whether the sensitivity of serum neutralization (SN) tests would be affected by the use of distinct subtypes of bovine herpesvirus 1 (BoHV- 1) and 5 (BoHV-5) as test challenge viruses. Bovine sera collected from a randomized sample (n = 287) were tested in a 24 hour incubation SN against three type 1 viruses (BoHV-1.1 strains „„Los Angeles‟‟ (LA) and „„EVI 123‟‟; BoHV-1.2a strain „„SV 265‟‟) and three type 5 viruses (BoHV-5a strain „„EVI 88‟‟; BoHV-5b strain „„A 663‟‟ and BoHV-5c „„ISO 97‟‟). SN sensitivity varied greatly depending on the challenge virus used in the test, particularly when results against each virus were considered individually, where it ranged from 77% (detecting 80 out of 104 antibody-positive sera) to 91% (95/104) with ISO 97/95 and LA strain, respectively. Maximum sensitivity (104/104) was achieved when positive results to a particular combination of four of the challenge viruses (LA + EVI 123 + SV 265 + A 663) or some combinations of five viruses (or all six viruses) were added cumulatively. These results clearly shown that when SN is performed with single test challenge viruses, sensitivity could vary significantly that might compromise control or eradication efforts. Performing SN against a number of different viruses demonstrated to improve significantly the test‟s sensitivity. Thus, news field isolates characterization could aid future evaluations of different BoHV-1 and BoHV-5 subtypes and also provide the better strain and/or strains combination choice. In such case, this study aimed to characterize field isolates of BoHV-1 and BoHV-5 by molecular analyses of glycoprotein C (gC) carboxy-terminal region and viral genome restriction enzymatic analysis (REA). The 24 isolates from South America were propagated in CRIB cells for viral DNA extraction, PCR and sequencing. The sequences were aligned in ClustalX2 to perform a distance–based phylogenetic analysis by Neighbor-Joining method in MEGA 4.0 software under de Kimura 2-parameter. The nucleotide sequence alignments revealed levels of genomic similarity ranging from 70% to 99.6% between BoHV-1 isolates; from 67% to 100% among BoHV-5 isolates and from 63% to 93% between BoHV-1 and BoHV-5 isolates. The phylogenetic tree clustered the viruses according to types (BoHV-1 and BoHV-5) and BoHV-1 subtypes (BoHV-1.1, -1.2). However, this method did not allow clearly differentiated in BoHV-5 subtypes. Likewise, REA did not clear showed differentiation in subtypes due presence variation in restriction pattern. Only one isolate (ISO 94/232) could be differentiated in subtype 5a. The results suggest that the phylogenetic analysis performed could be an important tool for differentiation and classification of such viruses in BoHV-1.1, BoHV-1.2, BoHV-5. However, when adiccional informations were resquested both techniques should be performed. Furthermore, with this work it was possible to expand the number of samples characterized to support future investigation of these viruses.

Orientador: Silmara Marques Allegretti / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-08-17T21:52:47Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Barichello_FabianaFarinelloGrecco_M.pdf: 2472984 bytes, checksum: 2d89f144c96b66ee33bfdbb3f77ce1ee (MD5) Previous issue date: 2010 / Resumo: A Leishmaniose Visceral Canina, doença grave e fatal, tem o cão como o principal reservatório do seu agente etiológico no meio urbano. Devido ao alto parasitismo cutâneo nestes animais, da quantidade de cães infectados, e do próximo convívio com o homem, as ações desenvolvidas pelo Programa Brasileiro de Controle da Leishmaniose Visceral são centradas no reservatório canino, através da identificação e eutanásia dos animais soropositivos. Sendo assim, a adoção de ações profiláticas, com a utilização de vacinas nos cães, constituiria uma importante ferramenta para a diminuição da doença nestes animais, e consequentemente, da infecção do vetor e da transmissão do agente. Além disso, a adoção de medidas profiláticas, como o uso de coleiras impregnadas com deltametrina, repelentes de uso tópico e vacinas, são as únicas alternativas disponíveis atualmente para os cães, pois no Brasil, o tratamento de cães está proibido desde a publicação da Portaria Interministerial nº 1.426, de 11 de julho de 2008. Apesar de disponível desde 2004, a vacina Leishmune® ainda não é amplamente utilizada no Brasil, principalmente devido à possibilidade dos cães vacinados apresentarem sorologia positiva em inquéritos epidemiológicos, não sendo possível diferenciá-los dos infectados. Este trabalho foi realizado com o objetivo de avaliar o perfil sorológico de cães vacinados e saudáveis que residem em áreas endêmicas, e de cães naturalmente infectados por Leishmania infantum/ chagasi, e avaliar a possibilidade de diferenciação sorológica a partir dos métodos utilizados atualmente nos inquéritos epidemiológicos oficiais e nos laboratórios de diagnóstico particulares: ELISA e RIFI com antígenos L. major-like, produzidos pelo Laboratório Bio-Manguinhos e ELISA S7, produzido pelo Laboratório Biogene. Todos os soros de cães foram testados nos três métodos, e os resultados demonstraram que nenhum cão vacinado apresentou resultado positivo em mais de um teste. Apenas um cão vacinado (1/39) apresentou resultado de 1:40 na RIFI, e quatro cães (4/39) apresentaram resultado positivo no ELISA L. major-like. Nenhum soro de cão vacinado apresentou resultado positivo no ELISA S7. O único resultado positivo na RIFI foi negativo nos outros dois métodos, e os quatro soros positivos no ELISA L. major-like foram negativos tanto na RIFI quanto no ELISA S7. Estes resultados sugerem reações falso-positivas, e demonstram que, de acordo com o Manual de Vigilância Epidemiológica, se os soros de cães vacinados forem testados em dois métodos (ELISA e RIFI), a possibilidade de um cão vacinado apresentar resultado positivo será remota. Desta maneira, a vacinação da população canina não dificultaria as ações atualmente empregadas para o controle da Leishmaniose Visceral, mas poderia, no futuro, ser somada as medidas já adotadas, evitando assim a eutanásia de cães / Abstract: Canine Visceral Leishmaniasis, serious and fatal disease, has the dog as main reservoir of the agent Leishmania infantum in urban environment. The control actions developed by the Brazilian Program of Visceral Leishmaniasis Control are focused on the canine reservoir through identification and euthanasia of seropositive animals, due to high cutaneous parasitism in these animals, the amount of infected dogs and the closeness to the human being. Therefore, the adoption of prophylactic measures like dog vaccination would be an important tool to reduce the number of infected dogs and consequently the vector infection and the disease transmission. Besides that, the adoption of prophylactic measures in these animals, like the usage of deltametrin embedded collars, topic usage repellent and vaccines are the only available alternatives for these animals, since dogs treatment has been forbidden by law in Brazil since 2008. Although it has been available since 2004, the Leishmune® vaccine is not widely used in Brazil yet, especially due to the possibility of vaccinated dogs showing positive serology, being impossible to differentiate them from infected dogs. The objective of this work was to evaluate the serologic profile of healthy and vaccinated dogs who live in endemic areas and of naturally infected dogs with Leishmania Infantum/ chagasi, and also evaluate the possibility of serologic differentiation using the same methods nowadays adopted by official epidemiological surveys and in private diagnosis laboratories: ELISA and IFA with L. major-like antigens, produced by Bio-Manguinhos Laboratory and ELISA S7, produced by Biogene Laboratory. All the dogs sera were tested in the three methods, and the results showed that no vaccinated dog presented a positive result in more than one test. Only a vaccinated dog (1/39), presented 1:40 in IFA, and 4 dogs (4/39) presented a ELISA L. major-like positive result. No vaccinated dog sera presented positive result in ELISA S7. The only IFA positive result was negative in the other two methods and the four positive sera in ELISA L. major-like were negative either in IFA, as in ELISA S7. These results suggest false positive reactions and demonstrate that according to the Epidemiological Surveillance Manual, if the vaccinated dogs sera are tested in two methods (ELISA and IFA), the possibility of a vaccinated dog to present a positive result is remote. Thus, the vaccination of a big quantity of dogs would not disturb the presently adopted actions for Visceral Leishmaniasis control, but could in the future be added to the already adopted measures, therefore avoiding the dog's euthanasia / Mestrado / Parasitologia / Mestre em Parasitologia

Chagas disease is endemic in a region from Mexico to Argentina. In Brazil, chronic cases predominate with approximately two million infected individuals. Central nervous system involvement, triggering stroke in chagasic patients with myocardiopathy, has occurred in high incidence, usually due to cardiac emboli originating from apical aneurysm, mural thrombi and atrial fibrillation. However, the occurrence of stroke can also occur in individuals with Chagas disease (CD) even without a history of cardiopathy. This study aims to evaluate cerebral hemodynamics in individuals with serological diagnosis for CD through Transcranial Doppler(TCD) in the various chronic forms of the disease. A cross-sectional study was carried out in twelve settlements in the rural area of municipality of Umbaúba, State of Sergipe, where 617 individuals answered a questionnaire on socio-epidemiological conditions and collected blood sample for the performance of serology for Trypanosoma cruzi. There was a prevalence of 12.1% (75/617) of seropositivity for CD, 64% had a primary school level and 33.3% were illiterate, 78.7% worked in agriculture and 92% had a family income of up to one minimal salary. Of these seropositive individuals, 71 underwent clinical examination and electrocardiogram, echocardiogram, chest X-ray, and contrast-enhanced radiography of the esophagus and colon to determine the clinical form of CD. For the TCD, 96 individuals participated, 59 seropositive for CD and 37 seronegative. These individuals had a mean age of 54 ± 11 years and female sex in 62.5%. Among the chronic clinical forms of CD, 22 individuals were in the indeterminate, 17 cardiac, 16 cardiodigestive and 4 digestive forms. The values of mean velocity of the middle cerebral artery (MVMCA) and pulsatility index did not change in the individuals examined. Correlating the mean velocity of the middle cerebral artery with the age and clinical forms of Chagas disease and control, it was observed that in the cardiac and indeterminate forms and control there was a reduction of the MVMCA with the increase of the age in a similar way. However, with the cardiodigestive and digestive forms, the opposite occurred, increasing MVMCA with increasing age. No signs of microemboli were evident. The present study did not show alteration of the cerebral hemodynamics among the clinical chronic forms and control, probably due to individuals with CD being in a controlled phase of the disease, not presenting during the research symptoms or cardiac signals. / A doença de Chagas é endêmica numa região que abrange desde o México até a Argentina. No Brasil, atualmente predominam os casos crônicos com aproximadamente dois milhões de indivíduos infectados. O acometimento do sistema nervosa central, desencadeando acidente vascular cerebral (AVC) nos indivíduos chagásicos com miocardiopatia tem ocorrido em alta incidência, geralmente em decorrência de êmbolos cardíacos originados de aneurisma apical, trombos murais e fibrilação atrial. Entretanto, a ocorrência de AVC também pode advir de indivíduos com doença de Chagas (DC) mesmo sem história de cardiopatia. Este estudo tem por objetivo avaliar a hemodinâmica cerebral nos indivíduos com diagnóstico sorológico para DC por meio do Doppler Transcraniano (DTC) nas diversas formas crônicas da doença. Foi realizado um estudo transversal em doze povoados da zona rural do município de Umbaúba, Estado de Sergipe, onde 617 indivíduos responderam a um questionário sobre as condições sócio epidemiológicas e coletado amostra de sangue para realização de sorologia para Tripanosoma cruzi. Houve uma prevalência de 12,1% (75/617) de soropositividade para DC, 64% apresentavam nível de escolaridade primária e 33,3% eram analfabetos, 78,7% trabalhavam na lavoura e 92% tinham renda familiar de até um salário mínimo. Desses indivíduos soropositivos, 71 foram submetidos ao exame clínico e realização de eletrocardiograma, ecocardiograma, radiografia de tórax e radiografia contrastada de esôfago e cólon para determinar a forma clínica da DC. Para a realização do DTC, participaram 96 indivíduos, 59 soropositivos para DC e 37 soronegativos. Esses indivíduos tiveram uma média de idade de 54± 11 anos e sexo feminino em 62.5%. Dentre as formas clínicas crônicas da DC, 22 indivíduos estavam na forma indeterminada, 17 cardíaca, 16 cardiodigestiva e 4 digestiva. Os valores da velocidade média da artéria cerebral média (VMACM) e do índice de pulsatilidade não apresentaram alteração nos indivíduos examinados. Correlacionando a velocidade média da artéria cerebral média com a idade e as formas clínicas da doença de Chagas e o controle, foi observado que nas formas cardíaca, indeterminada e controle houve redução da VMACM com o aumento da idade de maneira semelhante. Entretanto com as formas cardiodigestiva e digestiva ocorreu o contrário, elevação da VMACM com o aumento da idade. Não foram evidenciados sinais de microêmbolos. O presente estudo não demonstrou alteração da hemodinâmica cerebral entre as formas crônicas clínicas e o controle, provavelmente em decorrência dos indivíduos com DC estarem numa fase controlada da doença, não apresentando durante a pesquisa sintomas ou sinais cardíacos. / Aracaju

Orientador: Sandra Cecilia Botelho Costa / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciências Médicas / Made available in DSpace on 2018-08-15T04:01:32Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Anjos_EmanuelBorgesVitor_M.pdf: 3213507 bytes, checksum: e3dcff33af728ca20ad8aaf6a15893b6 (MD5) Previous issue date: 2009 / Resumo: A infecção pelo HIV está entre as principais causas de inaptidão definitiva para doação de sangue. A dinâmica natural da epidemia do HIV no Brasil levou-nos a avaliar os subtipos presentes do HIV-1 em doações de sangue com infecção pelo HIV. Doadores de sangue representam um amplo e melhor corte transversal da população do que em grupos selecionados de alto risco e, portanto, podem fornecer uma visão mais ampla das cepas circulantes do HIV-1 no Brasil. Os números de indivíduos infectados e a importância da infecção pelo HIV tornam esse vírus um importante problema de saúde pública no Brasil. O objetivo deste trabalho é estudar a epidemiologia molecular do HIV-1 em candidatos a doadores de sangue da Fundação Hemope (Pernambuco), a partir da confirmação da infecção pelo HIV-1 de doadores com status sorológico positivo ou indeterminados pela Reação em Cadeia da Polimerase (PCR). Também avaliar a co-infecção do HIV-1 com outros patógenos que são avaliados na triagem sorológica. Dos 328 doadores de sangue com sorologia positiva ou inconclusiva coletados, foram confirmados 46 (14,02%) como positivos para HIV. Destas 46 amostras, foi possível realizar a subtipagem do HIV-1 em 40 amostras, sendo 35 (87.50%) amostras do subtipo B, 4 (10%) do subtipo C e 1 (2.50%) da forma recombinante CRF02_AG. Investigação por métodos moleculares indica ser decisiva na interpretação definitiva do diagnóstico para o HIV. Estudos de epidemiologia molecular do HIV-1 junto com o entendimento de sua biologia são necessários para estudar a dinâmica da infecção e para guiar políticas sanitárias para controlar a expansão do vírus e reduzir a incidência mundial da AIDS. / Abstract: HIV infection is among the leading causes of permanent disability for donation of blood. The natural dynamics of the HIV epidemic in Brazil has led us to evaluate the present subtypes of HIV-1 in blood donations with HIV infection. Blood donors represent a wide cross section of the population than selected groups of high risk and therefore may provide a broader view of circulating strains of HIV-1 in Brazil. The numbers of infected individuals and the importance of HIV infection make this virus an important public health problem in Brazil. The objective of this work is to study the molecular epidemiology of HIV-1 candidate in the blood donors of the Foundation Hemope (Pernambuco), from the confirmation of HIV-1 serological status of donors with positive or indeterminate by the Polymerase Chain Reaction (PCR). Also assess co-infection of HIV-1 with other pathogens that are evaluated in serological screening. Of the 328 blood donors with positive serology or inconclusive collected, 46 were confirmed (14.02%) as positive for HIV. Of these 46 samples, it was possible to subtyping of HIV-1 in 40 samples, and 35 (87.50%) samples of subtype B, 4 (10%) of subtype C and 1 (2.50%) of the form recombinant CRF02_AG. Research shows by molecular methods be decisive in the interpretation of the final diagnosis for HIV. Studies of molecular epidemiology of HIV-1 with the understanding of its biology are needed to study the dynamics of infection and to guide health policies to control the spread of the virus and reduce the incidence of AIDS worldwide. / Mestrado / Ciencias Basicas / Mestre em Clinica Medica

Introdução: O risco de transmissão de agentes infeciosos por transfusão sangüínea é maior nos países em desenvolvimento. A hemoterapia na América Latina, embora tenha conquistado grandes avanços tecnológicos e políticos nos últimos anos, ainda apresenta diversos problemas que comprometem a qualidade dos resultados dos testes de triagem sorológica de doadores. A confiabilidade dos resultados emitidos pelos laboratórios que realizam testes de triagem sorológica de bancos de sangue pode ser determinada através de programas de avaliação externa, utilizando multipainéis específicos. Objetivos: Objetivou-se produzir multipainéis específicos para programas de avaliação externa em testes de triagem sorológica de bancos de sangue e determinar a qualidade dos resultados obtidos em 21 centros de referência da América Latina. Resultados: A seleção criteriosa da matéria-prima e a caracterização das amostras foram etapas importantes na determinação das características dos soros que constituíram os Multipainéis. Foram analisados os resultados de 5 programas, realizados no período de 1997 a 2000. A média da taxa de resultados falso-negativos (RFN) foi de 0,7% para anti-HIV, 2,89% para HBsAg, 4% para anti-H Bc, 10,7% para anti-HTLVI/II, 1,07% para anti-HCV, 3,22% para doença de Chagas e 6,25% para Sífilis. A média da taxa de resultados falsopositivos (RFP) variou de 0,73% para doença de Chagas a 5,28 % para antiHCV. Os resultados foram analisados sob diversos prismas, o desempenho de cada centro de referência, a concordância nos resultados das amostras, os \"kits\" utilizados e os parâmetros. Conclusão: Um programa sistemático como o aqui apresentado mostrou pontos importantes dentro do processo de triagem sorológica e auxiliou a elucidar algumas causas de erros. Houve uma melhora gradativa na qualidade dos resultados obtidos nos programas, do ano de 1997 para 1999. Quanto maior a proporção de amostras positivas, maior é a chance de laboratórios cometerem erros, como foi observado no multipainel do quinto programa, que teve aumento da taxa de RFN e RFP, evidenciando a existência de falhas no processo. A participação contínua nesses programas pareceu ser importante para o monitoramento das atividades realizadas no processo de triagem sorológica de doadores. / Background: In developing countries, the risk of acquiring infectious disease through blood transfusion is higher than developed countries. Although in the last 10 years, blood safety has improved in Latin America in terms of technology and politics, several problems remained unsolved that compromise the quality of the results obtained by the laboratories that perform infectious diseases screening tests. Externai evaluation program, using specific multipanel, may be an important tool to evaluate a laboratory that perform serological screening tests. Externai quality control program for blood bank serological test had not been previously performed in Latin America. Objectives: To develop the technology to produce panel of sera reactive to blood born infectious diseases and to determine the quality of the results of 21 reference centers of Latin America. Results: The criteria to select the raw material and to characterize the sample were important to determine the overall quality of the pane!. Using the Multipanel, tive Externai Quality Control programs were organized during 1997 to 2000 with 21 reference laboratories in 16 countries in Latin America. The mean rate of the false negative results was 0,7% for ant-HIV test, 2.89% for HBsAg, 4% for ant-HBc, 10.7% for ant-HTLVI/II, 1.07% for ant-HCV, 3.22% for Chagas diseases, and 6.25% for Syphilis. The mean rate of false positive results varied from 0.73% for Chagas diseases to 5.28% to ant-HCV. The results were also analyzed in terms of performance of each reference center and by the manufacture of the kits used. Conclusion: The program could provide clues about sources of common errors and was an important tool to validate the laboratory screening processo The quality of the results improved from the 1 st to the 4th programo The chance of doing errors was higher, when the proportion of positive samples were higher, as observed in the 5th program that registered elevated index of false positive and false negative results. The continuing participation in this kind of program seemed to be important to monitor the activities performed by the blood bank screening laboratory.

Submitted by Cláudia Bueno (claudiamoura18@gmail.com) on 2016-05-12T19:22:49Z No. of bitstreams: 2 Dissertação - Horwald Alexander Bedoya Llano - 2015.PDF: 1452271 bytes, checksum: 8c74931380412669cdce1f30153c9558 (MD5) license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) / Approved for entry into archive by Luciana Ferreira (lucgeral@gmail.com) on 2016-05-13T11:44:03Z (GMT) No. of bitstreams: 2 Dissertação - Horwald Alexander Bedoya Llano - 2015.PDF: 1452271 bytes, checksum: 8c74931380412669cdce1f30153c9558 (MD5) license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-05-13T11:44:03Z (GMT). No. of bitstreams: 2 Dissertação - Horwald Alexander Bedoya Llano - 2015.PDF: 1452271 bytes, checksum: 8c74931380412669cdce1f30153c9558 (MD5) license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) Previous issue date: 2015-02-27 / Conselho Nacional de Pesquisa e Desenvolvimento Científico e Tecnológico - CNPq / Bovine neosporosis is a parasitic disease distributed worldwide, that causes large economic losses due to abortions, low milk production, neonatal mortality and repeated estrus. Because of the limited information from Colombia’s studies, we aimed to identify the risk factors associated with this infection and to determine its seroprevalence for Antioquia's east region, which is the largest milk producer state of the country. We collected 1,038 blood samples from Holstein, Jersey and crossbred cows from 31 farms in five municipal districts. An epidemiologic questionnaire was applied to the owner of each farm. For the determination of seropositivity we employed indirect ELISA and for titration of positive samples we used the indirect immunofluorescence assay test (cutoff ≥ 1:200). The soropositivity for N. caninum was estimated to be 28.32% (294/1038). All properties had at least one positive animal with frequencies of seropositivity ranging from 5.5% to 50%. Analysis of risk factors was performed by Chi-square test (X²) and multiple logistic regression. The presence of dogs, history of abortion, breed, age, replacement cattle purchase outside the farm, gestation, repetition of estrus, type of milking and the presence of chickens on farms showed significant association with seropositive animals by Chi-square test (X²=P<0.25) and were selected for a final multivariable logistic regression model where the history of abortion (OR = 5.33, p <0.001), age (OR = 1.7, p = 0.038), replacement cattle purchase outside the farm (OR = 1.54 p = 0.008) and manual milking (OR = 1.69, p = 0.0029) were identified as risk factors. These findings record the first report of seroprevalence and risk factors for the region and allow us to conclude that N. caninum is widely distributed in the evaluated properties and significantly associated with these factors. / A neosporose bovina é uma enfermidade parasitária de ampla distribuição mundial, causa de grandes perdas econômicas por abortos, baixa produção de leite, mortalidade neonatal e repetições de serviços. Devido a pouca informação que se tem na Colômbia, objetivou-se identificar os fatores de risco associados à infecção e determinar a sua soroprevalência para a microrregião do leste de Antioquia, que é o Estado de maior produção leiteira do país. Coletaram-se 1.038 amostras de sangue de fêmeas bovinas das raças Holandesa, Jersey e mestiça provenientes de 31 fazendas em cinco municípios. Um questionário epidemiológico foi aplicado ao proprietário de cada fazenda. Para a determinação do soropositividade foi empregado o teste de ELISA indireto (Civtest®) e para titulação das amostras positivas foi empregado o teste de reação de imunofluorescência indireta (ponto de corte ≥ 1:200). A ocorrência total de anticorpos anti-N. caninum foi de 28,32% (294/1038). Cem por cento das propriedades apresentaram ao menos um animal positivo com frequências de soropositividade variando entre 5,5% a 50%. A análise dos fatores de risco foi realizada pelo teste de Quiquadrado (X²) e regressão logística múltipla. A presença de cães, histórico de abortos, raça, idade, compra de animais para reposição, período de gestação, repetição de cios, tipo de ordenha e presença de aves nas fazendas demonstraram associação significativa com animais soropositivos pelo teste Qui-quadrado (X²=P<0,25) e foram selecionadas para um modelo final de regressão logística multivariável onde o histórico de abortos (OR=5,33;p<0,001), idade (OR=1,7;p=0,038), compra de animais para reposição (OR=1,54;p=0,008) e ordenha manual (OR=1,699; p=0,0029) foram identificados como fatores de risco. Esses achados registram o primeiro relato de fatores do risco e soroprevalência para a região e permitem concluir que N. caninum está amplamente distribuído nas propriedades avaliadas e significativamente associado a esses fatores.

Submitted by Luciana Ferreira (lucgeral@gmail.com) on 2017-05-17T12:31:09Z No. of bitstreams: 2 Dissertação - David Antonio Costa Barros - 2017.pdf: 4071063 bytes, checksum: ddb294c71acfa6cbe5dc316e1b8f74ec (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) / Approved for entry into archive by Luciana Ferreira (lucgeral@gmail.com) on 2017-05-17T12:31:41Z (GMT) No. of bitstreams: 2 Dissertação - David Antonio Costa Barros - 2017.pdf: 4071063 bytes, checksum: ddb294c71acfa6cbe5dc316e1b8f74ec (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) / Made available in DSpace on 2017-05-17T12:31:42Z (GMT). No. of bitstreams: 2 Dissertação - David Antonio Costa Barros - 2017.pdf: 4071063 bytes, checksum: ddb294c71acfa6cbe5dc316e1b8f74ec (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Previous issue date: 2017-03-15 / This study aims at assessing the risk of Chagas disease transmission in two risk endemic Municipalities after the local implementation of Triatoma infestans Eradication Program (PETI). To that end, a epidemiological, entomological and serological assessment of PETI was carried out in loco in the Municipalities researched. In the epidemiological context of Chagas disease, according to serological investigation conducted in 1980, seroprevalence amongst the population researched was around 0,82% in São Luís dos Montes Belos (SLMB) and 2,35% in Novo Brasil (NB). At present, a serological survey is underway in the region. In the first stage of serological investigation, about to be concluded, samples from 103 children residing in Novo Brasil rural area and from 303 children residing in São Luís dos Montes Belos rural area were collected on filter paper, and the results were negative; later, 60 test-tube samples were collected in both Municipalities for performing more specific techniques. The domiciliary infestation index in SLMB (rural area) raised from 8,80% to 10,6% (2004-2005), and from 0,84% (2004) to 0,39% (January-July 2005) in NB (rural area). The population under contagion risk is around 4109 inhabitants in SLMB and 1153 inhabitants in NB, due to the presence of vectors. Endemic zones are concentrated in rural area, where potential vectors such as Triatoma sordida are found (around 90% of the species captured in SLMB and 50% in NB in 2005). Health education is jointly conducted in São Luís dos Montes Belos and Novo Brasil by the National Health Foundation (FUNASA), the Family Health Program (PSF) and both Municipal Secretariats of Education, by means of expositions, consultations and the Minimum Surveillance Unit (UMV), which is also applied in the indoor detection of traces of Triatominae. In conclusion, the control of Chagas disease transmission lies on the joint effects of seroepidemiological surveillance, continuous sprinkling of residual insecticides and the implementation of housing improvement program in endemic areas, as well as the continuance and strengthening of Health Education efforts through Family Health Program (PSF). / A doença de Chagas transmitida pelo Trypanosoma cruzi (Chagas, 1909) era uma enzootia restrita ao ambiente silvestre (mamíferos e triatomíneos em perfeito equilíbrio). No Brasil, há evidências de que a doença humana surgiu após seu descobrimento, embora tenha sido encontrada uma múmia datada de ± 1200 anos. O relato mais antigo de triatomíneos (também chamados de “vinchuca”) no Brasil foi feito pelos jesuítas (1590). Sua introdução ocorreu possivelmente através da Argentina ou Uruguai. O “engasgo” (megaesôfago) e a “hidropsia” (constipação) (Saint-Hilaire, 1819; Longgaard, 1865) já existiam endemicamente no interior de Goiás e Minas Gerais. Embora a doença de Chagas tenha sido descoberta em 1909, somente a partir de 1960 seu controle foi pensado de forma profissional. Entretanto, efetivamente, apenas a partir de 1970 foram dados os primeiros passos com essa finalidade. Portanto, as medidas de controle devem dirigir-se à eliminação desses insetos do ambiente humano. Das mais de 120 espécies conhecidas, 48 foram identificadas no Brasil, das quais 30 já foram capturadas no ambiente domiciliar. Em Goiás, com a finalidade de realizar um estudo clínico-epidemiológico da doença de Chagas, em áreas onde a espécie vetora era o Triatoma infestans, foi montado o Projeto Mambaí. Iniciado em 1974, com o estudo eco-epidemiológico da região. Posteriormente, em 1979, após o levantamento triatomínico e devido ao requerimento do Projeto, foi solicitada a colaboração da SUCAM/ Ministério da Saúde, que forneceu apoio e infra-estrutura para a implementação de um sistema de controle e vigilância da doença de Chagas (ZAPATA, 1990). Hoje, com a estratégia de monitoramento entomológico, ações de combate utilizando inseticidas específicos, assim como as melhorias habitacionais realizadas nas áreas endêmicas, a doença encontra-se sob controle de acordo com o certificado da OMS, mas o risco de transmissão continua. No contexto epidemiológico da doença, Goiás ocupava a terceira colocação pelo inquérito nacional realizado em 1980. Com a implantação do Programa de Eliminação do Triatoma infestans em 1992, que é um projeto que faz parte do Programa de Controle da Doença de Chagas no Estado de Goiás, o índice de 7,4% de prevalência da doença, caiu consideravelmente e hoje o principal vetor não é detectado ou é encontrado em índices muito baixos em alguns municípios do Estado. No contexto epidemiológico da doença de Chagas, conforme o inquérito sorológico realizado em 1980, em São Luís dos Montes Belos (SLMB) a soroprevalência estava em torno de 0,82% e em Novo Brasil (NB) em torno de 2,35% dos pesquisados. O levantamento sorológico em escolares nascidos após a fase de controle nas regiões mostrou nenhuma delas estava com sorologia positiva para a moléstia. Nas 236 Unidades Domiciliares pesquisadas (150 em São Luís dos Montes Belos e 86 em Novo Brasil), todas infestadas por triatomíneos e nenhum triatomíneo capturado positivo para Trypanosoma cruzi. O objetivo deste estudo foi avaliar o risco de transmissão da doença de Chagas em dois municípios endêmicos de risco após a implantação do Sistema Único de Saúde (SUS). Para tal, foi realizado in locus uma avaliação sorológica, entomológica e epidemiológica do Programa de Erradicação do Triatoma infestans (PETI) nos municípios pesquisados. Os objetivos deste trabalho foram determinar o nível de conhecimentos, atitudes, práticas da população sobre o controle da doença de Chagas e seus vetores em uma população de crianças em fase escolar de uma zona endêmica dos municípios de risco em Goiás, Brasil. Através deste pretende-se implantar medidas alternativas de controle e vigilância e justificar a implantação das Unidades de Vigilância Longitudinal, para um combate mais abrangente da doença de Chagas no Estado. Apesar do controle do Triatoma infestans existe o considerável aumento dos vetores secundários como o Triatoma sordida, merecendo constante estado de Vigilância epidemiológica dentro do contexto do atual Sistema Único de Saúde (SUS) e da sua potencial inserção na rotina do Programa de Saúde da Família.

Em 2005 o primeiro caso de Febre Maculosa Brasileira (FMB) foi reconhecido no estado do Rio Grande do Sul (RS), Brasil. Desde então até abril de 2016 doze casos foram confirmados, sendo que quatro destes são autóctones do município de Cerro Largo, área considerada endêmica para a enfermidade riquetsial. Neste mesmo período o RS também notificou 58 casos suspeitos ao Ministério da Saúde. No RS são encontrados dois biomas, Mata Atlântica e Pampa, este último não ocorrendo em outras unidades federativa do país. Até o momento, inexistem estudos relatando a infecção por riquétsias na ixodofauna gaúcha. Desta forma, o presente estudo teve como objetivo pesquisar a infecção de riquétsias do Grupo da Febre Maculosa (GFM) em cães, pequenos mamíferos e carrapatos; através da Reação de Imunofluorescência Indireta (RIFI), qPCR e tentativa de isolamento de riquétsias em cultivo celular dos ixodídeos coletados em área endêmica (Cerro Largo) e áreas não endêmicas nos biomas Pampa e Mata Atlântica no RS. Na sorologia (RIFI), 33,5 % (55/164), 2,9% (1/33), 40% (16/40) dos pequenos mamíferos e 8,3% (3/36), 13,9% (5/36) e 20,4 (28/137) dos cães coletados na Mata Atlântica, Pampa e área endêmica para FMB, respectivamente, foram sororreagentes para pelo menos um dos seis antígenos de riquétsias testados. Oito espécies de carrapatos foram coletadas no local de Mata Atlântica, sendo: Amblyomma aureolatum, Amblyomma brasiliense, Amblyomma incisum, Amblyomma ovale, Haemaphysalis juxtakochi, Ixodes loricatus, Rhipicephalus microplus e Amblyomma yucumense com destaque para esta última que foi descrita como uma espécie nova. Já para o fragmento de Pampa quatro espécies foram encontradas (A. aureolatum, A. ovale, Amblyomma tigrinum e Rhipicephalus sanguineus) e na área endêmica para FMB no RS, coletamos cinco espécies de carrapatos, Amblyomma dubitatum, Amblyomma longirostre, A. ovale, I. loricatus e R. microplus. Detectamos molecularmente pela primeira vez no RS, Candidatus Rickettsia amblyommii em A. longirostre e A. brasiliense, Candidatus Rickettsia andeanae em A. aureolatum e A. tigrinum, Rickettsia bellii em I. loricatus, Rickettsia rhipicephali em A. yucumense e H. juxtakochi, Candidatus Rickettsia asemboensis em pulgas no Brasil e de extrema importância para o conhecimento da epidemiologia da FMB no RS, detectamos Rickettsia sp. cepa Mata Atlântica em A. ovale oriundos de Cerro Largo (área endêmica para FMB no RS). Como primeiros isolamentos de riquétsia para o estado do RS, isolamos R. bellii de I. loricatus coletados na Mata Atlântica e área endêmica para FMB no RS. O presente estudo é pioneiro em relação a investigação comparativa sobre FMB nos biomas Pampa e Mata Atlântica e também o primeiro estudo molecular e isolamento de riquétsias em cultivo celular de amostras coletadas no RS, Brasil / In 2005 the first Brazilian Spotted Fever (BSF) case was confirmed in the Rio Grande do Sul (RS) state, Brazil. Ever since until April 2016, twelve cases have been confirmed, and four of them are native from Cerro Largo city, an area considered endemic to the riquetsial illness. During the same period, RS also notified 58 suspected cases to the Ministry of Health. There are two distinct biomes in RS, Atlantic Forest and Pampa, the later restricted to RS within the Brazilian land. Until now, no studies reported rickettsial infection in the ixodofauna of RS. Thus, this study aimed to investigate the rickettsial infection of Spotted Fever Group (SFG) in dogs, small mammals and ticks; by immunofluorescence assay (IFA), qPCR and attempted rickettsial isolation in cell culture from ticks collected in an endemic area (Cerro Largo) and non-endemic areas in Pampa and Atlantic Forest biomes of RS. Through serology (IFA), 33.5% (55/164), 2.9% (1/33) and 40% (16/40) small mammals, and 8.3% (3/36), 13.9 % (5/36) and 20.4 (28/137) dogs from the Atlantic Forest, Pampa, and BSF-endemic area, respectively, were seroreactive (titer &ge;64) to at least one of the six rickettsia antigens tested. Eight species of ticks were collected in the Atlantic Forest: Amblyomma aureolatum, Amblyomma brasiliense, Amblyomma incisum, Amblyomma ovale, Haemaphysalis juxtakochi, Ixodes loricatus, Rhipicephalus microplus and Amblyomma yucumense, the later described as a new species. In the Pampa fragment, four tick species were found (A. aureolatum, A. ovale, Amblyomma tigrinum and Rhipicephalus sanguineus), and five tick species (Amblyomma dubitatum, Amblyomma longirostre, A. ovale, I. loricatus, R. microplus) in the BSF-endemic area of RS. We performed the first molecular detection in the RS state of &quot;Candidatus Rickettsia amblyommii&quot; in A. longirostre and A. brasiliense; &quot;Candidatus Rickettsia andeanae&quot; in A. aureolatum and A. tigrinum; Rickettsia bellii in I. loricatus; Rickettsia rhipicephali in A. yucumense and H. juxtakochi; and &quot;Candidatus Rickettsia asemboensis&quot; in fleas in Brazil. Noteworthy, we detected the pathogen Rickettsia sp. strain Atlantic rainforest in A. ovale ticks from Cerro Largo (endemic area for BSF in RS). We also performed the first isolation in cell culture of rickettsia from RS state, which comprised R. bellii from I. loricatus collected in the Atlantic Forest and the BSF-endemic area. This study is the first comparative research about rickettsiae among Pampa and Atlantic Forest biomes, and also the first molecular detection and isolation in cell culture of rickettsiae from Rio Grande do Sul, Brazil

A sífilis adquirida e a congênita continuam aumentando e preocupando as autoridades sanitárias do mundo, ao verem que as metas estabelecidas para o seu controle estão longe de serem atingidas. Apesar dos esforços feitos na descoberta de novas ferramentas para o diagnóstico e monitoramento da sífilis, vemos um despreparo muito grande, principalmente entre os laboratoristas, em processar corretamente os reagentes disponíveis e melhor selecionar aqueles que apresentem qualidade para serem usados na rotina do laboratório. O que constatamos neste estudo é um espelho da realidade do diagnóstico da sífilis e mostra a dificuldade que os clínicos enfrentam ao receberem um laudo do laboratório. Trabalhando em colaboração com diferentes serviços e grupos de pesquisa, selecionamos aqueles que trabalhavam com: gestantes atendidas no pré-natal, doadores de sangue, pacientes infectados pelo HIV e pacientes de laboratório clínico e fizemos um estudo crítico da sorologia utilizada em cada serviço. Verificamos discrepância dos resultados obtidos nos testes não-treponêmicos VDRL e RPR, principalmente entre os soros de baixa reatividade, e nos treponêmicos FTA-abs, TPHA e ELISA. Decidimos aplicar o método de Western blotting e analisar o seu comportamento em todas as amostras de soros ensaiadas. Para obtenção de resultados reprodutíveis, fizemos a industrialização do método e formatamos um reagente na forma de um kit diagnóstico, WB Tp-IgG, que pudesse ser facilmente utilizado e interpretado. Os resultados obtidos mostraram que o WB Tp-IgG pode ser utilizado como método confirmatório da sífilis, substituindo o FTA-abs, tradicionalmente recomendado para essa finalidade e que pudesse fazer parte de uma proposta de algoritmo para o diagnóstico sorológico da sífilis. / Acquired and congenital syphilis have been increased and worried the worldwide health authorities, mainly because the WHO targets for syphilis control are far from to be held. Much effort had been made for development of new tools to be used in syphilis diagnosis and following up, however we noticed a lack of ability of laboratory workers in the correctly choosing and using the reagents in laboratory routine. In this study what we observed were the reality of syphilis diagnosis and the difficulties that physicians have in how to procedure when they received the results from the laboratory. Working in collaboration with different settings and research groups we choose some of them that attend pregnant women, blood donors, HIV patients and patients from clinical laboratory. With these group individuals we made a critical study of the serology methods used in each one. We verified high level of discordant results between nontreponemal tests VDRL and RPR, mainly in serum samples with low reactivity and between treponemal tests FTA-abs, TPHA and ELISA, in all services. To obtain reproducibility of the results we made the industrialization of the method and set up a reagent as a kit diagnosis, easily to performer. Appling the western blotting method we evaluated the performance of the test in all sera samples assayed. The results showed that the WB Tp-IgG can be useful as confirmatory test for syphilis, replacing FTA-abs, traditionally recommended for this and that could be included in algorithm propose for serological diagnosis of syphilis.

O cão (Canis familiaris) é o principal reservatório de Leishmania (Leishmania) infantum. Sua alta competência em transmitir o parasito para o inseto vetor contribui para a manutenção do ciclo e aumento do risco para os humanos em áreas endêmicas. O amplo espectro de manifestações clínicas da leishmaniose visceral canina (LVC) torna seu diagnóstico bastante complexo, já que essas manifestações podem se sobrepor àquelas causadas por outros agentes infecciosos. Fator agravante é que a infecção, na maior parte das vezes, tem caráter subclínico, podendo passar despercebida. Diante disto, um diagnóstico confiável se faz necessário para confirmar uma suspeita clínica ou infecção inaparente. A reação em cadeia da polimerase (PCR) tem contribuído em muito para o aumento da sensibilidade do diagnóstico, e seu uso mostra que a prevalência da infecção canina por L. (L.) infantum em áreas endêmicas pode ser bem maior do que a apontada pela sorologia. É sabido que um dos fatores limitantes do emprego de uma técnica diagnóstica em larga escala refere-se à coleta do material clínico que, idealmente, deve ser simples, rápida e indolor. Assim, entende-se que a associação da PCR com amostras não invasivas, de fácil coleta, poderia representar uma contribuição importante para o diagnóstico da LVC. Dessa forma, a proposta do presente projeto foi investigar o valor do swab oral (SO) na detecção de L. (L.) infantum em cães oriundos de áreas onde ocorre transmissão do parasito, através do uso da PCR em tempo real, considerada a mais sensível dentre as técnicas moleculares. Para tanto, comparamos sua positividade com a encontrada em outra amostra não invasiva (swab conjuntival= SC), pouco invasiva (sangue periférico= SG) e invasiva (aspirado de linfonodo=LN) e com a sorologia, considerando grupos clínicos, carga parasitária, índice de concordância entre os resultados, e a combinação dos resultados das diferentes amostras e a sorologia com aqueles obtidos no SO. Noventa e dois cães com comprovada infecção participaram do estudo. Os animais foram classificados em sintomáticos (n=63) e assintomáticos (n=29), de acordo com o exame físico e provas laboratoriais. No presente estudo a positividade do SO (67,4%) foi equivalente a do SC (68,5 %), maior do que a encontrada no SG (52,2%), e menor quando comparada ao LN (84,8%). Considerando os grupos clínicos, o SO foi positivo em 81 % dos cães sintomáticos e em 37,9 % dos assintomáticos. A positividade encontrada no SC também foi maior no grupo sintomático em relação ao assintomático (82,5 % x 37,9 %), assim como no LN (93,7 % x 65,5 %), mas não no SG (62,1 % x 47,6 %) e na sorologia (77,8 % x 79,3 %). Salienta-se que o SO foi positivo em 35 % dos cães com sorologia negativa (n=20), o SC em 35%, o SG em 40 %, o LN em 70 %, e OS+CS em 60% deles. A concordância dos resultados do SO foi moderada em relação à conjuntiva (k= 0,3) e fraca em relação às demais amostras e a sorologia (0.2 < k < 0.3). A carga parasitária do SO, por sua vez, não se diferiu da conjuntival, ambas foram maiores do que a encontrada no SG, e o LN apresentou a maior carga, mostrando uma clara correlação da intensidade do parasitismo com os índices de positividade obtidos. O LN mostrou o maior parasitismo entre as amostras analisadas. A combinação dos resultados do SO e SC atingiram 84 % de positividade nos 92 cães estudados, 92,1 % no grupo sintomático e 65,5 % no assintomático. Em suma, o presente estudo mostrou a presença do DNA de L. (L.) infantum no swab oral de cães infectados através da PCR em tempo real, revelando seu potencial uso no diagnóstico da LVC em cães com suspeita clínica dada a sua alta positividade nos animais com sintomatologia, equivalente à encontrada na amostra invasiva, o aspirado de linfonodo. Em oposição, encontrou-se baixa positividade nos cães assintomáticos, mas seu uso combinado com outra amostra não invasiva, a conjuntiva, atingiu patamares satisfatórios. O fato do SO ter sido positivo em parte dos animais soronegativos aponta vantagem adicional do seu uso na investigação de infecção por L. (L.) infantum em inquéritos epidemiológicos ou mesmo na rotina clínica. Por fim, os nossos resultados mostraram que a combinação de testes e amostras é necessária para a identificação de cães infectados por L. (L.) infantum, e que a PCR com o swab oral, especialmente associado ao swab conjuntival, pode contribuir de forma significativa para o diagnóstico da infecção canina, seja ela sintomática ou assintomática / Dog (Canis familiaris) is the major reservoir of Leishmania (L.) infantum. Its high competence for transmitting the parasite to the vector contributes to the maintenance of the cycle and for increasing risk to humans in endemic areas. The wide spectrum of clinical manifestations of canine visceral leishmaniasis (CVL) makes the diagnosis quite complex, since the symptoms can overlap those caused by other infectious agents. Of note, the infection is mostly subclinical, making the diagnosis even more difficult. Therefore, an accurate diagnosis is necessary to confirm a clinical suspicion or the silent infection. The polymerase chain reaction (PCR) has greatly contributed for increasing the diagnostic sensitivity, and its use shows that L. (L.) infantum canine infection in endemic areas may be much higher than that pointed by serology. It is known that one limiting factor of using a diagnostic method in large scale refers to the collection of clinical samples which should be ideally simple, quick, and painless. Thus, it is understood that the association of PCR with non-invasive samples could represent an important contribution to the diagnosis of CVL. Therefore, the purpose of this study was to investigate the value of the oral swab (OS) in detecting L. (L.) infantum in dogs from areas of parasite transmission through the use of real-time PCR that is considered the most sensitive among the molecular techniques. To this end, we compared the OS positivity with that found in other non-invasive (conjunctival swab = CS), minimally invasive (blood = BL) and invasive (lymph node aspirate = LN) samples and serology, considering clinical groups, parasite load, agreement among results, and the combination of results from different samples and serology with those obtained with OS. Ninety-two dogs with proven infection were selected for this present study. The animals were divided into symptomatic (n = 63) and asymptomatic (n = 29) dogs, according to the physical examination and laboratory tests. Here, the positivity in OS (67.4%) was equivalent to the CS (68.5%), higher than that found in BL (52.2%), and lower when compared to LN (84.8%). Regarding clinical groups, OS was positive in 81% of the symptomatic dogs and in 37.9% of asymptomatic ones. The positivity in CS was also higher in the symptomatic compared to the asymptomatic group (82.5% x 37.9%) and in LN (93.7% x 65.5%), but not in BL (62.1% x 47.6%) and serology (77.8% x 79.3%). Noteworthy, the OS was positive in 35% of dogs with negative serology (n = 20), CS in 35%, BL in 40% and LN in 70%. Moderate agreement was found between OS results and CS results (k = 0.3) and weak in comparison to other samples and serology (0.2 < k < 0.3). The parasite load was equivalent between OS and CS, both were higher than that found in BL, and LN presented the highest burden, showing that parasitism intensity and the positivity rates are correlated. The combination of OS and CS results reached 84% positivity in 92 dogs studied, 92.1% for symptomatic dogs and 65.5% for asymptomatic ones. In summary, the present study showed the presence of L. (L.) infantum DNA in oral swab of infected dogs by real-time PCR, revealing its potential use for diagnosing CVL in animals with clinical suspicion due to its high positivity in dogs with symptoms, equivalent to that found in invasive sample, the lymph node aspirate. In contrast, low positivity was found in asymptomatic dogs, but the combined use with other non-invasive sample, the conjunctiva, reached satisfactory levels. OS positivity found in part of the seronegative animals points additional advantage of using OS in the investigation of L. (L.) infantum infection in epidemiological surveys or in clinical practice. Finally, our findings pointed that combination of tests and samples is required for identifying dogs infected with L. (L.) infantum, and that the PCR with oral swab, especially associated with the conjunctival swab, can contribute for diagnosing both asymptomatic and symptomatic dogs